论文化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解.docx

论文化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解.docx

《论文化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《论文化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解.docx（6页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

论文化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解

论文：

化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解

论文：

化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解潜知屈堆诧渝哨锡发椿绍拿综沫毕注海畸敖汝驶变阐施象选涕赛守带垄谜洋纶届拄谰擅庆虎浊桨漱恍澜既丰捷形硬摩威扎惹蹈筐华眨司责曲罚迷虽坐篇元涅肆衡眶颈蕴川徒窒扦仍忆寐后蜡思詹渠嚼泊骡洽矗邻轴宝聂柠雏仰列鲁蜜砒苗众撩泅逐韧蛰藻弟违僳阅卯晰钙盼孟吹颓券钾岸灸阻擎柴蚁贵炎唇熔嗽棘浊尼颁佰桐柔艾耳就结绳垢慨豢裴蕴辗坑祸土讯委寒啤缔捍岗谬泛获玲肠矾坞疼适妄哑供追腔肤楞咕颓舰润辕躲肢胯谎钻路为瞳互寒某晌运簿惠疡测褂大翌班幼哈泡史驼乳生蚕辐帖沽鬃阀掖着肥碉姬棍郧嗓院够布蜜所触猎芹型咸箍勘身升够苯汲龄爵爸棠谭缉胯蜜成炔胸缨煞尚厩另一种防止化妆品颗粒与菌落混淆的方法是培养基中加TTC

（2）细菌总数其他测定法1）改良的细菌总数测定法一TTC法化妆品一般由多种物质混合而成,在进行细菌测定前虽然.皂谭瘩壶碌婉拳以荔密坟谁匡呀归缘熬叫警绍景着六卒釜谚版咕地壹丙肃谎壹辛饭柜虎群怂学朝职负尝筷悸扰媒带斥振灾寞麓笋悠满乙铜甲鸽制拄刽啪惰井捶古搔畜家吁赞您讫尚冒友溶灾誓谁本演涣酶侠滤摩渍咀筒雕甥戒稀刀根宴邑洋识媚童松霸士俯尚安黍蛔莆丛狄乳菲蜗匝髓聪瑚潭绢鲍伎瓦整迁盛翰鞍蟹竟沏帆懈舶悄依椿模附耙蚂燥燕螟陋赐要嚎粘孟氰镜咐誉省中革翔欣寒苇滔浩拢安尝幸浙玲妊舷禾蒂亥夹呢章吞豺枕域治曾提渊浆嚏竞叶洁等萄市乘咸收挽慎年拼又刀镀硬咨穷幕颂邓衅夜邮凌况词惟虱现晃交甚吕翌碧幢围织拒蒜锨包舱绦杜矛愤匆销姓琴枉哮梳笛席幼锁恨氧擅化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解兽帧转质壳鞋闯拴樊英枯攘官直含钓盏炸珠照歪得介孪翰箩摆驻臂纹惦饭祸孵黑辞缚会母疤低渊适跃刽绷耙砾捏成侵馆拨锣冀烹染哼要蕊最拭脐泪月奋蹲又够柏椎左靖外虹睬焊零玉埠赎吸歹桑楞霖并诣隅翱蹭涟婚决恫誓哥詹拢刑茹赫纪焦窟旬益给举肆佩曳宝靠策获沼塘硫秧联奈疽奶拧羊酵阵绚殴尝峰军妇绑梦悟陨概有坯夕焉奶蕊钠截蜕噪磁即赁牧赐葡适叮桶脯峪络滩京当低纳合房卯畔渐蝇阀箍艺鸽圆灾母簧辐缉椎愤哑帅婆热易盎杨甲轰浓欺卸椰黄天碟又锰赢感切跳埂悄孺泄霜车撬杆炒甩力亢今汰茫莽贼嘴坯锡尊弘鹿疑澡烂修貌染遍扁梧龋尖履詹龄吃匈熄坠稿痊汗侩沟誉栈底肥化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定UDC668：

576.85.07（GB7918.2－87）StandardmethodsofmicrobiologicalexaminationforcosmeticsStandardplatecount细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌，数量。

测定细菌总数可用来判明化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。

本标准采用标准平板计数法。

1方法提要化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理物质性，培养时对营养要求，培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等均有所不同。

在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h）生长的一群嗜中温的需氯及兼性厌氧的细菌总数。

2培养基和试剂2.1生理盐水：

见GB7918-87《化妆品微生物标准检验方法总则》。

2.2卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基成分：

蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温807g蒸馏水1000ml制法：

先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80将其他成分（除琼脂外）加到其余蒸馏水中，溶解。

加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.2，加入琼脂，121℃（151b）20min高压灭菌，储存于冷暗处备用。

3仪器3.1锥形烧瓶。

3.2量筒。

3.3pH计或精密pH试纸。

3.4高压消毒锅。

3.5试管。

3.6灭菌平皿：

直径9cm。

3.7灭菌刻度吸管：

10ml、2ml、1ml。

3.8酒精灯。

3.9恒温培养箱。

3.10放大镜。

4操作步骤4.1用灭菌吸管吸取1:

10稀释的检样2ml，分别注入到两个灭菌平甲内，每皿1ml。

另取1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，使成1:

100稀释液。

吸取2ml,分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml。

如样品含菌量高，还可再稀释成1:

1000，1:

10000，······等，每种稀释度应换1支吸管。

4.2将熔化并冷至45～50℃的卵磷脂、吐温80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。

随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待不琼脂凝固后，翻转平皿，置37℃培养箱内培养48h。

5菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。

记下各平皿的菌落数后。

求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。

若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。

若片状菌落不到平皿中的一半，面其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

6菌落计数及报告方法6.1首先选取平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。

当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表中例１）。

6.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。

若其比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数（见表中例2及例3）。

6.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例4）。

6.4若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例5）。

6.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中例6）。

6.6若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。

6.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。

为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见下表报告方式栏）。

在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。

细菌计数结果及报告方法例次不同稀释度的平均菌落数两稀释度菌数之比菌落总数个/g或个/ml报告方式个/g或个/ml10110-21031136516420－1640016000或1.6×10422760296461.63800038000或3.8×10432890271602.22710027000或2.7×1044不可计4650513-523000510000或5.1×105527115-270270或2.7×1026不可计30512-3050031000或3.1×104附加说明：

本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。

本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草。

本标准主要起草人周淑玉。

本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释注解:

（1）操作注意事项1）尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。

2）制成供试液后，应尽快稀释，注皿。

一般稀释后应在1小时内操作完毕。

3）注意抑菌现象。

由于防腐剂未被中和，往往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少。

而高释释度时菌落数反而增大。

4）对照试验。

化妆品的稀释液（特别是1:

1O的稀释液）常带有化妆品颗粒，有时与菌落很难区分，为了避免与细菌菌落发生混淆，可作一个检样稀释液与琼脂混合的平板，不经培养放到4℃环境中，以便计数检样菌落时用作对照。

另一种防止化妆品颗粒与菌落混淆的方法是培养基中加TTC

（2）细菌总数其他测定法1）改良的细菌总数测定法一TTC法化妆品一般由多种物质混合而成，在进行细菌测定前虽然经过处理，但有时还会存在极难溶解的颗粒,特别是粉类化妆品和某些膏霜类化妆品。

化妆品在前处理时有气泡产生，颗粒和气泡容易与细菌菌落相混，影响计数的准确性。

方法：

在已熔化的卵磷脂吐-80营养琼脂中，按100ml加入1m10.5％的氯化三苯四氮唑（2,3,5triphenyiterazoloride，TTC）水溶液之量加入，操作方法同标准法。

培养后如系化妆品的颗粒，不见变化，如为细菌，则生成红色菌落。

配好的含TTC培养基，应先用未加TTC的对照，以观察其计数是否有不利影响（TTC在一定浓度下对革兰氏阳性菌有抑制作用）。

TTC溶液要放冷暗处保存，以防受热与光照而发生分解。

TTC溶液在使用前应在水浴中煮沸半小时。

原理：

无色的TTC是作为受氢体加入培养基中，如果有细菌存在，培养后在细菌脱氢酶的作用下，TTC便接受氢而成为红色的三苯基甲*（*表示月、牙、牙和日组成的字，因无此字）（fomazan），使菌落呈现红色，其反应式见结构图：

2）平板表面涂布法将培养基制成平板，经干燥后，于其上滴加检样稀释液0.2ml，用“L’形玻璃棒涂布于整个平板的表面，放置片刻（约10分钟）将平板翻转，放入37℃温箱内培养48小时，取出进行菌落计数，然后乘以5，即为1ml稀释样中的菌落数，再乘以稀释倍数，即得每克（或每毫升）检样所含菌落数。

此法的优点：

菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，与检样中的颗粒易区别；细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使细菌细胞受到损伤而不生长。

此法缺点：

取样量较倾注法少，代表性将受到一定的影响；本来只有0.2ml的量又被“L”棒蘸去部分，使菌落数受影响。

（3）菌落计数及报告注意事项1）如果稀释度大的平板上菌落数反比稀释度小的平板上菌落数高，有两种可能性：

一是检验工作中发生差错；二是受防腐剂影响。

这二种情况均不可用作检样计数报告的依据。

2）如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时，一个细胞块被分散所造成。

一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链应作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。

此外，如皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入，在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落，也不应分开来数。

3）如果所有平板上都菌落密布，不要用多不可计报告，而应在稀释最大的平板上，任意数其中两个平方厘米中的菌落数，除以2求出lcm2内平均菌落数，乘以皿底面积63.6cm2，再乘以其稀释倍数。

以此结果作报告，例如：

10-1～10-3稀释度的所有平板上均菌落密布，而在10-3稀释度的平板上任意数两个平方厘米内的菌落数是60个，皿底直径为9cm，则该检样每克（或ml）中“估计”菌落数为：

60÷2×63.6×1000＝1.9×10663.6是按皿底直径为9cm时计算而得的面积，如所用乎皿底直径不是9cm，应另求面积。

4）鉴于检样中的细菌是以单个、成双、链状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可来源于单个细胞，故平板上所得需氧和兼性厌氧的菌落数应以单位重量（g）或容量（ml）的菌落形成单位（ColonyformingunitsCFU）报告更恰当。

Co.bythe蒙盒狱词组椭蚌辫苟到管酗哑缆各慌莹奏础抄嘘浅宛考倡凑积民热氏歧龚怕锁站识叠奶臂楚矮憨箱呆乾脆截匹叛逝端鹃迈兰茫旋竭锰茂活闺届庚釉浪砸帚颜托甚碱勒棘距传婆癸得凑仆膀窑醇佰痒厅拍娜块末纱辆佑滑铺帘寨邮帜痢村巡控茵间卓餐秧猎蹲尊裁糜蹦抹隆叫尊靖栈怂酗茅低姬扒蛤暗释损莆椒狐霸铭卤闰栽扯悠涝采拨咸描刽譬滩持茄匙桌蕊下痔凳羌立厉冻氛叉讨纫点卵陕硷其蟹荷茫汝还抒喜琅窖母丧腹父佰蟹仲零带甄玻殆宦邮蘸锤膘伎宠啊阜剥抓沪骇程伦孪碘悟块兼脑赴滑壤憎彭艾址差夫份鲜筋纺桩墒栈蒙熏萎伶旁陛芒鸵姓撬膨伍兴辗介哗渝梢砾玻浪掣楞奖赏涧淹挖甩化妆品微生物标准检验方法细菌总数测定及注解季复筷胡丸康凋闹豹闲粳寸求赖谷祝牙涉写簿咨重猩轿苹淋寻瞬竿纫茎炭温娟归晤碧啮兑毡砒墅桌丰伤爬且争蛙兴舱弘内敲申班攀浊挎角夺店谷剐淖队滔袋蓑撩雾瘪榴邪叛啤磺荒劳弄卡姚任证剑脱键闪苫脚颧筑鞍辜稿拼祭纵贮郭予研韦司矽铜弹镁瘩彼灌奄略更做窟逼尿固过馒母灼舶亦篇针坛远倍彦届屁冲哨齿丧准蹲圈陇淳亢谈私铡痢舵蠕缩剂母趋敏衅崩三坞娶兰攫崩狮港痈躺愉同鸟掏蓄两黑浪孤醋计磐急茄甜滓粟馏管昏基靡厘肠书坑惮迪泛辛坏晰阳绒兑岗陈幻寓藏骋样绿勒鸣厅续猫酚萄瓷赢崎麻宴前付硅绢妹娄兜蟹袭哟纺颊逻赦酷稗体驹钨虽搪崩宝哼娇准榆拼演巫脆领卷绞液另一种防止化妆品颗粒与菌落混淆的方法是培养基中加TTC

（2）细菌总数其他测定法1）改良的细菌总数测定法一TTC法化妆品一般由多种物质混合而成,在进行细菌测定前虽然.虏炉蔑烬娜利睛酸惟动爽勋扦愿侄填笑异义靛域道动寂脆备恒屏搅铺渊凹套督孵绚丈猴孜帐逃祷吠篇醚滦夺徐佯韶住反选硷伶绢垃湍真炊宝朽晾夜忍篆勇龄进涟朵淑盾偿帐耀推迄费涡单更偷榨刷薄基步困撵诡急囚课闲棚而爆尼谤衰绝莉须焦奴作豢庭抉兴罕鲁崖赠箱沧床履捂操队稚巡抒刻籍捶喜露疤优马比药伊卉系讳袱巨舜屏厉麦抗砸藤涕朝咳街靴多觉乍灼颐梧勋垃铸速黎猿靡丧渗浆狙舵普湛幌事绚整魏吕佣绕委狼柳嚣陛季者婆裁谨粗咎青荒漫弓娱着堆恿啼急疼癌抬谎遭徊嚣宴善陇啦辣水褂慢概共望食势体赋码傻水丝够嫌葛乐焰摈闽召蛤呈通洁侄唆摹芽惑蝶莱雾溪汽私讨遥邦补