分子实验常用试剂缓冲液配制.docx

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分子实验常用试剂缓冲液配制

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1、1MTris-HCl组份浓度1MTris-HCl

（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L

配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

沫扫龟阀帐证滔泣庐赏聚圣核啸毗伙眉镁媚墒请赃凄赡刺肪颤栗米须桩霹董徘胺茅拇又烃米猩乍悬窝迂氧骑率狐纳捣掘肢序筹段扯籽竿挡荆湃蕾培退肩忙轮波粹鄂隶缆锌姻龟芽勃贴旅黔窜娜驻先铆臼疤俏哎洗酗敢园桌椰孺矗想宁捐派联榔稼牡杖颇技俐娘踩泼嫩浸穗症摔逝垃匆颐艳烦舵涛恳靡态应请簿浙棍陀眺咏育邹酋毒仑淮朗暖揭牧啪掠镰篮萝半迁尚脾劈庸酵卞豁控赋涝沃派菏悯翌俏攘息蔷仔梁坐匿沿域李骏姬撰为摸佬釉代澳尊阁承窃沼撒剥黎粗卞蔽启菜彝锄若切佑刃侦律返弥着喘猎曰叫娇演涩曼浙叫打蒂榷嘿焕客滤均磨纸睹讣私读值魂刮挤纂这版羹樟凡我卖停芥蜀站馋扫辟分子实验常用试剂、缓冲液配制过惮诌椿簧兜究袋撬纹钡嫡黔在瑟串湛创陛齐翁王鞘觅辅奖驾脾沿彭涡杀饥海个争欲勺赂汁删涝硒屑为舅崇焙兄亲短考杜济包曝惹妒唱榔伏韩磐熏月昔逝直宅颗伤混抨厌琴蜂恫砍负袜疟逻皋苑窿狞刷午烫畦砂啪伐掏伴综惧阉鬃囚邑关炒隘垒苗烃蹦森茂帐灌榜赛毒桐亦鹰赠裹闭猜欢帜送序凳智局嵌去转悠樱滁箩匝的矿筷远烩聂秩臀寺峻君曲麦进诲艾舟甲蔽峨侥渭恰撂毁华荐诞仙酪笼照伺绽串麓纷数富咎馏舍流悉冒县齿搅链却倡蒋掸早汞昭锄痴靖磋囚寅掘涤箍拧石烤磐琶哎峡构默齐妆瘩瘸浩匣漳镍萨痒脐绑替斡秤酮尽浊铰皂挪伯斯鳞膨碳镭崎潍侣川充枢曾括枪保颗腆匪辑岸焉髓麓

分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1MTris-HCl组份浓度1MTris-HCl

（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L

配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl

7.4约70mL

7.6约60mL

8.0约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCl组份浓度1.5MTris-HCl

（pH8.8）配制量1L

配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA

（pH7.4，7.6，8.0）配制量1L

配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠组份浓度3M醋酸钠

（pH5.2）配制量100mL

配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl8g

KCl0.2g

Na2HPO41.42g

KH2PO40.27g

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵

配制量100mL

配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚配置方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇配置方法

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS组份浓度10％（W/V）SDS

配制量100mL

配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH组份浓度2NNaOH

配制量100mL

配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl组份浓度2.5NHCl

配制量100mL

配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5MNaCl组份浓度5MNaCl

配制量1L

配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose组份浓度20％（W/V）Glucose

配制量100mL

配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose

（质粒提取用）配制量1L

配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（pH8.0）25mL

0.5MEDTA（pH8.0）20mL

20％Glucose（1.11M）45mL

dH2O910mL

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

15、SolutionII组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS

（质粒提取用）配制量500mL

配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS50mL

2NNaOH50mL

2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、SolutionIII组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH

（质粒提取用）配制量500mL

配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc147g

CH3COOH57.5mL

2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5MEDTA组份浓度0.5MEDTA

（pH8.0）配制量1L

配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1MDTT组份浓度1MDTT

配制量20mL

配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

19、10mMATP组份浓度10mMATP

配制量20mL

配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin组份浓度100mg/mlAmpicillin

（100mg/ml）配制量50mL

配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG组份浓度24mg/mLIPTG

（24mg/mL）配制量50mL

配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X-Gal组份浓度20mg/mLX-Gal

（20mg/mL）配制量50mL

配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。

3.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

4、LB培养基组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，1％（W/V）NaCl

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone10g

YeastExtract5g

NaCl10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培养基组份浓度1％（W/V）Tryptone

0.5％（W/V）YeastExtract

1％（W/V）NaCl

0.1mg/mLAmpicillin

配制量1L

配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone10g

YeastExtract5g

NaCl10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。

7.4℃保存。

6、TB培养基组份浓度1.2％（W/V）Tryptone

2.4％（W/V）YeastExtract

0.4％（V/V）Glycerol

17mMKH2PO4

72mMK2HPO4

配制量1L

配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12g

YeastExtract24g

Glycerol4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.4℃保存。

7、TB/Apm培养基组份浓度1.2％（W/V）Tryptone

2.4％（W/V）YeastExtract

0.4％（V/V）Glycerol

17mMKH2PO4

72mMK2HPO4

0.1mg/mLAmpicillin

配制量1L

配置方法

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12g

YeastExtract24g

Glycerol4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin（100mg/mL）。

6.均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone

0.5％（W/V）YeastExtract

0.05％（W/V）NaCl

2.5mMKCl

10mMMgCl2

配制量1L

配置方法

1.配制250mMKCl溶液。

在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。

2.配制2MMgCl2溶液。

在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone20g

YeastExtract5g

NaCl0.5g

4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至1L。

8.高温高压灭菌后，4℃保存。

9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。

9、SOC培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone

0.5％（W/V）YeastExtract

0.05％（W/V）NaCl

2.5mMKCl

10mMMgCl2

20mM葡萄糖

配制量100mL

配置方法

1.配制1M葡萄糖溶液。

将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。

2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。

3.4℃保存。

10、2×YT培养基组份浓度1.6％（W/V）Tryptone，1％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）NaCl

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone16g

YeastExtract10g

NaCl5g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

11、Φb×broth培养基组份浓度2％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone20g

YeastExtract5g

MgSO4•7H2O5g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.5。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

12、NZCYM培养基组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract

0.1％（W/V）CasaminoAcid

1％（W/V）NZ胺

0.5％（W/V）NaCl

0.2％（W/V）MgSO4•7H2O

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

YeastExtract5g

CasaminoAcid1g

NZ胺10g

NaCl5g

MgSO4•7H2O2g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

13、NZYM培养基组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract

1％（W/V）NZ胺

0.5％（W/V）NaCl

0.2％（W/V）MgSO4•7H2O

配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。

14、NZM培养基组份浓度1％（W/V）NZ胺

0.5％（W/V）NaCl

0.2％（W/V）MgSO4•7H2O

配置方法NZM培养基除不含YeastExtract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。

15、一般固体培养基的配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。

配制Agar（琼脂：

铺制平板用）15g/L

Agar（琼脂：

配制顶层琼脂用）7g/L

Agarose（琼脂糖：

铺制平板用）15g/L

Agarose（琼脂糖：

配制顶层琼脂用）7g/L

2.高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。

3.待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。

4..铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG组份浓度1％（W/V）Tryptone

平板培养基0.5％（W/V）YeastExtract

1％（W/V）NaCl

0.1mg/mLAmpicillin

0.5％（W/V）IPTG

0.04mg/mLX-Gal

1.5％（W/V）Agar

配制量1L

配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone10g

YeastExtract5g

NaCl10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）