原料申报临床资料18号.docx
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原料申报临床资料18号
化学药品 资料项目编号：
3.1-18
盐酸帕洛诺司琼申报临床技术资料
一般药理研究的试验资料及文献资料
×××制药股份有限公司
目录
18-1摘要
18-2对中枢神经系统的影响
18-3对心血管系统的影响
18-4对胃肠道系统的影响
18-5对泌尿系统的影响
18-6对抗肿瘤药活性的影响
18-7结论
18-8讨论
18-9参考文献
18-1摘要
腹腔注射0.003-10mg/kg的帕洛诺司琼使小鼠运动增加50%；腹腔注射帕洛诺司琼1.0ng/kg、1ug/kg、1mg/kg对小鼠行为反应没有影响，口服帕洛诺司琼0.0003、0.003和3000ug/kg明显缩短在暗室中的停留时间，表明帕洛诺司琼口服有微弱的抗焦虑特性；口服帕洛诺司琼1-300ug/kg对大鼠摄食行为没有影响；帕洛诺司琼单剂量1、30和60mg/kg不会引起动物产生惊厥。
帕洛诺司琼明显抑制hERG尾电流，IC50为1.9-2.04uM；帕洛诺司琼0.3和3uM（100和1000ng/ml）呈剂量依赖性延长动作电位持续时间；犬静脉注射帕洛诺司琼（1、10、100和1000ug/kg），对血液动力学和心电图没有影响；年轻犬连续28天静脉注射帕洛诺司琼1、3和6mg/kg/天对PQ间期没有影响；犬静脉注射帕洛诺司琼0.01、0.1和1mg/kg对平均收缩压和舒张压、心率和心电图没有明显影响；麻醉犬静脉注射累积剂量的帕洛诺司琼1、3、10、30、100、300和1000ug/kg对传导和心电图没有产生任何明显影响，但在300和1000ug/kg时明显降低血压；帕洛诺司琼10mg/kg静滴给予雄性麻醉新西兰家兔引起血压降低，RR间期比给药前缩短25%，QT间期比对照平均缩短19%和QTc比给药前平均值缩短32%。
帕洛诺司琼引起家兔心脏QTc异常和室性心动过速。
在任何研究过的动物身上均未观察到尖端扭转型室性心动过速。
腹腔注射帕洛诺司琼0.001-1.0mg/kg对给予试验食物大鼠的胃排空没有明显影响。
清醒的盐负荷大鼠口服帕洛诺司琼0.001-1mg/kg，在盐负荷1小时后明显降低尿钠排泄量≥62%。
在0.001mg/kg组，1小时时随着该时间段内尿钠排出降低，尿钠/钾比例也明显降低（56%）。
在1小时时，0.001、0.01和0.1mg/kg组氯排泄也减少（≥71%）。
口服帕洛诺司琼1、10和30mg/kg（以自由基计）对顺铂在鼠P338白血病模型上的抗肿瘤活性没有影响；腹腔注射帕洛诺司琼10mg/kg对阿霉素在负荷淋巴细胞白血病L1210细胞的小鼠模型上的抗肿瘤活性没有影响；腹腔注射帕洛诺司琼10mg/kg对顺铂在Lewis肺癌的小鼠模型上的抗肿瘤活性没有影响；腹腔注射帕洛诺司琼10mg/kg对环磷酰胺在荷SC黑色素瘤B16小鼠模型上的抗肿瘤活性没有影响。
总之，帕洛诺司琼在高剂量时有微弱的中枢神经系统效应；体内外研究中观察到的变化分析帕洛诺司琼对心血管的安全性与所有已知的抑制K+和Na+流的5-HT3受体拮抗剂一致，但以上现象均出现在远高于临床血药浓度和/或剂量时；帕洛诺司琼明显减少盐负荷大鼠尿钠和氯排泄，但基本上没有生理学意义；帕洛诺司琼对大鼠的胃排空没有明显影响；对顺铂、阿霉素和环磷酰胺的抗肿瘤活性没有影响。
18-2对中枢神经系统的影响
18-2-1对小鼠一般行为的影响
帕洛诺司琼对小鼠一般行为影响的研究表明腹腔注射0.003-10mg/kg的帕洛诺司琼使小鼠运动产生了中度增加（50%）。
相反，对照化合物氯丙嗪（30mg/kg腹腔注射）明显降低体温和反应力，引起明显的中枢神经系统抑制。
18-2-2抗焦虑效应
在研究Ⅰ和Ⅱ中采用小鼠双室探测黑白盒焦虑模型研究帕洛诺司琼（1.0ng/kg、1ug/kg、1mg/kg腹腔注射）对小鼠行为的影响。
研究Ⅰ显示帕洛诺司琼对小鼠行为反应没有影响，因此，在所使用的剂量下，对小鼠没有抗焦虑活性。
研究Ⅱ显示口服帕洛诺司琼0.0003、0.003和3000ug/kg明显缩短在暗室中的停留时间，但对其它参数如运动活力、反应时间和在暗室的活动百分率没有影响。
后者的发现表明帕洛诺司琼有微弱的抗焦虑特性。
两个研究的差异主要表现在使用小鼠的品系和给药途径的差异。
18-2-3对大鼠摄食行为的影响
对5-HT3受体在大鼠摄食行为中所的作用研究显示口服1-300ug/kg的帕洛诺司琼、格拉司琼和昂丹司琼对大鼠摄食行为没有影响。
虽然血清素对摄食有调节作用，但研究表明该行为缺乏5-HT3受体的参与。
阳性对照药D-安非他明（3和6mg/kg）和芬氟拉明（1和10mg/kg）减少大鼠摄食量。
18-2-4对小鼠的促惊厥活性
帕洛诺司琼单剂量1、30和60mg/kg不会引起动物产生惊厥。
这些动物在给帕洛诺司琼45分钟后给予卡地阿唑或或施以电休克，经这三个剂量的帕洛诺司琼预处理后不会引起动物惊厥。
经安非他明（30mg/kg口服）和贝美格（40mg/kg口服）处理的动物显示出抗卡地阿唑或电休克所致惊厥的作用。
因此这些药物没有致惊厥作用。
总之，帕洛诺司琼仅有微弱的中枢神经系统效应，剂量至10mg/kg时仅中等程度增加小鼠运动（50%）。
帕洛诺司琼可能的抗焦虑活性目前尚不能作为一个单独的功能提出来，归结于从两个独立的小鼠试验中得到的不一致的结果，一个试验显示出没有，另一个试验显示出微弱的抗焦虑效应。
最后，对摄食行为没有影响的研究表明大鼠的该行为缺乏5-HT3受体的参与。
18-3对心血管系统的影响
18-3-1体外电生理效应
18-3-1-1对哺乳动物细胞、用hERG（克隆人ether-a-go-go基因）的cDNA转染的HEK293细胞的hERG尾电流的影响
使用全细胞膜片钳技术分析帕洛诺司琼对哺乳动物细胞、用hERG（克隆人ether-a-go-go基因）的cDNA转染的HEK293细胞的hERG尾电流的影响。
结果见表1。
表1帕洛诺司琼对hERG尾电流影响的浓度-效应关系
浓度（uM）
尾电流（%对照）
0.03
82.7±2.1
0.3
60.0±4.1**
3
31.4±2.8**
30
6.1±1.3**
**P＜0.01；数据以平均值±标准差表示，每组平均4个细胞。
电流快速通过hERG是造成整流钾电流（Ikr）延迟的原因。
结果表明帕洛诺司琼（0.03、0.3、3和30uM或10、100、1000、10000ng/ml）明显抑制hERG尾电流，且呈浓度依赖性，IC50为2.04uM。
最低浓度0.03uM（10ng/ml）抑制17%的hERG尾电流。
10ng/ml的浓度接近于帕洛诺司琼临床试验中受试者静脉注射0.75mg时的最大血浆水平（7.17ng/ml）。
在另一项相似的研究中，采用昂丹司琼作对照对帕洛诺司琼对hERG尾电流的影响进行了研究。
结果见表2。
表2帕洛诺司琼对hERG尾电流影响的浓度-效应关系
浓度（uM）
平均hERG尾电流（I受试/I对照）
0.00
0.94
0.20
0.84
0.70
0.75
2.00
0.44
3.00
0.44
10.00
0.13
结果表明帕洛诺司琼剂量依赖性抑制hERG尾电流，IC50为1.9uM；昂丹司琼亦呈剂量依赖性明显抑制hERG尾电流，IC50为1.8uM,与帕洛诺司琼相似。
使用全细胞膜片钳技术分析帕洛诺司琼对hHNacDNA转染的HEK293细胞的hHNa电流（快速钠电流）的影响。
结果显示帕洛诺司琼（1、3、10和100uM）呈剂量依赖性明显抑制hHNa电流，IC50为6.5uM。
18-3-1-2对离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响
在犬浦肯野纤维上研究帕洛诺司琼的体外电生理效应。
自由运行的浦肯野纤维从Beagle犬右心室分离得到。
下面记录的是在两种刺激频率（60或12脉冲/分）下的动作电位参数：
静止电位（RP）、振幅（APA）、最大去极化率（Vmax）和动作电位持续时间（APD50、APD70和APD90）。
结果见表3和表4。
表3帕洛诺司琼对正常刺激频率（60脉冲/秒）下离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响（n=6）
浓度（ng/ml）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
118±2
-92±1
496±57
247±10
290±7
327±8
Tyrode液
7±1
-1±1
3±23
-6±5
-2±2
0±2
10
10±2
1±1
10±31
-8±6
-2±3
2±3
100
0±2
1±1
-2±26
-9±9
8±4
13±5
1000
8±1
-1±1
-39±41
-38±14
13±6
36±5*
10000
-5±1**
4±1
-231±53**
-183±12**
-135±10**
-72±16**
与溶剂对照（Tyrode液）相比，*P≤0.05；**P≤0.01，若P≤0.05，方差分析采用NEWMANKEULS,s检验；
APA：
动作电位振幅；
RP：
静止电位；
Vmax：
最大去极化率；
APD50：
动作电位50%复极化的持续时间；
APD70：
动作电位70%复极化的持续时间；
APD90：
动作电位90%复极化的持续时间；结果以计算所得相关测定值的变化表示（Tyrode液灌注期间）；下同。
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起25分钟这一时间段的分析值。
表4帕洛诺司琼对低刺激频率（12脉冲/秒）下离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响（n=6）
浓度（ng/ml）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
115±2
-88±2
442±46
287±18
152±15
395±15
Tyrode液
2±2
1±1
58±51
-15±3
-13±3
-7±1
10
5±2
0±1
36±32
-20±14
-9±5
-1±5
100
3±5
4±1
-13±29
-5±10
16±3
24±5
1000
3±4
1±2
8±24
1±24
84±18
125±12**
10000
17±4**
9±2**
168±25**
-262±23**
-175±16**
-75±24**
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起30分钟这一时间段的分析值。
结果显示60脉冲/分时帕洛诺司琼0.3和3uM（100和1000ng/ml）呈剂量依赖性延长动作电位持续时间，该效应在低频率（12脉冲/分）时更加明显。
但是，在30uM（10000ng/ml）这一高浓度时，帕洛诺司琼明显缩短动作电位持续时间。
动作电位持续时间的延长与帕洛诺司琼在全细胞膜片钳技术分析中得到的抑制hERGcDNA转染的HEK293细胞的hERG尾电流的结果相一致。
帕洛诺司琼在3和30uM抑制最大去极化率（Vmax），这与帕洛诺司琼在全细胞膜片钳技术分析中得到的抑制hHNacDNA转染的HEK293细胞的hHNa尾电流的结果相一致。
在该模型中也研究了帕洛诺司琼的主要代谢产物RS-17825-007（M9）对动作电位的影响。
M9为帕洛诺司琼的氮氧化代谢物。
结果表明代谢产物RS-17825-007（测试浓度为10、100、1000和10000ng/ml）对动作电位振幅没有明显影响。
但是，能够延长动作电位持续时间和降低最大去极化率。
结果见表5和表6。
表5RS-17825-007对正常刺激频率（60脉冲/秒）下离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响（n=6）
浓度（ng/ml）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
118±3
-90±1
441±54
223±15
266±14
307±15
Tyrode液
3±3
-2±1
72±55
-5±2
2±2
3±2
10
-1±4
-2±1
10±49
-6±4
-2±3
-2±3
100
-4±4
0±1
-56±49
-4±7
6±1
6±2
1000
4±4
-3±1
13±34
-15±8
16±4
31±4*
10000
-15±10**
5±4
-159±25**
-147±34**
-84±23**
-3±5
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起25分钟这一时间段的分析值。
表6RS-17825-007对低刺激频率（12脉冲/秒）下离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响（n=6）
浓度（ng/ml）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
109±2
-83±2
420±52
247±27
316±25
361±27
Tyrode液
2±3
0±1
48±53
-10±7
-1±5
5±3
10
0±6
-1±2
-26±46
5±8
4±7
10±7
100
0±4
1±2
-33±55
-14±17
8±7
15±7
1000
5±3
-1±2
-7±63
17±21
89±18
126±27**
10000
-14±6
2±2
-101±60
-151±36**
-83±30**
5±19
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起30分钟这一时间段的分析值。
在该研究中，也研究了西沙必利作为阳性对照对动作电位的影响。
结果表明3×10-7M西沙必利明显延长动作电位持续时间，从10-16%。
结果如表7和表8所示。
表7西沙必利对正常刺激频率（60脉冲/秒）下离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响（n=6）
浓度（ng/ml）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
123±3
-91±1
489±64
223±12
267±10
308±9
Tyrode液
-4±3
-1±1
-50±47
-3±6
3±4
5±3
3×10-7M
-5±2
0±1
-36±23
6±9
27±5**
39±6**
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起25分钟这一时间段的分析值。
表8西沙必利对低刺激频率（12脉冲/秒）下离体犬浦肯野纤维心脏动作电位的影响（n=6）
浓度（ng/ml）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
119±2
-88±2
431±52
245±17
308±12
359±14
Tyrode液
-14±2
3±2
-81±47
-25±20
-9±14
8±6
10
-8±4
3±7
-27±33
-9±14
37±14
59±14
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起30分钟这一时间段的分析值。
18-3-1-3对离体兔浦肯野纤维心脏动作电位的影响
方法：
采用离体兔浦肯野纤维制备物分析0.03uM到30uM浓度的帕洛诺司琼对动作电位的影响，并与阳性对照西沙必利作比较。
采用的最低浓度以临床静脉注射10ug/kg所达到的血浆浓度为依据，最高浓度以模仿的药物过量所达到的浓度为依据。
在浦肯野纤维制备物估算静止电位、动作电位振幅、最大去极化率、动作电位持续时间（APD）和产生早后除极
（EAD）引起的激发活性。
浸泡开始25分钟后测定在50、70和90%复极化时的动作电位持续时间。
西沙必利使用3×10-7M浓度作为参比浓度。
结果：
见表9和表10。
表9离体兔浦肯野纤维在正常刺激频率（60次/分）下盐酸帕洛诺司琼对心脏传导的影响（平均值）（n=6）
浓度（uM）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
121±4
-91±1
257±21
217±15
258±17
288±18
含0.1%glenle液的Tyrode液
1±2
0±1
1±6
7±5
5±3
3±4
0.03
4±3
-1±1
0±7
15±5
11±4
9±4
0.3
4±3
0±1
4±6
22±4
20±3
22±3*
3
0±4
0±1
10±17
47±11**
66±9**
80±8**
30
-11±7
4±1
-98±21**
27±47
131±43*
190±37**
Tyrode液
1±3
1±1
-13±14
74±31
193±33**
233±36**
西沙必利
17
4
54
102
92
88
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起25分钟这一时间段的分析值。
表10离体兔浦肯野纤维在低刺激频率（12次/分）下盐酸帕洛诺司琼对心脏传导的影响（平均值）（n=6）
浓度（uM）
APA（mV）
RP（mV）
Vmax（v/s）
APD50（ms）
APD70（ms）
APD90（ms）
给Tyrode液前
118±3
-88±1
270±25
248±20
309±32
346±33
含0.1%glenle液的Tyrode液
1±2
0±1
1±6
7±5
5±3
3±4
0.03
2±3
1±1
-10±10
16±7
12±8
12±8
0.3
3±1
1±1
-3±15
49±10
54±14
60±15
3
3±1
1±1
-9±12
313±69**
364±83**
396±85**
30
-4±5
2±1
-58±18
729±343
1472±295**
1579±289**
Tyrode液
4±3
0±1
-9±22
1220±453
1890±308**
1949±310**
西沙必利
12
6
66
1005
729
725
注：
APA、RP、Vmax、APD50、APD70、APD90为从开始浸泡起25分钟这一时间段的分析值。
帕洛诺司琼浓度在0.3uM到3uM时在低刺激频率和正常刺激频率下对动作电位持续时间产生剂量依赖性增加。
该效应仅在3uM或更高浓度时才有明显统计学意义。
该效应在低刺激频率（12脉冲/秒）比正常刺激频率（60脉冲/秒）表现更加明显。
帕洛诺司琼和西沙必利在0.3uM时都使动作电位持续时间（APD50、APD70和APD90）缩短。
在低刺激频率下30uM时在两例制备物中发生早后除极的报道表明其对钠通道的作用效应。
在3uM时观察到动作电位持续时间增加与对动作电位振幅和最大去极化率（Vmax）的明显影响没有相关性。
阳性对照西沙必利在3×10-7M产生了先前观察到的在50、70和90%复极化时增加动作电位持续时间，表明模型是成功的。
因此帕洛诺司琼在高浓度时增加动作电位持续时间。
18-3-2体内试验
18-3-2-1血液动力学效应
在闭胸麻醉犬身上研究帕洛诺司琼或昂丹司琼（剂量1、10、100和1000ug/kg依次递升）的血液动力学效应，包括对EKGⅡ导联的影响。
给予帕洛诺司琼1000ug/kg后45分钟心率明显降低（12bpm）。
给予帕洛诺司琼1ug/kg后30分钟亦检测到对右心室血压的明显降低作用，但是该变化很小（1mmHg）且是独立的，因此认为没有生理意义。
昂丹司琼除了在高剂量1000ug/kg给药后60分钟心脏收缩容积增加了1ml/min外，其余受试剂量均未产生明显的血液动力学效应。
这些关于昂丹司琼的发现亦被认为没有生理意义，因为这些变化是独立的，与在该时间点的HR和CO的任何变化没有相关性。
与对照值相比，帕洛诺司琼1000ug/kg对QT和QTc间期没有明显影响。
但是，在1000ug/kg时，6条受试犬中有5条的QT间期有明显升高（比给药前高0.05秒）。
在1000ug/kg，6条受试犬中有3条的QT间期为0.27-0.29秒，犬QT间期的正常范围为0.15-0.25秒。
QT间期延长见于低血钙症、低钾血症、奎尼定中毒、乙二醇中毒、剧烈运动、体温降低和中枢神经系统紊乱。
QT-波延长见于非常高且中毒的剂量。
该项研究的全部均数与对照值相比没有明显差异。
总之犬静脉注射帕洛诺司琼（1、10、100和1000ug/kg），在1000ug/kg时犬心率产生了轻微的降低，但对血液动力学无影响。
在1000ug/kg时6条犬中有3条犬QT间期增加。
但是，该剂量的全部均数与对照值相比没有明显差异。
18-3-2-2对年轻犬28天静脉注射盐酸帕洛诺司琼毒性研究的心电图测定
在28天静脉注射毒性研究中，测定了帕洛诺司琼对雄性和雌性年轻犬心脏传导的影响。
研究期间，4组幼犬（4只/组，雌雄各半）分别静脉注射帕洛诺司琼0、1、3和6mg/kg/d，给药4周后测定所有受试动物2小时的心电图。
帕洛诺司琼0、1、3和6mg/kg/d组雄性幼犬的平均PQ间期分别为59±8、61±10、59±7和63±8毫秒，帕洛诺司琼0、1、3和6mg/kg/d组雌性幼犬的平均PQ间期分别为60±10、61±7、58±9和62±8毫秒。
对照组和给药组动物之间没有明显的统计学差异。
由于幼犬心率过高无法测定其它的心电图参数。
18-3-2-3对血压、心率和心电图的影响
在清醒犬身上进一步研究帕洛诺司琼对血压、心率和心电图的影响。
给三条雄性和雌性犬植入遥测发射机、电极和传感器导管。
给犬静脉注射帕洛诺司琼0.01、0.1和1mg/kg。
记录开始给药前24小时和给药后72小时的平均收缩压和舒张压、心率和心电图，每隔15分钟记录一次，每次记录15秒。
即使到达最高剂量1mg/kg（20mg/m2）时亦未观察到对这些参数有明显影响。
该剂量大约为体重为50kg人的临床拟用剂量0.75mg或0.015mg/kg（0.56mg/m2）的36倍。
在清醒犬身上也研究了代谢产物M9对血压、心率和心电图的影响。
M9静脉注射0.001、0.01和0.1mg/kg对血压、心率和心电图没有任何影响。
在临床药代动力学研究中，大约12.9%的母剂量以M9的形式从尿中排出。
0.1mg/kg（2mg/m2）的M9大约为临床给予帕洛诺司琼0.75mg后所形成的M9水平（0.56mg/m2×13%=0.073mg/m2）的27倍。
18-3-2-4对房间、室间和房室间传导的影响
在麻醉犬身上研究帕洛诺司琼对房间、室间和房室间传导的影响。
一对刺激电极和两
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