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禽呼肠孤病毒形态的早期步骤文献综述
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生物技术
禽呼肠孤病毒形态的早期步骤
摘要：
禽呼肠孤病毒是主要的病原体，可能导致家禽养殖中巨大的经济损失。
它们的基因组至少表达了八种结构蛋白和四种非结构蛋白，其中三种是由S1基因编码的。
这些病毒通过受体介导的内吞作用进入细胞，病毒包含的内涵体的酸化对病毒的脱壳和释放转录活跃的核心到细胞质是必需的。
禽呼肠孤病毒的复制在被称为病毒工厂的球形形态的细胞内含物中进行，它与微管无关，是由非结构蛋白μNS形成的。
这种蛋白也介导一些病毒蛋白（但有些则没有）与内含物的结合，这表明病毒蛋白的招募进入禽呼肠孤病毒工厂是具有特异性的。
禽呼肠孤病毒的形态是一个复杂的过程和时间控制的只发生在感染细胞的病毒工厂内。
核心装配发生在它们蛋白部件合成之后的最初30分钟里，完全形成核心然后包覆外层衣壳蛋白多肽，在下一个30分钟将产生成熟的传染性的新病毒颗粒。
根据从禽呼肠孤病毒的数据和呼肠孤病毒科家族的其它成员所报道的结果的研究，我们提出了一个关于禽呼肠孤病毒基因表达和形态发生的模型。
关键词：
呼肠孤病毒；病毒工厂；非结构蛋白μNS
禽流感和哺乳动物的呼肠孤病毒组成了正呼肠孤病毒属两个主要的种群，是呼肠孤病毒科家族12个成员之一[1]。
虽然这些呼肠孤病毒在结构和分子组成上非常相似[2,3]，但是这两个组群的成员在宿主范围、致病性的程度和基因编码能力方面存在不同，在病毒的生化特性方面也不同[4]。
只有禽呼肠孤病毒诱导感染细胞中合胞体的形成，而只有哺乳动物呼肠孤病毒能诱导红细胞凝集[5,6]。
鸟类的呼肠孤病毒在禽类中很普及，但是其传染性通常是无症状的，并且从鸟中分离出来的大多数呼肠孤病毒是非致病性的。
在病毒和疾病之间的直接联系存在的仅仅是最后才表明患有病毒性关节炎综合症和腱鞘炎，通过踝关节连接处的肿胀和腓肠肌筋的病变特征表现出来[7,8]。
根据对细胞附着蛋白σC的序列系统发育分析，编码禽呼肠孤病毒组有五种不同的基因簇。
然而，在特定的基因型和疾病症状中分离出来的病毒之间没有相关性可以被建立[9]。
而且，到目前为止，所有按照病毒血清学特征把禽呼肠孤病毒进行分类的尝试都没有成功。
因为这些病毒显示了高度的抗原异质性，而在中和测试中表现出相当大的交叉效应。
禽呼肠孤病毒拥有由十段双链RNA组成的基因组包裹在二十面体对称的无包被双层蛋白衣壳之中。
至少有十种不同的结构多肽存在于禽呼肠孤病毒中，它们分布于病毒颗粒里如图1所展现[10,11]。
禽呼肠孤病毒的结构蛋白在电泳迁移率的反向顺序中已经按字母顺序排列标分配（λA,λB,etc.），用于区分来自哺乳动物呼肠孤病毒蛋白分配的数值标（λ1,λ2,etc.）。
初始病毒细胞外的附件对于寄主细胞是通过迄今为止还未知的寄主受体，较小的外衣壳蛋白σC的具体作用来调节的[12,13]。
禽呼肠孤病毒通过受体调解内吞作用进入宿主细胞（图2），并且病毒含有的内涵体的酸化对禽呼肠孤病毒在感染细胞中的脱壳和复制是必需的[14,15]。
病毒的脱壳被认为便于膜的相互作用，对释放有能力转录的禽呼肠孤病毒核心进入细胞质是必需的。
图.1A-C禽呼肠孤病毒S1133基因组片段（A）和原始转录产物（B）的电泳分析。
.哺乳动物呼肠孤病毒同源多肽用数值命名法在括号内被表示。
C处是禽呼肠孤病毒的图解，指出了结构多肽的位置。
图.2电子显微镜显示了禽呼肠孤病毒渗透进入禽细胞的过程。
把纯化的禽呼肠孤病毒添加到鸡胚单层培养的成纤维细胞内，在4℃下孵化1小时，接着将细胞放在37℃下孵化一段时间显示在上面，经固定后在电子显微镜下观察分析。
细胞内病毒的转录是被一个核心结合的双链RNA依赖的RNA聚合酶所催化，产生病毒mRNA与它们编码基因的正链相同，在5丿端具有类型1的帽子结构，缺少3丿的Poly（A）尾巴[16]。
呼肠孤病毒的mRNA在感染细胞中发挥着双重作用，它们在核糖体上进行着病毒蛋白的合成，并且与它有联系的负链的产生作为模板，因此产生后代双链RNA基因组片段。
每一个禽呼肠孤病毒的多肽是由相同的基因所编码的，在体外的翻译是由单个基因组片段变性所决定的（图.1）。
虽然大多数禽流感呼肠孤病毒基因组片段以单顺反子出现，在感染细胞内S1片段三顺反子基因的功能是表达两种非结构蛋白（p10和p17）和一种结构蛋白（σC）（图.1）[17]。
两种其他的非结构蛋白μNS和σNS是由M3和S4基因组片段分别编码的，一个氨基酸改变了μNS的亚型，被称为μNSC，最近表明在禽呼肠孤病毒感染细胞中产生[18]。
禽呼肠孤病毒M2基因的主要翻译产物是μB蛋白，在细胞内被十四烷酰化，蛋白酶解。
μB的特定位点的分裂产生一个十四烷基的N-末端肽μBN和一个巨大的C-末端蛋白μBC，两者的前体和分裂产物是呼肠孤病毒的结构组成[19]。
最近表明，非结构蛋白P10的棕榈酰化以胱氨酸模式保存在膜近端，并且这种共价修饰的出现对于这种蛋白的膜融合活动是必需的[20]。
所有禽呼肠孤病毒感染细胞的蛋白，除了σA之外可能是λB出现了糖基化，虽然发生的糖基化程度很低。
1.病毒性工厂
关于呼肠孤病毒科家族的不同成员一定数量的早期研究结果显示，这些在细胞质内复制和装配的阶段凝集成不等的内含物被称为病内含物、病毒工厂或者病毒形成圈。
这些特定的结构包括结构蛋白和非结构蛋白，也包括病毒双链RNA和部分或全部装配的病毒颗粒，但是缺少膜和细胞器，包括核糖体。
它们首先是以许多小颗粒遍布分散出现在在细胞质，当进一步侵染时，它们变大，数量减少，核周分布[21-23]。
呼肠孤病毒工厂的成因和组成，也在病毒生活周期中它们起作用，只是刚开始被鉴定。
感染禽呼肠孤病毒的细胞同样被发现包含大量的细胞质阶段凝集内含物位于病毒复制和装配的位点[24,25]。
大量的核周内含物的次晶排列主要包含完整的病毒和空载的病毒颗粒，在禽呼肠孤病毒感染细胞的超薄切片的电子显微镜下观察到。
感染细胞和免疫荧光电镜分析进一步显示了禽呼肠孤病毒工厂是球状形态的离散结构，没有微管相连[18]。
在感染期间，球形工厂同样产生类型3的哺乳动物呼肠孤病毒种系T3DN和T3C12[26]。
相比大多数哺乳动物呼肠孤病毒种系形成的微管结合工厂，其丝状特性的出现是由核心蛋白μ2的容量所决定的，并与微管相互作用，一起锚定于病毒工厂[27]。
这些结果表明，像哺乳动物呼肠孤病毒T3DN和T3C12所对应的μ2一样，禽呼肠孤病毒μA并没有与丝状微管结合，虽然这个假说和假定μA–μNS的联系有待实验证实。
一些禽呼肠孤病毒蛋白在侵染细胞内的分布与转导细胞的对比分析表明，虽然所有这些蛋白都出现在侵染细胞的病毒工厂内，而在转导细胞内单独表达时只有M3编码的非结构蛋白μNS位于细胞质球形内含物内（图.3,panel1A）。
这个结果表明μNS是最小的病毒因子需要在感染细胞的工厂里形成，工厂的矩阵是μNS的主要组成部分。
像禽呼肠孤病毒蛋白μNS，呼肠孤病毒科家族的其它成员的一些非结构蛋白也被报道说在缺少其他病毒部件时能诱导病毒形成圈样结构的形成。
例如：
在细胞侵染时，病毒内含物的形成与重组杆状病毒表达蓝舌病毒非结构蛋白μNS，并且在细胞中与轮状病毒的非结构蛋白NSP5和NSP2的共转移或与哺乳动物呼肠孤病毒蛋白μNS的转移有关[28,29]。
禽呼肠孤病毒μNS的包涵体形成的能力表明通过启动病毒复制的位点，这些蛋白在禽呼肠孤病毒生活周期的早期阶段起重要作用。
μNS蛋白也是主要的候选物为招募结构蛋白到病毒工厂也为随后装配进入病毒粒子。
转染细胞表达μNS和各种其它病毒蛋白的检测表明，当与μNS结合表达时，只有λA和σNS再分配到球形内含物内（图.3）。
这些结果与观察到λA和σNS出现在病毒工厂的侵染细胞内表明，μNS调节这两种蛋白选择性招募进入禽呼肠孤病毒侵染细胞的工厂里。
而且在三重转染细胞实验显示，μNS招募λA进入内含物的能力是不能被σNS的表达所抑制。
这个发现结合观察到λA和σNS两者出现在单个μNS内含物内，并且这两种蛋白的结合对于区分μNS位点表明λA和σNS通过与相同的μNS分子非竞争性的相互作用后被招募到病毒工厂。
与λA和σNS相比，细胞内核心蛋白σA和外衣壳蛋白σC的分布不受μNS共表达的影响（图.3）表明，它们两者通过μNS依赖的机制穿梭进入工厂，并且它们并不需要工厂形成的开始步骤。
集合这些数据表明，病毒蛋白的招募进入禽呼肠孤病毒工厂是一个选择性和暂时控制的过程，它确定病毒蛋白通过与μNS联系在一开始就穿梭到工厂。
而其它的招募者通过与到目前为止还未知的因素的相互作用。
据报道与禽呼肠孤病毒位置相比，每一个哺乳动物呼肠孤病毒核心蛋白λ1,λ2,和σ2独立的被招募到转染细胞μNS的内含物，表明三种核心蛋白通过与μNS特定的结合穿梭进入哺乳动物呼肠孤病毒的工厂[30]。
因此，禽流感和哺乳动物呼肠孤病毒的出现使用不同的机制为招募它们的同源核心蛋白σA和σ2到它们各自的病毒工厂。
有可能的是所有禽呼肠孤病毒基因的克隆和表达将能够识别所有病毒，它的工厂招募是μNS依赖的和病毒因素涉及μNS依赖的其它结构病毒蛋白的招募。
这个信息可以用来了解蛋白团进入工厂和病毒颗粒的时间进程。
2.核心装配
禽呼肠孤病毒核心装配需要用协调的方式把蛋白质的部件结合在一起，十个病毒mRNA的每一个拷贝是选择性和用壳体包裹的，并且这些mRNA随后用作互补链合成的模板，为了再生出全部十个双链RNA基因组片段。
虽然免疫荧光电镜已经成功的用于监测转染细胞中呼肠孤病毒蛋白与μNS内含物的联系。
个体蛋白招募进入侵染细胞的病毒工厂和病毒粒子内不能够直接被免疫化学技术检测，因为抗体不能区分空载和包含体相关蛋白。
为了克服这个问题，设计了一个实验方法，把代谢脉冲追逐放射性标记与细胞分馏和抗体免疫沉淀结合起来。
区分这种途径的能力是基于TritonX-100抑制裂解缓冲液的能力，以前用于区分可溶性和细胞骨架联系的呼肠孤病毒蛋白[31]，溶解的自由蛋白可广泛分布在整个胞浆，而内含物相关蛋白能保持抵抗缓冲液的提取（图.4A），这个结合途径的结果显示，μNS是最近合成的病毒多肽，只与不溶性部分有联系（图.4B），表明，当μNS一合成时就形成球形内含物，并且所有其它病毒蛋白在变成与μNS内含物结合之前在细胞内合成。
核心装配被来自氨基酸35S脉冲追逐细胞的可溶与不溶提取物与单克隆抗体对照核心蛋白σA的免疫沉淀确定（图.4D）。
结果显示，核心装配是一个复杂的和暂时的控制过程，只在病毒工厂内发生。
这些数据进一步表明，在这些蛋白质部件的合成之后，核心在开始的30分钟内完全形成。
只有当它们完全装配时，外衣壳蛋白团在它们外面产生成熟的呼肠孤病毒。
虽然还没有被直接的测试，但核心装配只在病毒工厂内的事实表明，这些结构也是mRNA依赖负链合成的位点。
这个假说被最近观察到巨大数量的转录病毒mRNA位于哺乳动物呼肠孤病毒侵染细胞的工厂里所支持。
也被最近由Silvestri[32]的研究数据所支持。
这个研究的结果表明，在轮状病毒侵染细胞中，有两种不同类型的正链RNA病毒，那些从来没有离开病毒形成圈，它是为负链RNA合成作为主要的模板资源。
并且这些超过病毒形成圈的RNA结合能力释放进入细胞质为在核糖体上病毒蛋白合成的过程。
他们的结果进一步表明轮状病毒mRNA释放进入细胞质不能够被运输回来进入病毒形成圈，因此，不能够被用作负链合成的模板。
图.3在转导细胞内μNS/GFP-μNS和其它禽呼肠孤病毒蛋白分布的免疫荧光电镜分析。
重组的质粒转染到鸡胚培养的单层成纤维细胞中在左侧表示出来了。
在转染的18个小时以后，细胞被DAPI染色（C列）或经抗体标记的免疫组织化学（B列）反应σNS（2和7排），禽呼肠孤病毒核心（3和8排），σC（4和9排）和σA（5和10排）。
正如μNS，GFP-μNS形成球形团并调解σNS招募进入工厂（A列）。
详见文章。
WithpermissionfromTourís-Oteroetal.2004a）
禽呼肠孤病毒形态出现的第一步是λA核心衣壳的形成，因为这个主要的核心蛋白是第一个结构蛋白进入病毒工厂（图.4A），它的招募是被μNS调解的（图.3,框8）。
通过比较，σA的出现结合在核心形态的后一个阶段，通过μNS依赖的机制。
一个最近的研究使用禽呼肠孤138衍生的温度敏感型在主要的核心蛋白σA中携带病变的突变体，这个蛋白质在禽呼肠孤病毒形态发生上具有一些轻微的作用。
细胞侵染的突变体tsA12在σA蛋白的158位残基包含有脯氨酸被亮氨酸替代。
在非允许条件温度下比允许条件温度下积累了更高的核心样颗粒比例。
表明σA在核心被外衣壳蛋白覆盖起重要作用。
在另一方面，当种系138衍生的突变体tsA12编码的S2基因也包括由tsA12而来的λB和σNS编码的基因。
这个结果表明在三种蛋白质之间有种系特定的相互作用，增加了σNS和λB可调节σA招募进入禽流感病毒工厂的可能性。
最后，在对携带有第55位残基的脯氨酸被丝氨酸替代和290位苯丙氨酸被异亮氨酸所替代的温度敏感型突变体tsA146的研究表明，当细胞在限定温度下侵染突变体与在允许温度下转染相比，增加了完整病毒颗粒的比例和减少了空载病毒粒子的比例的重要作用。
这个结果与σA对稳定λA衣壳的作用相一致。
因为减少突变体σA对衣壳的亲和力将会导致更多的RNA在λA衣壳对RNA的渗透变得僵化和顽固之后进入新生后代颗粒。
这个假说被呼肠孤病毒科家族的其它成员所获得的结果所支持。
因此，通过对哺乳动物呼肠孤病毒核心σ2的X-射线结晶学分析显示，禽呼肠孤病毒σA所对应的成份位于λ1衣壳的顶部并固定λ1。
进一步说，虽然哺乳动物呼肠孤病毒核心蛋白λ1的表达并不是以产出可以经受纯化的核心样粒子。
λ1的共表达和核心结构蛋白σ2产生的纯化抵抗颗粒表明σ2能稳定λ1的核心衣壳[33,34]。
在另一方面，通过X-射线结晶学对蓝舌病毒核心结构分析显示一个脆弱的核心内衣壳刚开始是由VP3蛋白形成的，并且这个结构比在VP3衣壳顶部的VP7结合的更坚硬[35]。
结合这些结果表明，同源蛋白σ2,σA,和VP7作为夹子稳定由各自病毒的主要核心蛋白所形成的衣壳。
与呼肠孤病毒或环状病毒的情况相比，大量的轮状病毒核心蛋白VP2大多数单独表达的产物稳定核心样颗粒[36]。
表明VP2的稳定活动并不需要轮状病毒粒子的最里层蛋白衣壳的形成。
虽然特定的抗体和基因克隆对评价μNS的依赖性和所有其它禽呼肠孤病毒核心蛋白进入病毒工厂和病毒核心的结合的时间顺序是明显需要的。
在可溶性和不溶性部分蛋白质的分布检验表明蛋白质λB比σA更早与病毒工厂结合（图.4A）。
在另一方面，通过对哺乳动物呼肠孤病毒情况的分析，如果μNS调解核心蛋白μA招募进入禽呼肠孤病毒工厂，并且如果λC是完整的核心形态蛋白，那么主要的禽呼肠孤病毒核心中间体可能通过λB和μA添加到λA核心衣壳而形成，并且核心装配可能随后通过蛋白σA和λC的结合而完成。
这个模型与哺乳动物所对应的禽呼肠孤病毒蛋白所占据的核心结构位置是一致的。
因此，哺乳动物对应的λB和μA位于核心衣壳的下面，而σA和λC对应的位于衣壳的顶部[37]。
病毒工厂在呼肠孤病毒形态上的准确作用还不清楚。
在另一方面，到目前为止对呼肠孤病毒科家族的全部成员的调查显示在细胞内的病毒工厂里装配，表明这些专门的结构对侵染细胞内病毒的复制和包装是必需的。
另一方面，在呼肠孤病毒科家族中，病毒工厂的出现对病毒蛋白的装配进入粒子是可有可无的。
因为核心样颗粒可以通过来自重组的杆状病毒和牛痘病毒对呼肠孤病毒、轮状病毒和蓝舌病毒核心蛋白的表达而形成[38]。
这说明核心蛋白可以装配成粒子的外工厂。
然而，关于病毒工厂的绝对需要为核心形态的调解存在着明显的矛盾。
考虑到：
（a）在杆状或牛痘病毒侵染细胞中所产生的病毒样颗粒是空载的缺乏病毒RNA的粒子。
（b）粒子形成的效率可以从重组蛋白的减少和蛋白装配数量的增加看出。
后者的观察似乎表明病毒工厂可能对病毒蛋白的选择性招募是非常重要的在时间顺序和适当的范围一样需要最大的核心装配效率。
这些假说的一致性是病毒蛋白选择性的招募进入工厂已经显示了在禽呼肠孤病毒侵染细胞内的发生。
在另一方面，最近的研究显示，脱壳后变成内涵体制约μNS的夹杂物，许多父母的哺乳动物呼肠孤病毒核心粒子释放进入细胞质，因为哺乳动物呼肠孤病毒蛋白μNS的核心结合活动。
因此，它的出现伴随着μNS的合成和工厂的形成。
病毒mRNA在病毒工厂内合成，这反过来表明工厂可能也要求保持和集中最近合成的对包装和复制所必需的病毒mRNA。
而且，据推测在核心形态的早期阶段期间这个活动是必需的。
因为蛋白σ的夹紧活动导致衣壳变得很严格之前，病毒mRNA被认为已经进入了核心衣壳。
在这个情形中，非结构蛋白σNS的出现就像为保持病毒mRNA在禽呼肠孤病毒工厂所候选的。
因为这个蛋白具有RNA结合活性并且通过特定的与σNS结合使它很早就被吸收进入工厂。
来自我们实验室最近的结果显示（未发表的数据），禽呼肠孤病毒σNS的RNA结合活性对于μNS的结合可有可无，表明RNA没有作用于σNS–μNS的结合。
形成对照的是，据报道RNA是有作用的，虽然不是严格需要，哺乳动物呼肠孤病毒非结构蛋白σNS和μNS的结合[39]。
这个差异可能与不同的RNA结合结构需要两种σNS蛋白有关。
因而，虽然哺乳动物呼肠孤病毒σNS的N-末端118位残基足够的结合RNA，基本的残基沿着整个禽呼肠孤病毒σNS序列的广泛分布对RNA的结合是必需的[40]。
图.4A-F禽呼肠孤病毒多肽招募进入病毒工厂和病毒粒子的电泳分析。
鸡胚单层培养的成纤维细胞模拟感染（M）或用禽呼肠孤病毒感染（AR）14个小时，接着将细胞放在[35S]标记的氨基酸内孵化15分钟，再经包含有过量的非放射性蛋氨酸和半胱氨酸下继续孵化一段时间在顶部表示出来。
细胞随后用含有TritonX-100的缓冲液裂解，其产物的可溶性和不溶性部分通过SDS-PAGE和在这之前用放射自显影（A）或者与抗体免疫沉淀之后并分析，在左上角的B–F表示出来。
详见文章。
（WithpermissionfromTourís-Oteroetal.2004a）
在体外虽然σNS已经显示缺少特异性的与病毒序列结合，而在侵染细胞内，一个病毒辅助物可以提供σNS与RNA结合的特异性。
在缺乏实验证据的情况下，一个辅助候选物是μNS，在侵染细胞内它与σNS的结合并调解它招募进入病毒工厂。
另一个可能性是细胞的mRNA被排除并且不允许渗透进入工厂。
排除σNS相关的对病毒序列具有偏好的需要。
在这个情景中，σNS只能保持病毒mRNA在工厂里，并且只有当病毒mRNA在工厂里的数量超过σNS的RNA结合能力时，过量的转录产物将会被释放到细胞质里为在核糖体上进行病毒蛋白的合成。
因为病毒工厂不包含核糖体。
而且，如果对Silvestri[32]所报告的轮状病毒的情况进行分析，这里没有贩运途径允许细胞质病毒mRNA运输回到工厂，呼肠孤病毒mRNA从工厂释放进入细胞质只能被翻译使用，不能用于负链的合成。
3.核心层
核心层外壳的多肽对于完成细胞内成熟的传染性呼肠孤病毒的产生是必需的。
这一过程由通过来自35S氨基酸脉冲追逐细胞提取物与抗体对照的外壳蛋白σB和σC的可溶和不溶的免疫沉淀的研究（图.4E,F）。
这些显示核心层外壳蛋白只存在于病毒工厂内，并且核心装配和核心层并非同时发生的连续事件。
他们进一步表明在细胞质里σB自发并快速的与μΒ和μBC结合形成三元杂低聚复合物，包含有三种相同数量剂量比的病毒蛋白，这三种病毒合并进入核心粒子形成该复合体的一部分。
在另一方面，即使σB和σC在刚开始合成时就可以在病毒团内被觉察到（图.4E,F），但是它们也不能与核心蛋白结合直到30分钟以后。
实际上这个病毒结构蛋白的全光谱共免疫沉淀在开始合成的60分钟之内也不能够被发现。
核心装配被证实是在开始的30分钟之后病毒蛋白部件的合成。
暗示核心被外壳蛋白覆盖是在下一个30分钟时间里完成呼肠孤病毒的形态。
对哺乳动物呼肠孤病毒所进行的研究显示高传染性哺乳动物呼肠孤病毒由纯化核心颗粒与重组的外层衣壳蛋白的形成重新装配[41]。
相似之处是轮状病毒核心和单层衣壳粒子的传染性可以通过添加从纯化的轮状病毒的中间体和外衣壳中分离的可溶性蛋白所营救[42,43]。
这些结果表明核心层可以从核心装配中游离出来，并且外衣壳多肽的合并进入衣壳并不需要病毒工厂的出现。
4.禽呼肠孤病毒基因表达和形态的一个模式和结论
虽然近年来在影响禽呼肠孤病毒复制和形态上的分子机制增加了进一步的了解，但是一些主要的问题还是没有被解决。
我们最近获悉禽呼肠孤病毒后代粒子的装配只在球形细胞质的病毒工厂内进行，这些结构是由非结构蛋白μNS刚开始形成的。
我们也发现μNS调解工厂对非结构蛋白σNS和主要的核衣壳蛋白λA的招募，表明这三种蛋白在核心形态的早期阶段起重要作用。
相反，核心蛋白σA并不是通过μNS依赖的机制穿梭进入工厂的事实表明σA并不涉及核心装配的第一阶段。
进一步了解了其它禽呼肠孤病毒蛋白何时和怎样招募进入工厂并且由于缺少可利用的病毒克隆基因和特定的抗体而被阻止进入病毒粒子，虽然这些工具预期很快的就可以被利用。
其它温度敏感型禽流感呼肠孤病毒突变体的表型特征，在杆状病毒系统内禽呼肠孤病毒结构蛋白的共表达，病毒特征特异性小干扰RNA出现的使用，为进一步对禽呼肠孤病毒形态的调查提供了可选择的途径。
涉及在病毒mRNA的选择和包装，也在mRNA依赖的负链的合成上信号和机制的努力也应该直接的被认同。
涉及禽呼肠孤病毒基因表达和形态事件的较好的知识将会非常有用为设计效率高的反向遗传系统让呼肠孤病毒基因组可以操纵，也可能为发展可以干预这些病毒的过程和复制的抗病毒药物而很重要。
图.5A，B禽呼肠孤病毒复制的假设模型。
A病毒体内和工厂的形成。
B在病毒工厂内病毒的形态。
在文章的最后一个章节解释了该途径。
通过对禽呼肠孤病毒所获得的结果与来自不同实验室对呼肠孤病毒科家族的其它成员的复制报道数据的结合，在这里我们为禽呼肠孤病毒的复制和装配推测了一个模型（图.5）。
按照这个模型，在内涵体脱壳（图.5A,步骤2）产生病毒mRNA（图.5A,步骤3）之后，转录活动双方的呼肠孤病毒核心释放进入细胞质。
病毒多肽随后由病毒转录的核糖体翻译合成（图.5A,步骤4）。
非结构蛋白μNS和σNS将会快速的形成病毒工厂，并且将会招募父母通过μNS的核心结合活动的特点进入工厂（图.5A,步骤5和6）。
包涵体相关的父母内核将会催化病毒转录的合成（图.5B,步骤1），大多数将通过σNS的RNA结合活动保留在工厂内，这些mRNA将作为负链RNA的合成和后代基因组形成的模板。
只有当转录超过了σNS的保留能力时，将会释放进入细胞质（图.5B,步骤2），允许病毒蛋白继续合成（图.5B,步骤3）。
蛋白μA,λA,和λB与μNS的结合接着将被招募进入工厂，一个脆弱的内核心衣壳将会由λA分子所连接而形成，蛋白质μA和λB也包括每一个十段病毒mRNA的一个拷贝将会渗透进去形成一个不稳定的初级核心中间体（图.5B,步骤4）。
蛋白σA将被招募进入工厂并与外衣壳结合，导致它更稳定并进一步解除RNA/蛋白质的渗透。
核心形态随后由尿苷转移酶蛋白λC的团和由RNA负链的合成而完成，它与正链结合将形成后代基因组（图.5B,步骤5）。
最新形成的核心在侵染细胞中将执行双功能：
为扩大病毒的复制，将会拷贝它们的基因到正链RNA上（图.5B,步骤6），它们随后将被外壳多肽覆盖产生成熟的呼肠孤病毒后代（图.5B,步骤7）。
参考文献
[1]Mertens,P.ThedsRNAviruses[J].VirusResearch,2004,101
（1）:
3–13
[2]Martínez-CostasJ,GrandeA,VarelaR,etal.Proteina
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