基因工程精品课程试题.docx
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基因工程精品课程试题
基因工程考核试题A1
一、名词解释题（每题3分，共30分）
1、蛋白质工程
2、基因组文库
3.多克隆位点
4.Southern杂交
5.基因治疗
6.转基因动物
7.显微注射技术
8.Klenow片段
9.荧光定量PCR
10.基因芯片
二、单选题（在本题的每一小题的备选答案中，只有一个
答案是正确的，请把你认为正确答案的题号，填入题干
的括号内。
多选不给分。
每题2分，共20分）。
1、构建cDNA文库时，选用下列哪种载体较好？
-------------------------（）
①质粒②SV40病毒
③Ti质粒④YAC（酵母人工染色体）
2、在Northern杂交中，探针主要用什么来进行标记？
------------------（）
①同位素②EB（溴化乙锭）
③染料④DNA
3、构建GST蛋白表达系统的载体是为了是目标蛋白以哪种方式表达？
-----（）
①融合表达②分泌表达
③独立表达④包含体表达
4、PCR反应中Taq酶常常没有错配碱基纠错功能，因为它没有-----------（）
①5’－3’聚合酶活性②5’－3’外切酶活性
③3’－5’外切酶活性④3’－5’聚合酶活性
5、以下哪种酶需要引物？
-----------------------------------------（）
①限制性核酸内切酶②末端转移酶
③逆转录酶④DNA连接酶
6、II型限制性核酸内切酶的切割位点是-----------------------------------------（）
①识别序列内②识别序列1000bp以外
③识别位点下游24－26bp处④DNA分子任一位点
7、Ti质粒中能插入到植物基因组中的DNA区段是-----------------（）
①复制远点区②毒素蛋白区
③T-DNA区④冠婴碱代谢区
8、艾滋病病毒HIV是通过下列哪个基因编码的产物识别人体T淋巴
细胞的？
-----------------------------------------------------（）
①env②pol③gag④LTR
9、T4DNA连接酶能催化下列哪种分子相邻的5'端磷酸基团与3'端羟基末端之间
形成磷酸二酯键？
----------------------------------------------（）
①双链DNA②单链DNA
③mRNA④rRNA
10、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？
---------（）
①lacZ②GFP
③Ampr④ori
三、填空题（每空1分，共20分）
1.世界上成功构建的第一个体外重组DNA分子是在（）年完成的。
2.质粒载体能够克隆（）大小的DNA片段，噬菌体能够克隆（）大小
的DNA片段。
3.外源基因在动物的血液中表达，从而可以在动物血液里直接提取外源基因的产物，
这种基因产品的生产方式叫（）。
4.用琼脂糖凝胶电泳时，DNA片段越大，离点样孔越（），而DNA片段越小，离
点样孔越（）。
5.用化学降解法进行DNA测序时，必须具有（）个反应系统，用酶促合成法
法进行DNA测序时，必须具有（）个反应系统。
6.电转化的原理是在受体细胞上施加短暂的高压电流脉冲后，结果在细胞膜上形成许
多（），从而使（）容易进入到受体细胞内。
7.λ噬菌体根据接受外源DNA的方式不同，可以分为（）和（）
两种类型载体。
8.互为同裂酶的两种限制性核酸内切酶来源（），产生的粘性末端（）。
9.酵母双杂交系统通常含有两个载体，一个载体含有酵母转录因子GAL4的
（），另一个载体必须含有GAL4的（）。
10.目前抗虫转基因植物常常用到的外源基因主要是（），从而
达到杀死害虫的目的。
11.在转基因植物中，常用的显色或发光标记的报告基因有（），（），
（）等。
四、简答题（每题5分,共15分）
1.碱性磷酸酯酶的主要作用是什么？
它有哪些应用？
2.什么是蛋白质的分泌表达？
它有什么优缺点？
3.选择T7噬菌体RNA聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统有哪些优点？
五、问答题（共15分）。
1.试比较Southern杂交、Northern杂交和Western杂交的相同点与不同点。
（9分）
2.什么是基因敲除？
基因敲除的基本流程是怎样的？
（6分）
基因工程考核试题B
一、名词解释题（每题3分，共30分）
1、cDNA文库
2、基因枪
3.融合蛋白
4.表达载体
5.限制性核酸内切酶
6.Northern杂交
7.逆转录PCR
8.转基因植物
9.体细胞核移植
10.DNA改组
二、单选题（在本题的每一小题的备选答案中，只有一个答案是
正确的，请把你认为正确答案的题号，填入题干的括号内。
多
选不给分。
每题2分，共20分）。
1、基因治疗的载体采用下列哪种载体比较合适？
----------------------（）
①逆转录病毒②Ti质粒
③噬菌体④质粒pBR322
2、采用原核细胞表达系统的优点之一是可以与下面什么过程直接相连-----（）
①发酵工程②转基因动物
③转基因植物④基因治疗
3、以mRNA为模板合成cDNA时，所用的工具酶是-----------------------（）
①DNA聚合酶I②DNA连接酶
③逆转录酶④核酸酶
4、YAC是----------------------------------------------------------（）
①酵母人工染色体②人工Y染色体
③细菌人工染色体④粘粒
5、用Sanger双脱氧法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是-------------（）
①模板链的②模板链的互补链的
③mRNA的④cDNA的
6、同位素标记探针是指在探针上连接----------------------------------（）
①32P②生物素
③荧光素④酶
7、Southern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？
---------------------（）
①DNA②RNA
③蛋白质④染色体
8、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相
连接的是------------------------------------------------------（）
①目的基因与目的基因之间②载体DNA与载体DNA之间
③目的基因与载体DNA之间④目的基因与mRNA之间
9、pBR322是一种什么样的载体？
---------------------------------（）
①粘粒②质粒
③噬菌体④人工微小染色体
10、PCR引物成对存在，位于目的基因的---------------------------（）
①5'端②3'端
③C端④N端
三、填空题（每空1分，共10分）
1.基因工程诞生于（）年。
2.基因工程中外源DNA与载体DNA分子所形成的杂合分子叫（）。
3.外源基因在人体表达，使人体能克服某一缺陷或疾病，这种基因工程技术叫
（）。
4.将抗性基因转入农作物中，使之具有某种抗病能力，得到的农作物叫（）。
5.用载体制作转基因植物时，最常用的载体是（）质粒。
6.粘粒载体能够克隆（）大小的DNA片段，人工酵母染色体YAC能够克隆
（）大小的DNA片段。
7.DNA自动测序标记的是（），常规Sanger双脱氧链终止法标记的是
（）。
8.显微注射技术一般是在显微镜下将目的DNA分子注射进入动物受精卵的（）
中，从而产生转基因动物。
四、简答题（每题6分，共24分）
1.酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？
2.举例说明转基因动物在医药科学中有哪些应用。
3.艾滋病是由于艾滋病病毒HIV感染引起。
艾滋病的基因治疗可以采取哪些措施？
4.什么是荧光定量PCR？
它有什么应用？
五、问答题（每题8分，共16分）。
1.试比较Sanger双脱氧链终止法DNA测序与化学降解法DNA测序的异同点。
2.基因组文库构建的基本步骤是什么？
构建基因组文库需要用到哪些载体？
基因工程考核试题C
一、名词解释题（每题3分，共30分）
1、多克隆位点
2、穿梭载体
3.DNA连接酶
4.核酸分子杂交
5.融合蛋白
6.基因敲除
7.反义核酸技术
8.荧光定量PCR
9.基因治疗
10.显微注射技术
二、单选题（在本题的每一小题的备选答案中，只有一个答案是
正确的，请把你认为正确答案的题号，填入题干的括号内。
多
选不给分。
每题2分，共20分）。
1、构建CDNA文库时，选用下列哪种载体较好？
------------------------------------（）
①质粒②SV40病毒
③Ti质粒④YAC（酵母人工染色体）
2、Northern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？
-----------------------------------（）
①DNA②RNA
③蛋白质④染色体
3、以mRNA为模板合成CDNA时，所用的工具酶是--------------------------------------（）
①DNA聚合酶I②DNA连接酶
③逆转录酶④核酸酶
4、BAC是-------------------------------------------------------------------------------------（）
①酵母人工染色体②人工Y染色体
③细菌人工染色体④粘粒
5、用酶促合成法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是-------------------------（）
①模板链的②模板链的互补链的
③mRNA的④cDNA的
6、同位素标记探针是指在探针上连接----------------------------------------（）
①32P②生物素
③荧光素④酶
7、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相
连接的是--------------------------------------------------------------------------------（）
①目的基因与目的基因之间②载体DNA与载体DNA之间
③目的基因与载体DNA之间④目的基因与mRNA之间
8、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？
----------------（）
①lacZ②GFP
③Ampr④ori
9、M13噬菌体是---------------------------------------------------------------------（）
①双链噬菌体②单链噬菌体
③质粒④粘粒
10、常规PCR反应所用到的酶是-------------------------------------------------（）
①核酸酶②逆转录酶
③DNA连接酶④Taq酶
三、填空题（每空1分，共10分）
1.基因工程构建基因重组体是指将（）与（）的进
行连接重组。
2.用琼脂糖凝胶电泳时，DNA片段越大，离点样孔越（），而DNA片段越小，
离点样孔越（）。
3.Northern杂交的用途主要是用来检测（）在特定组织的（）
情况。
4.粘粒载体是由（）和（）两部分组成的。
5.质粒载体能够克隆（）大小的DNA片段，噬菌体能够克隆（）大小的
DNA片段。
四、简答题（每题6分,共24分）
1.构建cDNA文库时需要用到哪些工具酶？
2.简述进行菌落原位杂交的基本过程。
得分评卷人复查人
得分评卷人复查人
3.基因芯片的主要应用是什么？
4.酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？
五、问答题（每题8分,共16分）。
1.肿瘤的产生可能是抑癌基因突变或表达失误造成，也可能是原癌基因突变或表达失
误造成。
对肿瘤患者进行基因治疗时，应该采取哪些策略？
2.有哪些方法可以将外源目的基因转移到植物体内？
你认为转基因农作物的潜在的安
全隐患主要表现在哪些方面?
基因工程考核试题标准答案及评分细则
A
一、名词解释题（每题3分，共30分）
1、蛋白质工程
基于对蛋白质结构和功能的认识，进行分子设计，通过基因工程途径定向地改造
蛋白质或创造合乎人类需要的新的突变蛋白质的理论或实践活动。
2、基因组文库
把某种生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体结合，导入宿主细胞，形成
克隆。
汇集这些克隆，应包含基因组中的各种DNA顺序，每种顺序至少有一份代表。
这
样的克隆片段的总汇，叫基因组文库。
3.多克隆位点
一段短的DNA序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位
点。
4.Southern杂交
利用硝酸纤维素膜或经特殊处理的滤纸或尼龙膜具有吸附DNA的功能，先作DNA
片段的凝胶电泳，并将凝胶电泳中的DNA区带吸附到膜上，然后直接在膜上进行同位
素标记核酸探针与被测样品之间的杂交，再通过放射自显影对杂交结果进行检测。
5.基因治疗
就是指向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而
达到治疗的目的。
6.转基因动物
借助基因工程技术把外源目的基因导入动物的生殖细胞、胚胎干细胞或早期胚胎，
并在受体染色体上稳定整合，使之经过各种发育途径得到能把外源目的基因传给子代
的个体，叫转基因动物。
7.显微注射技术
将在体外构建的外源目的基因，在显微操作仪下用极细的微吸管注射到处于原核
时期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖过程中通过DNA的复制而整合到动物基
因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发
育，进而得到转基因动物。
8.Klenow片段
DNA聚合酶的大亚基，具有5－3聚合酶和5－3核酸外切酶的作用。
9.荧光定量PCR
通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监
控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析。
以实时检测外源基因的表达情况。
10.基因芯片
将基因文库的克隆以矩阵的方__________式排列在芯片上，利用不同荧光标记不同组织的RNA
或cDNA或基因群，与芯片进行杂交，从而确定不同组织的差异表达基因或特定基因群
的方法。
二、单选题（每题2分，共20分）。
1.①2.①3.①4.③5.③6.①7.③8.①9.①10.④
三、填空题（每空1分，共20分）
1.1972年
2.10kb,20kb
3.血液生物反应器或生物反应器
4.近，远
5.4个，4个
6.微孔，外源基因/DNA
7.插入型/置换型,插入型/置换型
8.不同,相同/相近/不同
9.激活结构域/结合结构域,激活结构域/结合结构域
10.毒素蛋白/Bt/毒晶蛋白
11.GUS,荧光素酶,GFP
四、简答题（每题5分,共15分）
1.碱性磷酸酯酶的主要作用是什么？
它有哪些应用？
碱性磷酸酯酶的作用是从DNA或RNA的三磷酸核苷酸上除去5`磷酸根残基。
主要
用于在DNA5`端进行P32标记以及用于防止酶切片段及载体酶切片段的粘性末端的自
连。
2.什么是蛋白质的分泌表达？
它有什么优缺点？
是指周质蛋白、细胞内膜与外膜蛋白等以带有N端信号肽的前体形式首先在细胞
质中合成，随后穿膜运送到周质或定位到内、外膜上的分泌过程。
穿膜过程中，信号
肽被信号肽酶切除。
将目的蛋白的基因置于原核蛋白信号肽的序列的下游可能实现分
泌型表达。
分泌表达的优点：
①信号肽被切除后的蛋白质N末端的氨基酸序列与天然蛋白是一
致的，②周质空间中的蛋白酶活性比细胞质中的要低，从而使蛋白质较稳定地存在于
周质中，③周质中只有少量的细菌蛋白，使分离纯化更容易，④周质空间存在一个氧
化的环境，使得二硫键更容易形成。
分泌表达形式的缺点：
相对其它生物细胞而言，大肠杆菌的蛋白分泌机制并不健全。
外源真核生物基因
很难在大肠杆菌中进行分泌型表达，少数外源基因既便能分泌表达，但其表达率通常
要比包涵体方式低很多，因此目前用于产业化的异源蛋白分泌型重组大肠杆菌尽管有，
但并不普遍。
3.选择T7噬菌体RNA聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统有哪些优点？
1）T7噬菌体RNA聚合酶合成RNA的速度高于大肠杆菌5倍；
2）T7噬菌体RNA聚合酶只识别自己的启动子序列，不启动大肠杆菌DNA任何序列的转
录；
3）T7噬菌体RNA聚合酶对抑制大肠杆菌RNA聚合酶的抗生素有抗性；
4）T7噬菌体RNA聚合酶/启动子系统在一定条件下，基因表达产物可占细胞总蛋白的25
％以上。
五、问答题（共15分）。
1.试比较Southern杂交、Northern杂交和Western杂交的相同点与不同点。
（9分）
Southernblot，Southern印迹转移试验（Southernblot）又称凝胶电泳压印杂交
技术，是Southern于1975年建立的一种DNA转移方法。
该法利用硝酸纤维素膜或经特
殊处理的滤纸或尼龙膜具有吸附DNA的功能，先作DNA片段的凝胶电泳，并将凝胶电泳
中的DNA区带吸附到膜上，然后直接在膜上进行同位素标记核酸探针与被测样品之间的
杂交，再通过放射自显影对杂交结果进行检测。
Northernblot，Northern吸印杂交试验（Northernblot）又称为RNA印迹法，
是对应于Southernblot而命名的。
它的特点是电泳结果为RNA图谱而不是DNA图谱，
即是将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到硝酸纤维素滤膜上，用同位素
或生物素标记的DNA或RNA特异探针针对固定于膜上的mRNA进行杂交，洗脱除去非
特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，以确定目的基因的表达组织。
Western杂交:
Westernblot是指经过SDS-PAGE分离（聚丙烯酰胺凝胶电泳）的
蛋白质样品，转移到固相载体（如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附
蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或
多肽作为抗原与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过
底物显色或放射自显影以检查电泳分离的特异性的目的基因的表达的蛋白成分。
相同点：
杂交流程相同，探针种_______类和标记方法相同，检测方法相同
不同点：
原理不同,Southern杂交和Northern杂交是核酸分子杂交,而Western杂交是
抗原抗体反应.
杂交对象不同：
Southernblot是与酶切后电泳的DNA片段杂交，Northernblot是与
电泳后的RNA杂交，Western杂交是与膜上的蛋白质杂交。
检测目的不同：
Southernblot是检测目的基因的序列正确否或目的基因有无导入到受
体细胞，Northernblot和Western杂交是检测目的基因的表达情况.
2.什么是基因敲除？
基因敲除的基本流程是怎样的？
（6分）
基因敲除是指利用同源重组的原理，通过载体将外源的失活的基因替换掉内源的正
常的基因，从而使基因沉默而不表现突变性状的方法。
基本流程：
构建靶标载体—导入ES细胞—ES细胞筛选—带有目标基因的ES细胞导
入囊胚—囊胚植入假孕母鼠—后代与正常鼠回交—杂合体自交—鉴定纯合体表型，确定
基因功能。
基因工程考核试题标准答案及评分细则
B
一、名词解释题（每题3分，共30分）
1、cDNA文库
将某一个组织中的全部mRNA都反转录成cDNA，分别与载体连接形成的克隆的集合
体。
2、基因枪
基因枪法，也称微粒轰击法，是将DNA包被到金粒或钨粒中，然后把这些粒子加
速推进靶细胞。
3.融合蛋白
融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。
4.表达载体
含有基因表达调控序列能将目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生产的载
体。
5.限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异性核苷酸序列并由此特异切
割DNA双链结构的水解酶。
6.Northern杂交
又称为RNA印迹法，是将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到硝酸
纤维素滤膜上，用同位素或生物素标记的DNA或RNA特异探针针对固定于膜上的mRNA
进行杂交，洗脱除去非特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，以确定目的基因的表
达组织。
7.逆转录PCR
以mRNA为模板用逆转录酶进行的PCR反应。
8.转基因植物
含有外源目的基因并能稳定遗传的植物体。
9.体细胞核移植
将外源目的基因导入能传代培养的动物体细胞（包括动物成体体细胞、胎体成纤
维细胞等），以这些动物体细胞为核供体，通过显微操作或电融合方法使核供体与去核
的原核胚细胞或去核的成熟卵母细胞核受体进行细胞重组融合，使其不经过有性繁殖
过程。
然后再对重组的胚胎进行胚胎移植，进而得到带有外源基因的转基因动物。
10.DNA改组
用DNAaseI先将一个DNA片段消化成许多小片段，然后不加引物进行PCR，使得
消化后DNA小段之间重新按多种组合方式连接重组，然后利用原来整片段DNA两端的
引物进行加引物的PCR扩增，以便得到一系列改组后的突变DNA序列。
二、单选题（每题2分，共20分）。
1.①2.①3.③4.①5.②6.①7.①8.④9.②10.①
三、填空题（每空1分，共10分）
1.1973年
2.重组载体/重组DNA分子
3.基因治疗
4.抗虫转基因作物
5.Ti质粒
6.30－40kb,1-2Mb
7.ddNTP,引物
8.雄原核
四、简答题（每__________题6分,共24分）
1.酵母作为真核基因的高效表达系统有什么优缺点？
克服大肠杆菌表达系统的不足，能繁殖快，高密度发酵，可以进行蛋白质翻译后
的修饰合加工。
缺点：
缺乏强有力的启动子，分泌效率差，表达菌株不够稳定，表达质粒易于丢失等。
例如甲醇酵母系统，利用甲醇作为唯一碳源。
乙醇氧化酶将甲醇氧化为甲醛，乙
醇氧化酶的启动子是强启动子，编码乙醇氧化酶的基因是AOX1合AOX2.AOX1基因的表
达受甲醇严格调控，诱导表达水平可达30％以上。
2.举例说明转基因动物在医药科学中有哪些应用。
异种器官移植：
猪器官移植到人身上，要克服受体对外源器官的超急性排斥反应
（HAP）的障碍，克服措施有：
降低或消除补体反应――将人的补体调节蛋白因子基因
CD55，CD59等通过转基因方法导入器官供体动物，含有CD55基因猪的心脏移植到猴体
内后，猪心脏跳动了10天；通过基因剔除来减少或改变供体器官的表面抗原，降低免
疫排斥反应；使供体器官表达人体免疫抑制因子，使得该种猪器官移植后在移植部
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