血型鉴定的操作流程.docx

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血型鉴定的操作流程

ABO血型鉴定正定型

原理：

用已知特异性抗体（标准血清）检查红细胞上的未知抗原。

试管法的操作过程

1、取2支洁净小试管，编号分别为抗A和抗B

2、分别加入抗A和抗B标准血清各1滴

3、取1支洁净试管，用标签纸注明病人姓名，科室、床号.配成5%的红细胞悬液。

4、将配好的红细胞悬液分别加入抗A和抗B的两个试管中各1滴。

5、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒。

6、将试管从离心机中取出，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象。

7、登记结果、签名。

ABO血型鉴定正定型

原理：

用已知血型的标准红细胞，检查血清中的未知抗体。

试管法的操作过程：

1、取3支洁净的小试管，分别标明A细胞，B细胞、O细胞；

2、分别加入受检者的血清各2滴；

3、分别在3个试管中加入反定细胞A、B、O（既5%的A、B、O型标准红细胞盐水悬液）各1滴；

4、混匀，将试管以3400转/分钟离心15秒；

5、将试管从离心机中取出，在光照下观查是否有溶血、脂血等，再以推拉旋转的正确手法轻轻摇动试管，使细胞悬浮观察有无凝集现象并记录。

ABO血型正反定型结果判断

正向定型

（标准血型+初检查红细胞）

抗A抗B

反向定型

（标准红细胞+被检查血清）

A型红细胞B型红细胞O型红细胞

结果断读

+—

—+—

A型

—+

+——

B型

++

———

AB型

——

++—

O型

Rh（D）血型鉴定

试管法（盐水法）操作过程：

1、取洁净小试管3支，分别标明阴、阳对照管和试验管；

2、在3支试管中各加入RhD定型血清1滴；

3、在实验管中加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，在阴、阳对照管中各加入Rh阴性和阳性5%红细胞盐水悬液1滴；

4、混匀，以3400转/分秒离心15秒；

5、观查结果:

实验管凝集，即表示受检红细胞上有相应抗原；实验管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。

不规则抗体筛检试验

凝聚胺法操作过程：

1、取3支洁净的小试管，分别标上“Ⅰ”“Ⅱ”“Ⅲ”；

2、分别在3支试管中加入两滴受检者血清2滴；

3、分别在3支试管中加入3~5%的筛选Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号细胞试剂各1滴，混匀以3400转/分钟，离心15S，看是否凝集；

4、分别在3支试管中心0.65ml的Baso低离子溶液，放置室温1分钟；

5、再分别在3支试管中心加入凝聚胺溶液两滴摇匀，以3400转/分钟，离心15秒，倒去上清液，不要沥干，让管底留0.1ml液体；

6、轻轻摇动试管，且测红细胞有无凝集，（必须凝集，不凝集要重新做实验）；

7、分别在3支试管中加入2滴“悬浮液”轻轻转动试管混合并同时观察结果，30S肉眼看是否凝聚。

1分内、涂片，显微镜下看是否凝集。

如果30S内肉眼看凝集散开，1分内、涂片，显微镜下无凝集，抗体筛检为阴性；

如果凝集不散开，显微镜1分内可看到凝集，抗体筛检为阳性。

产前筛查实验

操作过程：

1、先将妻子和丈夫的血液标本，配成5%的红细胞悬液，做ABO血型鉴定正定型，RhD血型鉴定；

2、把血标本放入37°水浴箱中，水浴至血清可以离出，做ABO血液鉴定反定型；

当妻子血型为O型，丈夫血型为A或B或AB型时做效价；

如果丈夫为A型或B型时，用丈夫的红细胞作为抗原；

如果丈夫为AB型时，用买的A型和B型红细胞做为抗原。

效价的操作过程：

1、用已配的丈夫的红细胞悬液，洗3次细胞，制成2%浓度的红细胞悬液。

2、取1支洁净小试管加入妻子的血清2滴，在加入2滴2-Me试剂，迅速用棉球堵住试管口，放37°C水浴箱中水浴2个小时。

3、取10支洁净小试管分别编号1~10，各放入2滴生理盐水。

4、在1号试管中加入水浴2h的被2-Me破坏的血清2滴。

从1号试管到10号试管，逐加2滴倍比稀释（均匀的用吸管在试管内吸放3~4下）最后两滴弃去。

5、10支试管各加2滴2%的丈夫红细胞悬液，混匀，放入37°C水浴箱30分钟、

6、离心试管，细胞扣朝向自己，以推拉旋转的正确手法，轻摇试管，看哪几管凝集。

7、从没有凝集的那管开始到10号管洗3遍，要把上清液甩干。

8、各加1滴“抗人球试剂”离心，看第几管凝集，以“士”凝集的那1管为效价结果。

9、第一管1:

4第二管1:

8第三管1:

16第四管1:

32第五管1:

64第六管1:

128第七管1：

256第八管1:

512第九管1:

1024第十管1:

2048

新生儿溶血

新生儿溶血病（简称HDN）是指母婴血型不合，胎儿和新生儿的红细胞被母亲的IgG血型抗体包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到破坏的免疫性溶血性疾病。

一、发病机制

本病的病原是母婴血型不合，胎儿的血型基因一半来自母亲，另一半来自父亲，来自父亲的基因敲好是母亲所缺少的，胎儿在红细胞就有可能刺激母亲产生抗体，这种抗体的性质为免疫性抗体，并且能够通过胎盘，一旦这种抗体通过胎盘进入血液循环，就可能与胎儿红细胞向结合并破坏红细胞而发生溶血现象，严重者可能引起胎儿贫血。

水肿。

流产、死胎、早产及HDN。

二、新生儿溶血病血型血清学检查

（一）标本的留取

采集新生儿血液4~5ml，分为大约相等的两份，一份不抗凝，另一份用ACD保存液或EDTA抗凝。

必要时采集母亲的血液4~5ml，其中分出0.5ml加抗凝剂。

必要时采集父亲的血液0.5ml加抗凝剂保有备用。

（二）母婴标本的ABO血型检测

取母婴的洗涤红细胞按常规方法测定ABO血型，如母亲是O型，新生儿是A型或B型，则可能是母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病。

（三）新生儿溶血病检查的三项实验

1、直接抗球蛋白实验

用以确定婴儿红细胞是否被IgG抗体包被。

ABO新生儿溶血病时直接抗球蛋白实验反应常常较弱或阳性需要用显微镜观察结果。

在ABO新生儿溶血病检查中，直接抗球蛋白实验的结果只起参考作用。

改良直接人球蛋白实验方法

（1）将患儿红lell用盐水洗涤3~4次，配成2%红lell盐水悬液。

（2）取小试管2只，各加患儿红lell悬液1滴，然后1管加入IgG（或广谱）最适稀释度抗球蛋白血清1滴，另1管加盐水1滴混合后即以1000转/分离心1分钟或以3400转/分钟离心15s.

（3）轻轻转动试管，将混悬液倒在玻璃片上，在显微镜下观察结果，凡在3~4个细胞的凝集，均匀分布在游离红lell之间为阳性，无凝者为阴性。

2、游离IgG抗体测定

用间接抗球蛋白实验或其他方法检测婴儿血清中是否有游离的IgG血型抗体；

方法：

（1）取小试管3只，每管加患儿血清2滴。

（2）分别加入洗涤过三次配置好的5%，A、B、O型红细胞，盐水悬液1滴，37°C致敏60分钟，取出观查若已发生凝集，证明存在相应的抗体，则不必继续往下做。

（3）若不凝集，用盐水洗3次后加入抗IgG（或广谱）最适稀释度抗体球蛋白血清1滴，1000转/分离心1分钟或3400转/15秒，肉眼观察（或在显微镜下观察）结果。

3放散实验

ABO血型不合的新生儿溶血病时用热放散法好，RH系统及其系统的用乙醇放散法为好，放散夜用抗人球蛋白法或其他检测IgG抗体的方法检测。

患儿红细胞抗体释放实验（热放散法）。

（1）患儿红细胞用盐水洗涤3次，取压积红细胞1ml左右，加等量或半量盐水，置试管中；

（2）将试管放在56°C水浴箱中不断振摇10分钟，取出后置于预先准备盛有56°C热水的离心套管内，立即3000转/分,离心5分钟，吸出上层液（既放散液）备用。

（3）将放散液分为3份，平均加入3个小试管中，分别加入已洗涤过3次配置好的5%A、B、O型红细胞盐水悬液1滴，37°C致敏60分钟。

（4）取出后用盐水洗3次，加入抗IgG（或广谱）最适稀释度抗球蛋白血清1滴，1000转/分或34000转/15秒，肉眼观察。