医学治疗前列腺论文 精品.docx

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前言

前列腺增生症即良性前列腺增生（benignprostatichyperplasia，BPH），亦称前列腺肥大，是一种因前列腺明显增大而影响男性健康的常见疾病，系成年男性泌尿生殖系统疾病中多发病之一。

前列腺增生症以进行性尿频、排尿困难为临床特点。

BPH的病因和发病机理研究颇多，但至今未能十分明确，目前较为肯定是本病发生必须具备2个条件：

高龄和具备正常功能睾丸的存在。

目前BPH发病机理主要学说有：

双氢睾酮（DTH）学说、雌—雄激素协同学说、间质—上皮细胞相互作用学说、胚胎再唤醒学说、干细胞学说等[1,2]。

在中医理论中，一般把BPH归属为“癃闭”范畴，病机特点为本虚标实，本虚是指肾虚气弱，涉及肾、肺、脾三脏；标实主要指淤血蓄结和膀胱潴留的水湿，涉及膀胱之腑。

而肾虚血淤是BPH的基本病因。

BPH的治疗方法颇为庞杂，文献报道丰富，但不外药物和手术两种。

手术目的是解除梗阻，目前手术方法也较多，疗效较为可靠。

但这种方法损伤性大，恢复期长，而近来的采用经尿道前列腺摘除术，技术难度大，摘除不彻底，且由于老年人多伴有不同程度的心脑血管疾病及心肺功能不全，手术治疗合并症较多，危险性也大。

另外，目前国内外对前列腺免疫功能的研究表明[3,4]，前列腺能够产生多种免疫球蛋白，可以合成具有抗菌作用的含锌多肽，且有保护生殖系统免遭细菌和其它病原微生物侵袭的局部免疫功能，故有人主张应尽量保留。

其他外科治疗方法BPH中，注射疗法效果不稳定，复发率高，注射部位疼痛，且易引起注射部位感染，故不易推广；冷冻治疗的深度与广度不易控制，易产生并发症；激光治疗对前列腺增生消除不彻底，复发率高；微创和射频的生物热效应疗效不满意。

因此，药物治疗BPH变得十分重要。

药物治疗旨在减轻或缓解BPH患者的病情。

目前用于治疗BPH的西药主要由以下两类：

（1）α受体阻滞剂，主要作用机理是降低前列腺和尿道平滑肌的张力及前列腺尿道的压力，从而解除了因BPH引起的膀胱出口梗阻（BOO）的动力学因素，改善梗阻症状，可用于早期的前列腺增生症，但有头痛，心悸，眩晕，体位低血压及药物依赖性等副作用。

（2）5α还原酶抑制剂，可以降低前列腺组织中的DHT水平，不仅使前列腺不再继续增生，还可以使其体积缩小但对性功能影响较大，常有阳痿、性欲下降、射精量减少等。

且以上两种药物起效慢，需长期服用，并且价格昂贵，一般患者难以承受。

因此，寻求费用低、安全有效的治疗方法非常必要。

中医药在治疗BPH方面积累了丰富的经验。

近年来，中药治疗BPH的研究日益受到重视。

主要有：

单味中药治疗，中草药复方制剂，中药特殊疗法，以及植物类药物及花粉提取物的治疗。

尤其是具有补肾活血作用的中草药和中药复方较多地被用于临床。

本课题的研究对象是益肾克癃方，其来源于名老中医的临床验方。

由马鞭草、玄参、丹参、生首乌等药组成。

马鞭草味苦性凉，入肝、脾、肾经，具有活血消淤、清热解毒及利水消肿的功能[5]。

玄参为君药，其活性成分具有补肾虚、泻火、改善微循环和毛细血管通透性、保肝及免疫促进等功能[6]。

臣药丹参主要活性成分具有抗心血管疾病、治疗肝肾疾病、抗呼吸系统疾病、抗肿瘤、影响免疫、抗氧化等作用[7]。

臣药何首乌具有抗衰老、降血脂、降低血小板与红细胞聚集、抗炎、镇痛等作用[8]。

临床应用表明，本方治疗前列腺增生有显著的疗效，并能改善由前列腺增生引起的并发症。

本课题组将通过药理学实验，对益肾克癃方的药效学进行验证，并在此基础上初步探讨其抗前列腺增生作用的作用机理，以期为益肾克癃方的进一步研究和前列腺增生症的治疗提高可靠的依据。

第一部分益肾克癃方抗实验性小鼠前列腺增生作用的研究

一材料与方法

（一）实验动物

健康清洁级雄性ICR小鼠（18~22g）由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：

SCXK（浙）2003-0001

（二）药材与化学试剂

1药材

马鞭草：

药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定为马鞭草科植物马鞭草VerbenaofficinalisL.的地上部分，符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

玄参：

药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定为玄参科植物玄参ScrophularianingpoensisHernsl.的干燥根，符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

何首乌：

药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunbl.的干燥块根，符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

处方中其他药材均购自浙江浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定均符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

2药品与化学试剂

爱普列特（EpristerideTablets），江苏联环药业股份有限公司，批号：

20100901

丙酸睾酮注射液（TP），上海通用药业股份有限公司，批号：

100401

95%乙醇（分析纯），杭州长征化工厂，批号：

20051014

氯化钠（分析纯），上海试四赫维化学试剂有限公司，批号：

081014

酸性磷酸酶（ACP）试剂盒，上海复星长征医学科学有限公司，批号：

P100550

橄榄油（分析纯），国药集团化学试剂有限公司，批号：

F20070625

（三）实验仪器

电子天平：

AB104-N型，瑞士METTLERTOLEDO公司

离心机：

80-2B型，上海安亭科学仪器厂

自动双重纯水蒸馏器，D1810C，上海申胜生物科技有限公司

电子调温电热套：

98-1-B型，天津市泰斯特仪器有限公司

半自动生化仪：

738PLUS型，上海安泰分析仪器有限公司

旋转蒸发仪：

BÜCHIRotavaporR-200型，瑞士BÜCHI公司

旋转蒸发仪：

BÜCHIRotavaporR-220型，瑞士BÜCHI公司

SENCO-W201恒温水浴锅：

上海申生科技有限公司

AHZ-D循环水式真空泵：

巩义市英峪予华仪器厂

DLSB-10130低温冷却循环泵：

巩义市京华仪器有限公司

电热恒温鼓风干燥箱：

DHG-9140型，上海一桓科技有限公司

超声波清洗器：

KQ5200，昆山市超声仪器有限公司

小鼠灌胃器、1ml注射器、烧杯、量筒等

（四）实验方法

1药物的制备

（1）取三个处方量药材，加12倍量的水，提取三次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至一定浓度，加入95%乙醇至乙醇浓度为60%，放置12小时后，滤过，滤液减压浓缩至无醇味后，加水稀释至一定浓度。

（2）爱普列特50mg，加水至200ml，配成0.25mg/ml的溶液。

（3）丙酸睾丸酮注射液（25mg/ml）10ml，加橄榄油至100ml，配成2.5mg/ml的溶液。

2动物分组、造模[9]和给药

60只ICR小鼠常规饲养熟悉一周后，按体重随机分为5组，每组12只；模型组、阳性组和2个剂量组小鼠每日皮下注射丙酸睾酮的橄榄油溶液5mg/kg进行造模，连续21天；同时灌胃给药：

阳性对照组灌胃给予爱普列特[10]5mg/kg，高剂量组灌胃给予水提醇沉样液39g/kg，低剂量组灌胃给予水提醇沉样液19.5g/kg，同时空白组和模型组灌胃给予生理盐水，1次/d，连续21d。

3观察指标及测定方法

（1）小鼠一般情况的观察

每天观察小鼠的一般情况，包括饮食变化，行为（自主活动，精神状态），毛发变化及排尿情况。

（2）对小鼠前列腺湿重及指数的测定

于末次次给药24h后，摘眼球取血，并立即摘取前列腺，称得湿重，测定各组的前列腺湿重和前列腺指数（前列腺重量/小鼠体重×1000）。

（3）血清中总酸性磷酸酶（ACP）水平的测定[11]

取血后静置30min，血液凝固后，于4000转/分离心10分钟，取上层血清，按试剂盒操作，应用半自动生化仪测定ACP水平。

酸性磷酸酶

a：

测定原理

α－磷酸萘酚+水α－萘酚+磷酸

α－萘酚+固红TR重氮色素

上述反应中，重氮色素的生成速率与样本中酸性磷酸酶活力成正比。

通过在405nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中酸性磷酸酶的活力。

b：

计算方法：

酸性磷酸酶（U/L）=（△A/min×TV×1000）/（12.9×SV×P）

式中△A/min=每分种半自动生化仪读出吸光度值的差值

TV=总反应体积（ml）

SV=样本体积（ml）

12.9=重氮色素在405nm处的毫摩尔吸光系数

P=比色杯光径（cm）

4统计学处理

数据以

±S表示，用t-test检验差异的显著性。

二结果

（一）小鼠的一般情况

空白组小鼠较温顺，毛色光泽；模型组与各给药组部分小鼠毛发蓬松，且有部分出现皮肤肿胀（连续皮下给予丙酸睾酮所致）；从垫料的干湿程度观察，模型组和给药组较空白组湿得快，且模型组较给药组湿得快；进食量及饮水量各组间无明显区别。

（二）对小鼠前列腺湿重及前列腺指数的影响

结果表明，与空白组比较，前列腺湿重和前列腺指数有显著性差异（P<0.05），说明造模成功；与模型组比较，益肾克癃方水提醇沉样液高剂量组和低剂量组前列腺湿重和前列腺指数均有下降，其中高剂量组差异具有显著性差异（P<0.05）。

详见表1-1。

表明益肾克癃方有抗前列腺增生的作用。

表1-1对小鼠前列腺湿重及前列腺指数的影响（

±S，n=12）

组别

剂量

（g/kg）

最初体重

（g）

最后体重

（g）

前列腺湿重

（mg）

前列腺指数

（mg/g）

空白组

—

24.10±1.73

32.67±1.85

82.37±8.51

2.52±0.24

模型组

—

25.47±1.01

32.87±1.70

104.98±12.59**

3.20±0.40**

爱普列特组

0.005

23.90±0.73

32.32±1.34

100.21±17.82**

3.12±0.56**

高剂量组

39

25.25±1.68

34.24±1.85

90.93±20.11#

2.66±0.59#

低剂量组

19.5

24.54±0.96

32.90±1.48

95.98±20.85*

2.93±0.74*

注：

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

（三）对小鼠血清中总酸性磷酸酶（ACP）水平的影响

实验动物血液中ACP的组织来源为前列腺、脾、肝、胃、肾、红细胞、白细胞、血小板，但前列腺ACP含量高于其他组织数百倍。

结果表明，与模型组比较，益肾克癃方水提醇沉样液高剂量组和低剂量组血清中ACP水平均有明显下降（P<0.05）。

详见表1-2。

表1-2对小鼠血清中ACP的影响（

±S，n=12）

组别

剂量（g/kg）

ACP（U/L）

空白组

—

3.38±1.24

模型组

—

4.15±0.97

爱普列特组

0.005

2.95±0.80##

益肾克癃方高剂量组

39

2.77±1.00##

益肾克癃方低剂量组

19.5

3.33±0.92#

注：

与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

三分析与讨论

良性前列腺增生（benignprostatehyperplasia,BPH）,是中老年男性的一种常见疾病，发病率随年龄增大而升高。

据报道50岁以上男性BPH发病率超过50%，病理性BPH发病率几乎达标100%[12]。

关于BPH的治疗分为药物治疗、手术治疗和非手术介入治疗。

药物治疗主要是针对尿路梗阻的两大因素即动力因素和静力因素，从而减轻或缓解BPH患者的病情，药物治疗可分为α-受体阻断剂，雄激素抑制剂及其他药物等。

一般来说α-受体阻断剂主要用于前列腺腺体、前列腺包膜及膀胱颈部的平滑肌肌张力增加引起的不同程度的梗阻症状即动力因素。

而雄激素抑制剂例如5α-还原酶抑制剂主要用于因前列腺体积增大引起的BPH即静力因素。

爱普列特为选择性的和非竞争性的类固醇Ⅱ型5α-还原酶抑制剂，用于治疗良性前列腺增生症，其作用机理是通过抑制睾酮转化为双氢睾酮而降低前列腺腺体内双氢睾酮的含量，导致增生的前列腺萎缩。

但其不良反应较多，可见恶心、食欲减退、腹胀、腹泻、口干、头晕、失眠、全身乏力、皮疹、性欲下降、勃起功能障碍、射精质量下降、耳鸣、耳塞、髋部痛等。

中药在治疗前列腺增生方面积累了丰富的经验，在辨证审因的基础上选择合适的药物，并按照一定的配伍组成原则组成的复方具有化学成分多样、药理作用多层次多靶点的特点，使其不仅对前列腺增生症有显著的疗效，还能改善由前列腺增生引起的并发症。

前列腺增生症是由前列腺组织病理性增大而导致的疾病，正常人体前列腺横径约4厘米，纵径约3厘米，前后径2厘米，前列腺重量约20克。

当发生前列腺增生时，前列腺的体积变大，横径、纵径及前后径均有不同程度的增大，重量增加至40克以上，有的可达200克。

随着前列腺体积的增大，压迫膀胱及尿道，产生排尿困难，尿频，尿潴留等症状[13]。

选择测量前列腺组织的湿重、指数，可以直观地显示出前列腺组织增大的情况。

益肾克癃方高、低剂量组与模型组比较，能明显抑制实验小鼠前列腺的增生，前列腺湿重和前列腺指数显著降低，同时能显著降低模型小鼠血清中酸性磷酸酶的水平。

四小结

本实验采用丙酸睾丸酮诱导形成实验性小鼠前列腺增生模型，以前列腺湿重、前列腺指数和血清中ACP为评价指标，对益肾克癃方的疗效进行初步评价。

结果表明益肾克癃方具有较好的抗实验性小鼠前列腺增生作用，能显著降低模型小鼠前列腺湿重、前列腺指数和血清中ACP水平。

第二部分益肾克癃方抗去势大鼠前列腺增生作用及其作用机制初步研究

实验一益肾克癃方抗去势大鼠前列腺增生作用研究

一材料与方法

（一）实验动物

健康清洁级雄性SD大鼠（180~220g），由浙江中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：

SCXK（浙）2003-0001

（二）药材与化学试剂

1药材

马鞭草：

药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定为马鞭草科植物马鞭草VerbenaofficinalisL.的地上部分，符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

玄参：

药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定为玄参科植物玄参ScrophularianingpoensisHernsl.的干燥根，符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

何首乌：

药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定为蓼科植物何首乌PolygonummultiflorumThunbl.的干燥块根，符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

处方中其他药材均购自浙江浙江中医药大学中药饮片厂，经浙江中医药大学张如松教授鉴定均符合《中国药典》2005版一部有关项下的要求。

2药品与化学试剂

爱普列特（EpristerideTablets），江苏联环药业股份有限公司，批号：

20100901

丙酸睾酮注射液（TP），上海通用药业股份有限公司，批号：

100401

普乐安胶囊（前列康），浙江康恩贝制药股份有限公司，批号：

100615

95%乙醇（分析纯），杭州长征化工厂，批号：

20051014

氯化钠（分析纯），上海试四赫维化学试剂有限公司，批号：

081014

酸性磷酸酶（ACP）试剂盒，上海复星长征医学科学有限公司，批号：

P100550

橄榄油（分析纯），国药集团化学试剂有限公司，批号：

F20070625

水合氯醛（分析纯），上海试四赫维化学试剂有限公司，批号：

071014

注射用青霉素钠，江西东风药业股份有限公司，批号：

100302-2

氯化钠注射液，杭州民生药业集团有限公司，批号：

40908274

甲醛溶液（分析纯），衢州巨化试剂有限公司，批号：

20080403

（三）实验仪器

电子天平：

AB104-N型，瑞士METTLERTOLEDO公司

离心机：

80-2B型，上海安亭科学仪器厂

自动双重纯水蒸馏器，D1810C，上海申胜生物科技有限公司

电子调温电热套：

98-1-B型，天津市泰斯特仪器有限公司

半自动生化仪：

738PLUS型，上海安泰分析仪器有限公司

旋转蒸发仪：

BÜCHIRotavaporR-200型，瑞士BÜCHI公司

旋转蒸发仪：

BÜCHIRotavaporR-220型，瑞士BÜCHI公司

冰箱：

HR-231CRY型，杭州华日电冰箱有限公司

SENCO-W201恒温水浴锅：

上海申生科技有限公司

AHZ-D循环水式真空泵：

巩义市英峪予华仪器厂

DLSB-10130低温冷却循环泵：

巩义市京华仪器有限公司

电热恒温鼓风干燥箱：

DHG-9140型，上海一桓科技有限公司

超声波清洗器：

KQ5200，昆山市超声仪器有限公司

大鼠灌胃器、5ml注射器、烧杯、量筒等

（四）实验方法

1药物的制备

（1）取23个处方量药材，加12倍量的水，提取三次，每次1小时，过滤，滤液减压浓缩至一定浓度，加入95%乙醇至乙醇浓度为60%，放置12小时后，滤过，滤液减压浓缩至无醇味后，加水稀释至一定浓度。

（2）爱普列特500mg，加水至1000ml，配成0.5mg/ml的溶液。

（3）前列康70g，加水至1000ml，配成0.07g/ml的溶液。

（4）丙酸睾丸酮注射液（25mg/ml）120ml，加橄榄油至1200ml，配成2.5mg/ml的溶液。

2动物分组、造模[14]和给药

70只SD大鼠常规饲养熟悉一周后，选取10只作为空白组，其余60只造模，每只腹腔注射10%的水合氯醛溶液0.7ml，常规消毒皮肤，于无菌条件下，空白组做假手术处理，造模组经阴囊摘除双侧睾丸，残端处结扎，以确保止血，缝合皮肤，肌肉注射青霉素20万u/kg。

选取造模后的大鼠50只，随机分为5组，分别为模型组、爱普列特组、前列康组、益肾克癃方高剂量组、益肾克癃方低剂量组。

从去势第8天起，造模组大鼠每日皮下注射丙酸睾酮的橄榄油溶液5mg/kg/d，连续30天；

从去势第8天起，爱普列特组灌胃给予爱普列特5mg/kg，前列康组灌胃给予0.7g/kg，高剂量组灌胃给予水提醇沉样液29.3g/kg，低剂量组灌胃给予水提醇沉样液14.6g/kg，同时空白组和模型组灌胃给予生理盐水，1次/d，连续30d。

3实验评价指标及测定方法

（1）大鼠一般情况的观察

每天观察大鼠的一般情况，包括饮食变化，行为（自主活动，精神状态），毛发变化及排尿情况。

（2）大鼠前列腺湿重及指数的测定

于末次次给药24h后，内眦眼眶取血，并立即摘取前列腺，称得湿重，测定各组的前列腺湿重和前列腺指数（前列腺重量/大鼠体重×1000）。

（3）血清中总酸性磷酸酶（ACP）和前列腺特异性酸性磷酸酶（PACP）含量的测定

取血后静置30min，血液凝固后，4000rpm/min离心20min，取上层血清，按试剂盒操作，应用半自动生化仪测定ACP水平。

测定原理及计算方法同测定小鼠血清中酸性磷酸酶相同。

再用L-酒石酸法比色测定非前列腺特异性酸性磷酸酶（NPAP），前列腺特异性酸性磷酸酶（PAP）=ACP-NPAP[11,15]。

（4）前列腺组织HE染色观察及增生程度评分

将取下的前列腺组织，用福尔马林（10%的甲醛溶液）固定，4℃冰箱保存，石蜡包埋，切片，厚4μm，经苏木精-伊红染色（HE染色）后光镜观察前列腺组织细胞结构变化。

并进行增生等级评分（未见增生为0分，可见增生则按照明显程度分为0.5、1、1.5、2、2.5、3分，增生越明显则分值越大）。

（5）腺体上皮细胞高度及腺腔皱褶指数的测定

将腺体组织切片在放大100倍的显微镜下各随机取三个视野进行拍照，结合Motic软件对照片测量分析，计算大鼠前列腺腺体的上皮细胞高度[（腺管面积-腺腔面积）/腺管周长]和腺腔皱褶指数（腺腔周长/腺腔面积×1000）。

4统计学处理

数据以

±S表示，用t-test检验差异的显著性。

二结果

（一）大鼠的一般情况

刚刚做完手术后大鼠状态较差，但恢复一周后状态良好，其中空白组大鼠较温顺，毛色光泽；模型组与各给药组部分大鼠毛发蓬松，且有部分出现皮肤肿胀（连续皮下给予丙酸睾酮所致）；从垫料的干湿程度观察，模型组和给药组较空白组湿的快，且模型组较给药组湿得快；进食量及饮水量各组间无明显区别。

（二）对去势大鼠前列腺湿重及前列腺指数的影响

结果表明，与空白组比较，爱普列特组、前列康组、2个剂量组前列腺湿重和前列腺指数均有显著性差异（P<0.05），说明造模成功；与模型组比较，益肾克癃方水提醇沉样液高剂量组和低剂量组前列腺湿重和前列腺指数均有明显下降，且差异均具有显著性差异（P<0.05）。

详见表2-1。

表明益肾克癃方有抗前列腺增生的作用。

表2-1对去势大鼠前列腺湿重及前列腺指数的影响（

±S，n=11）

组别

剂量

（g/kg）

最初体重

（g）

最后体重

（g）

前列腺湿重

（g）

前列腺指数

（mg/g）

空白组

—

274.0±8.1

359.5±24.3

0.5685±0.0674

1.59±0.30

模型组

—

217.7±10.7

351.7±14.9

1.1269±0.0369**

3.21±0.34**

爱普列特组

0.005

261.1±11.9

345.2±19.0

0.9257±0.0462**,##

2.68±0.34**,##

前列康组

0.7

265.9±9.4

343.7±19.3

0.8858±0.0967**,##

2.58±0.50**,##

高剂量组

29.3

265.2±8.5

315.2±19.1

0.8434±0.0097**,##

2.68±0.26**,##

低剂量组

14.6

264.5±9.1

338.5±18.2

0.9380±0.1080**,##

2.78±0.41**,##

注：

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

（三）对去势大鼠血清中总酸性磷酸酶（ACP）水平和前列腺特异性酸性磷酸酶（PACP）水平的影响

实验动物血液中ACP的组织来源为前列腺、脾、肝、胃、肾、红细胞、白细胞、血小板，但前列腺ACP含量高于其他组织数百倍。

结果表明，与模型组比较，益肾克癃方水提醇沉样液高剂量组血清中ACP水平均有明显下降（P<0.05）；益肾克癃方水提醇沉样液高剂量组血清中PACP水平明显下降（P<0.05）。

详见表2-2。

表2-2对去势大鼠血清中ACP和PACP水平的影响（

±S，n=11）

组别

剂量（g/kg）

ACP（U/L）

PACP（U/L）

空白组

—

12.43±1.92

6.55±1.87

模型组

—

14.93±2.70

11.80±3.61**

爱普列特组

0.005

14.29±2.09

9.29±1.85*

前列康组

0.7

14.66±2.33

8.53±1.92

高剂量组

29.3

9.53±1.58*,##

6.85±3.72#

低剂量组

14.6

12.67±1.90*

8.33±1.72

注：

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

（四）对去势大鼠前列腺组织切片光镜下形态学的影响

空白组前列腺腺腔正常大小，腔内表面光滑，腺上皮细胞呈立