常用缓冲液配置.docx

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常用缓冲液配置

实验室常用缓冲液配置方案

１）1MＴris—ＨCl（pH７。

４,7.6,8.0）ﻫ组份浓度:

1M　Tｒｉs—HCl

配制量:

1L

配制方法:

　ﻫ1、称量1２1.1gTrｉs置于1　Ｌ烧杯中。

２.加入约800ml得去离子水,充分搅拌溶解、ﻫ3。

按下表量加入浓盐酸调节所需要得pH值、

PH值

浓ＨCl　

7、4

约70ml

７。

6

约60mｌ

８。

０

约42ml

4.将溶液定容至１L、

５。

高温高压灭菌后,室温保存。

注意:

应使溶液冷却至室温后再调定ｐH值,因为Trｉs溶液得pH值随温度得变化差异很大,温度每升高1℃,溶液得pH值大约降低0、03个单位。

ﻫ2）1０×TE　Ｂuffer（pH７。

4,7、6,　8、０）

组份浓度:

10０mMTris－ＨCl,　10mMＥDＴA

配制量:

１L

配制方法:

1。

量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1MＴｒis-ＨＣｌ　Buｆｆer（ＰH７。

４,7。

６,８、0）

１00ml

5０0mMＥDTA（PH8、0）　

20ｍl

2、　向烧杯中加入约8０0ml得去离子水,均匀混合、　ﻫ３。

将溶液定容至1　Ｌ后,高温高压灭菌、　

4。

室温保存、

3）１。

５　Ｍ　Tris-HＣl（pH８.8）ﻫ组份浓度:

1．5　ＭTｒｉｓ—HCl

配制量:

1L　

配制方法:

　ﻫ１、称量1８１．７gＴrｉs置于1L烧杯中。

２。

加入约80０　ml得去离子水,充分搅拌溶解。

3。

用浓盐酸调节pＨ值至8。

８。

ﻫ4、将溶液定容至1　L。

　ﻫ5。

高温高压灭菌后,室温保存。

注意:

应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tｒiｓ溶液得pH值随温度得变化差异很大,温度每升高1℃,溶液得pH值大约降低0。

0３个单位。

4）3M醋酸钠（pH5.2）ﻫ组份浓度:

3Ｍ醋酸钠ﻫ配制量:

１０0mlﻫ配制方法:

ﻫ1、称量４0.8g　NａＡc·3Ｈ2Ｏ置于1０0－２00ｍl烧杯中,加入月40ml得去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节ｐH值至５。

2ﻫ3、加去离子水将溶液定容至１０0mｌﻫ4高温高压灭菌后,室温保存。

5）PBSＢｕffｅrﻫ组份浓度:

1３7　ｍMＮaCｌ,2．７mMＫCl,１0ｍMＮa2HPＯ4,　2mMKＨ2PＯ4ﻫ配制量:

1　Lﻫ配制方法:

1、称量下列试剂,置于１L烧杯中。

ＮａＣl

８ｇ

ＫCl　

0。

2g

Nａ2HPO4　

1．42ｇ　

KH２ＰＯ４

０．27g

2、向烧杯中加入约800　mｌ得去离子水,充分搅拌溶解、ﻫ3。

滴加浓盐酸将pＨ值调节至7。

４,然后加入去离子水将溶液定容至1　L。

4、高温高压灭菌后,室温保存。

　ﻫ注意:

上述PBSBuffeｒ中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCａCl2与0.5mM　MgCl2。

ﻫ

６）10M醋酸铵　

组份浓度:

１0　M醋酸铵

配制量:

1０0ｍlﻫ配制方法:

　ﻫ1、称量77、1ｇ醋酸铵置于100～2０0　ml烧杯中,加入约３0ml得去离子水搅拌溶解。

2、加去离子水将溶液定容至10０ml。

３、使用0、22　mm滤膜过滤除菌。

4、　密封瓶口于室温保存。

ﻫ注意:

醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

７）苯酚／氯仿／异戊醇　（25:

24:

１）

配制方法:

1、说明:

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚／氯仿/异戊醇（25　:

２４:

　1）。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相得分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现得气泡。

2、　配制方法:

将Tris—HCl平衡苯酚与等体积得氯仿／异戊醇（24:

　1）混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

８）１0%（W/V）SDSﻫ组份浓度:

10％（W/V）SDSﻫ配制量:

10０mｌ

配制方法:

　ﻫ1。

称量10g高纯度得SDS置于1０0—２０0ml烧杯中,加入约8０mｌ得去离子水,６8℃加入溶解

2。

滴加浓盐酸调节pＨ值至7、2ﻫ３。

将溶液定容至10０mｌ后,室温保存。

ﻫ

９）２　N　NaOＨ

组份浓度:

2NNaOＨ

配制量:

1０0　ｍl

配制方法:

1。

量取8０ml去离子水置于100～200　mｌ塑料烧杯中（ＮaOＨ溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂）。

ﻫ２。

称取8g　ＮaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

3。

待NaＯＨ完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至10０ｍl。

ﻫ４.　将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

10）２.5N　ＨClﻫ组份浓度:

2、５NHCl

配制量:

１０0mlﻫ配制方法:

ﻫ1、在7８、４　mｌ得去离子水中加入21.6mｌ得浓盐酸（１1、6Ｎ）,均匀混合。

2。

室温保存。

１１）5　ＭNaＣl

组份浓度:

５M　NaＣlﻫ配制量:

1Ｌ

配制方法:

１。

称取292．2　g　NaＣl置于1　L烧杯中,加入约８0０ml得去离子水后搅拌溶解、ﻫ２、加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。

　ﻫ3。

　高温高压灭菌后,4℃保存。

ﻫ

11）20％（W/V）Gｌｕcｏseﻫ组份浓度:

20％（W/V）Gｌucｏｓe

配制量:

100mｌ

配制方法:

1。

称取20gGlucｏse置于1０0～20０ｍｌ烧杯中,加入约80　ml得去离子水后,搅拌溶解。

２。

加去离子水将溶液定容至10０ml。

3。

高温高压灭菌后,4℃保存。

12）Sｏlution　I（质粒提取用）

组份浓度:

25ｍMＴris-ＨCl（pH8、0）,10　mＭ　ＥDTA,50mＭ　Ｇlｕｃoｓe

配制量:

1L　

配制方法:

ﻫ1.量取下列溶液,置于１　L烧杯中。

１M　Ｔris—HＣl（ＰＨ8。

０）

25ｍl　

０。

５MEDＴA（PＨ８、0）　

20ml

２０%Gluｃｏse（１。

1１M）　

45mｌ

dH２Ｏ

９１0mｌ　

2、高温高压灭菌后,4℃保存。

ﻫ３。

　使用前每５０mｌ得Ｓoluｔion　I中加入２ml得RNaｓeA（20ｍg/ml）。

１3）SolｕtｉonＩI（质粒提取用）ﻫ组份浓度:

200mＭNａOＨ,１％（W/Ｖ）SＤＳﻫ配制量:

5００mｌﻫ配制方法:

ﻫ1。

量取下列溶液,置于５０0ｍl烧杯中

10％SＤS50mｌﻫ２NNaOH50mlﻫ２、加灭菌水定容至5０0ｍl,充分混匀ﻫ3、室温保存,此溶液保存时间最好不要超过一个月　ﻫ注意:

SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌

14）SolutｉoｎIＩＩ（质粒提取用）

组份浓度:

３ＭKOAc,5MCH3ＣＯＯHﻫ配制量:

50０ml

配制方法:

１。

称量下列试剂,置于50０ml烧杯中。

KOＡc                 

1４７g 　

CH3COＯH

５７、5ml　

２。

加入３00ml去离子水后搅拌溶解、

３、加去离子水将溶液定容至５0０mｌ。

4。

高温高压灭菌后,4℃保存。

15）０。

5MＥDTA（pＨ8。

0）

组份浓度:

0。

５MEDTA

配制量:

1L　ﻫ配制方法:

称取186、1gＮa2EDTＡ·2Ｈ2O,置于1　L烧杯中。

２、加入约8０0ｍl得去离子水,充分搅拌。

　ﻫ3。

用NaOH调节pH值至8。

0（约20g　NaOＨ）、ﻫ注意:

pＨ值至8、0时,EDTＡ才能完全溶解。

ﻫ4.加去离子水将溶液定容至1Ｌ。

5。

适量分成小份后,高温高压灭菌、　ﻫ6。

　室温保存。

16）1ＭＤTT

组份浓度:

１　MDTＴﻫ配制量:

2０mｌﻫ配制方法:

ﻫ1、　称取３。

09g　ＤTT,加入到５0ｍl塑料离心管内。

２。

加20mｌ得０。

０１M　NaOAc（pH5。

2）,溶解后使用0、22ｍｍ滤器过滤除菌。

ﻫ3。

适量分成小份后,—2０℃保存。

17）1０ｍM　ATP

组份浓度:

１0mMAＴPﻫ配制量:

2０mlﻫ配制方法:

1。

称取121mgＮａ2ＡＴP·3H2O,加入到５0ml塑料离心管内、ﻫ2、加２０ml得25mMTris—HＣｌ（pＨ8.０）,搅拌溶解、　

3、适量分成小份后,—20℃保存。

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidiｎe）:

溶解2.55ｇ亚精胺于足量得水中,使终体积为1０ml。

分装成小份贮存于—20℃。

1ｍｏｌ/L精胺（Spｅrmine）:

溶解3.48g精胺于足量得水中,使终体积为1０ml、分装成小份贮存于－２0℃。

10moｌ/L乙酸胺（amｍｏnｉｕmacetaｔe）:

将７7．1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22ｕm孔径得滤膜过滤除菌。

10mｇ/ml牛血清蛋白（ＢＳA）:

加１０0ｍg得牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶）于9。

5ｍｌ水中（为减少变性,

须将蛋白加入水中,而不就是将水加入蛋白）,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到１０ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

1mｏl/L二硫苏糖醇（DTT）:

在二硫苏糖醇5ｇ得原装瓶中加32.4mｌ水,分成小份贮存于－2０℃。

或转移１００mg得二硫苏糖醇

至微量离心管,加0、65ｍl得水配制成1moｌ/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/Ｌ乙酸钾（ｐｏtａｓsiuｍａceｔaｔe）:

溶解７8．５g乙酸钾于足量得水中,加水定容到100ml。

1mol／L氯化钾（KCｌ）:

溶解7.４6g氯化钾于足量得水中,加水定容到100ml、

3ｍｏｌ/L乙酸钠（sodiｕmacetaｔe）:

溶解40．8g得三水乙酸钠于约90mｌ水中,用冰乙酸调溶液得pH至5、2,再加水定容到100ml。

0。

5mｏl/LEDTA:

配制等摩尔得Na2ＥDTＡ与NaＯＨ溶液（0。

5mｏl/L）,混合后形成EDTA得三钠盐。

或称取１８６.1g得Ｎａ2EＤTA·2Ｈ2O与20g得NaOＨ,并溶于水中,定容至1L。

1mol/LHEPES:

将23.8ｇHEPES溶于约90mｌ得水中,用NaOH调pＨ（6。

８－8.２）,然后用水定容至100ml、

１mol／Ｌ　HCl:

加8。

6ml得浓盐酸至91.４mｌ得水中。

２5mg/mlIPGT:

溶解2５０mg得IＰGT（异丙基硫代－β-D－半乳糖苷）于10ml水中,分成小份贮存于-２0℃。

1mol/LMgＣｌ２:

溶解２0。

3gＭgＣl2·6H2O于足量得水中,定容到１0０ml、

100ｍmol/L　ＰMＳF:

溶解174ｍg得ＰMSF（苯甲基磺酰氟）于足量得异丙醇中,定容到１0ｍl、分成小份并用铝箔将装液管包裹ﻫ或贮存于－20℃。

20ｍｇ／mｌ蛋白酶Ｋ（proteinaｓe　K）:

将200ｍｇ得蛋白酶L加入到９.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到１0ｍｌ,然后分装成小份贮存于-20℃。

１0mg／ｍlRnaｓe（无DNase）（DNａse－freｅRNase）:

溶解10ｍｇ得胰蛋白RNＡ酶于1ml得１0mmol／Ｌ得乙酸钠水溶液中（pH5。

0）。

溶解后于水浴中煮沸15ｍiｎ,使DＮA酶失活、用1moｌ/Ｌ得Ｔriｓ－HCl调pH至7。

5,于－20℃贮存、（配制过程中要戴手套）

5mｏl/L氯化钠（NaCl）:

溶解29.2g氯化钠于足量得水中,定容至100ml。

１0N氢氧化钠（NaOH）:

溶解40０ｇ氢氧化钠颗粒于约0。

９Ｌ水得烧杯中（磁力搅拌器搅拌）,氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10%SDS（十二烷基硫酸钠）:

称取100gSDＳ慢慢转移到约含0.９L得水得烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2ｍoｌ/Ｌ山梨（糖）醇（Sｏrbitol）:

溶解36。

４ｇ山梨（糖）醇于足量水中使终体积为1０0ｍｌ。

1０0%三氯乙酸（TＣA）:

在装有50０ｇＴCA得试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2。

5％　Ｘ-gal（5－溴—4-氯-3－吲哚－β-半乳糖苷）:

溶解25mg得Ｘ—ｇaｌ于1mｌ得二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管,贮存于—20℃。

１0０×Deｎhaｒdｔ试剂（Denhardｔ＇ｓrｅｇenｔ）

成分及终浓度　

配制100mｌ溶液各成分得用量

2％聚蔗糖（Ficoll,４00型）ﻫ2％聚乙烯吡咯烷酮（PVP－40）　

2％ＢSA（组分V）　

水　

2g　ﻫ2g　ﻫ2ｇ

加水至总体积为100ｍｌ　

依照上表称取各组分,溶于水中定容。

过滤除菌及杂质,分装成小份于-２0℃贮存。

１０×标准ＤＮＡ连接酶缓冲液（staｎdａrｄDNAlｉgaｓeｂuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制1０mｌ溶液各成分得用量

０、5mol/LTrｉs-HＣl

1０0mｍol/LMgCl2

10０mmｏl／LDTＴﻫ2ｍmol/ＬATP

5ｍmoｌ/L盐酸亚精胺（可选）

0.５mg/ｍlBSA（组分V）（可选）ﻫ水

5ml1mol／L　贮液

1ml１ｍol／L贮液

1ml1moｌ／L　贮液

200ｕl１0０ｍｍol／L贮液　ﻫ50ｕl1mｍｏl/Ｌ　贮液

０.5ｍl1０mｇ/mL贮液ﻫ２、25ml

ﻫ将配制好得缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。

100mｍｏl/LdＮTP　溶液（ｄＮTPsolｕtiｏnｓ）ﻫ可以购买到1０0ｍｍol/L纯dNTPｓ贮液,-80℃可贮存至少6个月。

10ｍmol/L　dNTP混合液

成分及终浓度

配制20ｕl溶液各成分得用量

1０mmoｌ/Ｌ　dAＴPﻫ10mｍol／L　ｄCTP

10mmoｌ/LｄGTPﻫ１0mmoｌ/LdＴTP

水

2ul10０　ｍmol/ＬdATP贮液

２ul100　mmoｌ/LdCTP贮液ﻫ２ｕl１０0mｍol/LdGＴP　贮液

2ul10０ｍｍol/LdTTＰ贮液ﻫ12ｕl

20%PEG　８０００/2。

５MNaＣl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分得用量

质量浓度为20％聚乙二醇ﻫ2。

5moｌ/L　氯化钠

水　

2０ｇﻫ50ml5　moｌ/L氯化钠　或１４。

６g固体氯化钠　

补足10０ml

加聚乙二醇于含有氯化钠得烧杯中,加水至终体积１00ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SＳC

成分及终浓度

配制1Ｌ溶液各成分得用量

3０0mmoｌ/L柠檬酸三钠（二水）　

3ｍoｌ／L氯化钠

水　

88。

2gﻫ17５．３g

补足1L　

溶解柠檬酸三钠（二水）与氯化钠于约０。

9L水中,加几滴１0ＮNａOＨ溶液调pH为7.0,用水补足体积至1Ｌ、

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ｕｌＤEPＣ于１00ｍl水中,使DＥPＣ得体积分数为0。

1%。

在３7℃温浴至少12h,然后在15　psi条件下高压灭菌20min,以使残余得DＥＰＣ失活。

DEPＣ会与胺起反应,不可用ＤEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionｉzedｆｏrmamide）ﻫ直接购买或加DｏｗexXG8混合树脂于装有甲酰胺得玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌１ｈ,可去除甲酰胺中得离子、经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存（防止氧化）、

磷酸缓冲液（ｐhospｈateｂuffｅr）ﻫ按照下表所给定得体积,混合1mol／Ｌ得磷酸二氢钠（单碱）与1mol/L　磷酸氢二钠（双碱）贮液,获得所需pH得磷酸缓冲液、配制1ｍol/Ｌ得磷酸二氢钠（NaH2PO４·H２O）贮液:

溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1ｍoｌ/L磷酸氢二钠（Na２HPＯ4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1ｍol／Ｌ

磷酸二氢钠（ml）

1mol/L

磷酸氢二钠（ml）

最终pＨ值

877

８50ﻫ8１5ﻫ775

７3５ﻫ68５

６25ﻫ５6５ﻫ510

４5０

３90

330

280

１2３ﻫ1５0

185ﻫ２2５

2６5

3１５ﻫ375ﻫ43５ﻫ490

55０

６10

670ﻫ7２0

6、０

6。

1ﻫ６。

２ﻫ6、３

6、4ﻫ6。

5ﻫ6.６

6。

7

6.8

6.9ﻫ7.0ﻫ7、1ﻫ7、２

TE（用于悬浮与贮存DNA）

成分及终浓度

配制１00ml溶液各成分得用量

１0mmｏl/L　Tris—HCl

１ｍｍｏl/L　EDTA

水

１ｍl　１ｍｏl/ＬTriｓ－HCl（pＨ７。

4-8。

0,2５℃）

20０ul０.5mol/LEＤTA（pH8。

0）　ﻫ9８、8ｍl

Tris缓冲液（Tｒis-HCｌｂuｆfer）

将１2１g得Ｔris碱溶解于约０.9Ｌ水中,再根据所要求得ｐＨ（２5℃下）加一定量得浓盐酸（11.6N）,用水调整终体积至1L。

浓盐酸得体积（ml）

pＨ

8、6

14ﻫ21ﻫ28.5ﻫ38

4６ﻫ56

６6

71、３

76

9、0ﻫ8.8ﻫ8。

6ﻫ8。

4

８、2

8.0ﻫ7.８

7、6

7.4

7。

2

二。

电泳缓冲液、染料与凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Triｓ－乙酸（ＴAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分得用量

2mol/LＴris碱

1mol／L乙酸　

100　mmoｌ/L　EDTA

水

242g　ﻫ57.１ｍl得冰乙酸（17、4mol/L）ﻫ20０mｌ得0。

5mol/LEDＴＡ（pＨ　8、0）　

补足１L　

5×Triｓ－硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分得用量　

4４5ｍｍoｌ/LTｒｉs碱　

４45　ｍmｏl/L硼酸盐ﻫ10　ｍmｏl／L　ＥＤTA

水

54g　ﻫ27．5g　硼酸

2０　ml得0.5　mｏl/LEＤTA（pH８、0）ﻫ补足1L　

染料

1％溴酚蓝（bromoｐｈenｏｌ　blｕe）　

加1g水溶性钠型溴酚蓝于１00ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xyｌene　ｃyanolｅFF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到１00ml。

10ｍg/ml得溴化乙锭（ethidiｕmbｒomidｅ）ﻫ小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加10０mｌ水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管,于４℃贮存、

凝胶上样液（ｇeｌloadingsolutｉons）ﻫ6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制１0ml溶液各成分用量

0.3N　氢氧化钠

6mmoｌ/LEDＴA

18％聚蔗糖（４０0型）

0、15%溴甲酚绿　ﻫ０。

2５％二甲苯青FFﻫ水

３０0ul　10N氢氧化钠ﻫ１20ｕl0、５mｏｌ/L　ＥDTA（ｐH8、0）

１.８ｇﻫ15mg

25mｇﻫ补足到10ｍl

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度　

配制10mｌ溶液各成分用量

０.１5％溴酚蓝ﻫ0.15％二甲苯青ＦF

5　mｍol/Ｌ　EDTＡ

15%聚蔗糖（４00型）

水

１、５ml1%溴酚蓝　

1。

５ml1％二甲苯青FF

100ul0。

5ｍol/LEDＴＡ（pＨ８.０）ﻫ1.5ｇﻫ补足到10ｍl

６×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10mｌ溶液各成分用量

0、2５％溴酚蓝　

0、25%二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）ﻫ水

２.5ml1％溴酚蓝ﻫ2、5ml1％二甲苯青FFﻫ1.5g　

补足到1０ml　

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

配制1０ml溶液各成分用量

0。

15%溴酚蓝ﻫ0.1５％二甲苯青ＦF

5mmoｌ／ＬEDTＡﻫ50％甘油　ﻫ水

1、５ｍl1%溴酚蓝

1、5mｌ1％二甲苯青ＦFﻫ10０ｕl０。

5moｌ/LEDTＡ（pH８、0）

３mｌ

3。

9ｍl

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.1５%溴酚蓝

０、15％二甲苯青FF

5mmｏｌ／ＬEDTAﻫ40％聚蔗糖　

水

1、5mｌ1%溴酚蓝ﻫ1、5ml1％二甲苯青FFﻫ100ul0、５mｏl／LEＤＴA（pＨ8。

０）ﻫ４g

补足到１0ml

１0×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ｍl溶液各成分用量

0、2％溴酚蓝

0、２％二甲苯青FFﻫ２00mmol/L　EDＴAﻫ0。

1％SDSﻫ50%甘油

水

２0ｍg

２0mgﻫ４ml０。

5mol/L　EDTA（pH8、0）

100uｌ　10％ＳＤSﻫ5mlﻫ补足到10ml　

三.常用培养基

1）　LB培养基ﻫ将下列组分溶解在0．9L水中:

蛋白胨

1０g

酵母提取物

5g

氯化钠

1０g　

如果需要用１NNaOH（～1ml）调整pH至7。

0,再补足水至1L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉７g/Ｌ。

SOＢ培养基ﻫ将下列组分溶解在0。

9Ｌ水中:

蛋白胨

２0ｇ

酵母提取物　

5g　

氯化钠

0．5g

1　ｍol／L氯化钾

2。

5ml

ﻫ用水补足体积到１Ｌ。

分成1０0ｍｌ得小份,高压灭菌。

培养基冷却到室温后,再在每100ml得小份中加1ml灭过菌得1mol／L氯化镁。

2）SOC培养基ﻫ成分、方法同SＯB培养基得配制,只就是在培养基冷却到室温后,除了在每100mｌ得小份中加1ｍl灭过菌得1mol/L氯化镁外,再加２ml灭菌得1mｏl／Ｌ葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到1０0ml,用0。

22um得滤膜过滤除菌）。

3）TB培养基　

将下列组分溶解在0．9Ｌ水中:

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g　

甘油　

4ml

各组分溶解后高压灭菌、冷却到60℃,再加10０ｍl灭菌得１70mｍol/Ｌ　KH２PO４／0。

72moｌ／LＫ2HＰＯ4得溶液（２。

31g得KH2ＰO4与12。

54ｇK２ＨPＯ4溶在足量得水中,使终体积为１00ml。

高压灭菌或用0.２２uｍ得滤膜过滤除菌）、

4）2×YT培养基　

将下列组分溶解在0.9L水中:

蛋白胨

１6g

酵母提取物

10ｇ

氯化钠

4ml

如果需要用1N　NaＯH（～1ｍl）调整ｐH至7。

０,再补足水至１L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉1２ｇ/Ｌ,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L、

5）YPD培养基　ﻫ将下列组分溶解在0.9Ｌ水中:

蛋白胨　

20ｇ　

酵母提取物

10g　

葡萄糖

20ｇ

用水补足体积为1L后,高压灭菌。

建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1、6g色氨酸,因为ＹPD培养基就是色氨酸限制型培养基。

为