（2）严格按照使用说明书使用以确保温度波动符合
（1）条规定。
可供参照的使用方法如：
有双加热开关的，应在达到设定温度时使用单加热。
最终应以仪器说明书方法为准。
2.分析天平
（1）分析天平水准仪中水珠应位于中央位置，使用时应保持室内无风和避免电磁干扰，说明书规定称量前需要预热的应按照要求预热。
（2）在称量室空位处放置用小烧杯盛放的变色硅胶干燥剂，在表面全部失效时应更换掉表面的硅胶干燥剂。
（3）定期进行标准砝码校准，频率至少为每周一次，校准过程中应确保标准砝码不受污染。
（4）未称量时禁止任何东西放置秤盘上，称量时不允许过重的物品长时间压在秤盘上进行称量（小于30秒）。
（5）读数时应关闭天平门。
3.分光光度计
（1）使用前预热半小时，确保光源的稳定性
（2）每批次（如四槽检测三个样品一个空白）测定必须带空白调零
（3）及时清洗比色皿，确保比色皿干净透明
称量方法规范
1.直接称量法
将称量器皿（烧杯、称量瓶、锥形瓶等）放在天平上，去皮，使天平显示为零，往器皿中加入样品，天平显示的数字即为试样质量。
2.固定质量称量法
适用于需要定量称量的物质，如基准物质的配制，该方法是为了结果计算方便。
称量必须在称量瓶中进行，用勺子轻轻振动，使试样慢慢落入称量瓶中，直至需要的固定质量。
3.递减称量法
适于易吸水、易氧化、易与CO2反应的物质。
此类物质盛放在带盖的称量瓶中。
带手套，也可用洁净的小纸条套在称量瓶上，拿取放在天平上称量W1，拿出，在准备溶解试样的容器上方，用小纸条套在瓶盖上打开盖子，并用盖子轻敲瓶的上部，使试样落入容器，再返回称量，重复操作直至所需重量，此时称量为W2，样重为W=W1-W2。
4.差量法
分析工作中常用的称量方法，类似递减称量法。
称量器皿为自制的小簸箕或称量纸，先放置称量器皿在天平上，去皮，使天平显示为零，用勺子往称量器皿中加入样品直至所需的质量为W1，将称量器皿的样品倒入准备处理试样的容器中，再返回称量倒空后的称量器皿，质量为W2。
样品质量为W=W1-W2。
水分的测定
参考标准：
饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定（GB-T6435-2006）
原理：
根据样品性质不同，在特定条件下对试样进行干燥所损失的质量占试样的百分比例。
方法步骤：
1.恒重：
将装样皿在（110±2）℃烘箱中烘30分钟至恒重，取出置于干燥器中冷却30分钟，称出称量皿重量。
2.称样：
装样皿直径50-60mm，称样量为3-5g；装样皿直径20-30mm，称样量为1-2g。
称完后轻轻抖动使样品均匀分布在装样皿底部。
3.烘干：
将装有样品的装样皿打开盖子放入110±2℃烘箱中，从烘箱恢复到设定温度时开始计时，烘80分钟。
4.取出：
戴上手套，将装样皿盖子盖好，迅速取出置于干燥器中，待全部取出后盖好干燥器盖子，冷却30分钟。
5.称量：
30分钟冷却至室温后可以进行称量，开始称量后不必拿一个盖一次，但必须保证连续快速地进行称量。
计算：
H2O（%）=
×100%
操作细节：
1.普通电热烘箱干燥室内的温度不均匀，实测时称样皿应放置于上层近温度计水银球的下方或周围。
2.装样皿为带磨口玻璃盖的玻璃皿，应带盖烘至恒重，烘样品时应带盖一起烘80分钟，拿出时应盖好盖子再迅速放入干燥器中。
3.使用植物粉碎机样品应过40目筛；使用快速粉碎机样品不可过热，以免造成水分的蒸发，导致结果偏低。
4.冷却应以实际冷却至室温为准，样品多时可能大于30分钟，少时可能少于30分钟。
5.应注意硅胶干燥剂的有效性，当硅胶开始变色时应更换硅胶，硅胶可在120度烘干后重新利用，但是温度过高容易焦化失去活性，从而无干燥作用。
购买硅胶应判断其有效性，可取部分在手上，用水湿润，性能好的会迅速变色膨胀炸裂，性能差的变色缓慢。
6.烘箱应使用温度计进行校正，应按照烘箱操作说明书进行操作以便达到烘箱温度的稳定精度。
在每年的计量检定过程中应借助计量人员及其计量设备对烘箱温度进行校正。
7.称量一旦开始，可以不必盖上干燥器的盖子，因为每次开盖都已经引入了潮湿的空气，盖上盖子也不能快速阻止烘干样品的回潮，此时唯有尽量保证称量的快速进行以尽可能的减少回潮对结果造成的影响，因此水分也不宜进行过多样品的同时测定。
灰分的测定
参考标准：
GB-T6438-2007饲料中粗灰分的测定
仪器设备
分析天平：
感量0.0001g
马弗炉：
数显控温，550℃设定温度在530℃～570℃间波动
电炉：
无极控温
坩埚：
体积约为30ml，高为3cm的瓷质坩埚
干燥器：
盛有有效硅胶干燥剂
测定步骤：
（1）将干净坩埚放入高温炉，在550±20℃下灼烧30分钟。
取出，在空气中冷却约1分钟，放入干燥器中冷却30分钟，称其质量。
再重复灼烧、冷却、称量，直至两次质量之差小于0.0005g为恒重。
（2）在已恒重的坩埚中称取2-5g试样（灰分质量0.05g以上），准确至0.0002g，在放置于通风橱中的电炉上炭化至无烟。
（3）炭化完毕，将坩埚放入高温炉中，于550±20℃下灼烧4h（灰化完全，无炭粒），从达到550℃开始计时。
取出，在空气中冷却1min，放入干燥器中冷却30分钟，称其质量。
（4）若无法确定是否灰化完成，应再同样灼烧1h，冷却、称重，直至两次质量之差小于0.001g为恒重。
分析结果计算和表述
粗灰分含量（%）按下式计算：
粗灰分（%）=
×100
式中：
m0——为恒重空坩埚质量；g
m1——为坩埚加试样的质量；g
m2——为灰化后坩埚加灰分的质量；g
所得结果应表示至0.01%
如进行酸不溶物（砂份）测定，则将灰化后样品坩埚中加入10ml1+2盐酸，煮沸后过滤，残渣用水洗涤至无Cl-后于550±20℃下灼烧30分钟，冷却、称重、计算
注意事项：
（1）考虑到灰化的样品有些可以进入钙、磷的测定，为避免工作的重复，在称样量上应顾及钙、磷的测定。
推荐称样量为：
样品类型
称样量/g
鱼粉
0.6-1.0g
肉骨粉
0.6-1.0g
棉粕
2.0
菜粕
2.0
饲料成品
2.0-3.0
蛋鸡料
1.5-2.0
其他原料
2.0
（2）对于易于膨胀的碳水化合物，应小心炭化，避免溢出，含脂量高的样品避免明火燃烧。
（3）测定结果再现性不大于5%，再现性指不同实验室的不同分析人员用相同分析对同一被测对象测定结果之间的相对标准偏差。
再现性R=
<5%
钙的快速测定方法
参考标准：
GB-T6436-2002饲料中钙的测定
所需试剂：
钙黄绿素指示剂：
0.10g钙黄绿素+0.10g甲基百里香酚蓝络合剂+5g氯化钾（110度干燥80分钟后）研磨
KOH溶液（40%）：
400gKOH溶于1000ml水中
三乙醇胺溶液（1+1）：
500ml三乙醇胺溶于500ml水中（掩蔽三价离子，需先在弱酸性条件下掩蔽，否则形成氢氧化铁沉淀后不容易掩蔽）
乙二胺溶液（1+1）：
500ml乙二胺溶于500ml水中（掩蔽二价离子，对于Cu2+、Ti4+、Cd2+、Bi3+等使用铜试剂DDTC掩蔽效果更好些，Cu2+使终点转变不清也可加入2%Na2S溶液1ml）
淀粉溶液（10g/L）：
1g淀粉加入100ml水用玻璃棒搅拌均匀（不搅拌就加热容易结块），在电炉上煮沸即可，现用现配（主要用于掩蔽磷酸根离子，过期的淀粉能导致终点延长或不明显）
方法步骤：
1.试样的分解：
称取0.5-2g（准确至0.0002g）试样于坩埚中，在电炉上小心炭化，再放入马弗炉中于550℃下灼烧3h，取出坩埚，放在干燥器中冷却30min，（或在测定粗灰分后继续测定）在盛灰坩埚中加入（1+3）的盐酸10ml，3滴浓硝酸，在电炉上煮沸取下，待试样溶解冷却后，将此溶液转入100ml容量瓶中，用蒸馏水将坩埚冲洗干净，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
2.测定：
准确移取试样分解液10.00ml，加入水50ml，加淀粉溶液10ml，（1+1）的三乙醇胺2ml，（1+1）的乙二胺1ml，加400g/L的氢氧化钾溶液5ml，加0.1g盐酸羟胺（还原溶液中氧化性物质以保护指示剂，特别是锰超过1mg/L在碱性溶液中易成高价使指示剂变为灰白或混浊的玫瑰色），每加一种试剂都须摇匀且必须按顺序加入，加钙黄绿素指示剂少许，在黑色背景下立即用EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。
同样条件作空白，空白的体积为60ml水。
3.钙、镁总量的测定:
准确移取试样分解液10.00ml，加入水50ml，（1+1）的三乙醇胺2ml，（溶液酸性过强应先用氨水中和至中性，可以小块pH试纸指示），再加pH=10的氨性缓冲溶液10ml，以铬黑T为指示剂，用EDTA标准溶液滴定至溶液由紫红色变为蓝色为终点。
结果计算：
Ca（%）=
×100
式中：
T——EDTA标准滴定溶液对钙的滴定度；g/ml
V——滴定耗EDTA标液的体积；ml
V0——空白耗EDTA标液的体积；ml
m——试样的质量；g
注意事项：
1.使用氢氧化钾代替氢氧化钠有利于终点颜色的分辨
2.所加辅助试剂必须严格按照顺序加入，且必须摇匀后再加入下一种试剂
3.淀粉溶液应为现配现用
4.滴定终点应以绿色荧光消失为止，可在有水的黑色背景下强化终点的变化，因为微弱的绿色荧光在有水的黑色背景下会明显显示
5.不得使用低浓度的EDTA标准溶液进行石粉等高钙物质的测定。
因为石粉是非化学产品，均匀性差，0.2g的称样量不具代表性，高含量会放大这种不代表性的结果。
磷的测定
原理：
将试样中的有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的[（NH4）3P04NH4VO3·16MoO3]络合物，在波长400nm下进行比色测定。
试剂：
1.盐酸溶液：
250ml浓盐酸溶于750ml水中，即1+3盐酸
2.硝酸：
浓硝酸
3.钒钼酸铵显色剂：
称取偏钒酸铵1.25g，加水200ml，加热溶解，冷却后再加人250ml硝酸，另称取钼酸铵25g，加水400ml，加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容至1000ml，避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用，或者过滤后重新制作标准曲线。
方法步骤
1.试样的分解：
称取0.5-2g（准确至0.0002g）试样于坩埚中，在电炉上小心炭化，再放入马弗炉中于550℃下灼烧3h，取出坩埚，放在干燥器中冷却30min，在盛灰坩埚中加入（1+3）的盐酸10ml，3滴浓硝酸，在电炉上煮沸取下，待试样溶解冷却后，将此溶液转入100ml容量瓶中，用蒸馏水将坩埚冲洗干净，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
2.测定：
准确移取试样分解液1~2ml于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10.00ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0ml溶液为参比，用1cm比色池，在400nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。
结果计算：
样品中总磷的含量（%）按下式计算
P%=2AK/mV
式中：
m——试样的质量；g
K——100ml溶液分取2ml检测时对应的系数
V——移取试样分解液的体积；ml
A——吸光度值
注意事项：
1.试样分解液必须静置一段时间或干过滤方可测磷。
2.吸取时应小心免使溶液流动混浊而影响比色结果。
3.对于高磷含量的饲料级矿物质化合物（如磷酸氢钙）无需灰化，直接用酸溶液制备分解液，称取量应为0.25-0.30g，过高比色误差大。
4.微量元素预混料无需煅烧可直接用盐酸溶解
5.应保持比色皿的洁净，如果比色皿不洁净，可能为钒钼酸铵沉淀或者磷与钒钼酸铵形成的络合物，应使用浓硝酸浸泡，必要时煮沸。
6.对于数显式（非指针式）分光光度计，应每次调零后，测定0ml参比溶液的吸光光度值，可以自我检验上次实验后容量瓶是否洗净，以及温度变化对参比溶液吸光度值的影响，如果变化过大应重新绘制工作曲线。
7.指针式分光光度计应保证被测溶液吸光度在0.3～0.7之间.
磷酸氢钙中枸溶性磷含量的测定
试剂与仪器：
1.试剂：
中性柠檬酸铵溶液：
称取74g柠檬酸于300ml水中，加69ml氨水，在酸度计上用氨水调节PH值为7.0，将溶液贮存于密闭的瓶中备用。
2.仪器：
酸度计：
分度值为0.1PH，配有玻璃电极和饱和甘汞电极；水浴锅
（一）步骤：
1.称取试样0.5～0.6g（准确到0.0002g），置于250ml容量瓶中，加入70ml中性柠檬酸铵溶液，将容量瓶置于63～65℃的水浴锅中水浴1h，每隔15min摇动一次，每次摇动约30s，取出容量瓶，冷却到室温，加水至刻度，摇匀。
2.准确移取试样分解液1~10ml于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10.00ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0ml溶液为参比，用1cm比色池，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。
（三）结果计算：
样品中总磷的含量（%）按下式计算
P%=X/100×m×V
式中：
m——试样的质量；g
X——由标准曲线查得试样分解液含量；g
V——移取试样分解液的体积；ml
粗蛋白的测定
参考标准：
JJG196-2006常用玻璃量器检定规程
GB-T6432-1994饲料中粗蛋白测定方法
实验原理：
凯氏定氮法是使样品经硫酸和催化剂一同加热消化，使有机氮分解转化为氨与硫酸化合为硫酸氢铵。
然后加碱蒸馏，使铵游离出来，用硼酸吸收，再用标准盐酸滴定，计算氮的含量，乘以6.25可折算成粗蛋白含量。
主要仪器及试剂：
1.凯氏定氮瓶及蒸馏装置2.五水硫酸铜3.硫酸钾4.98%浓硫酸
5.2%硼酸溶液:
2g硼酸溶于100ml水溶液
6.40%氢氧化钠溶液:
40g氢氧化钠溶于100ml水溶液
7.0.1%甲基红：
0.1g甲基红溶于100ml乙醇溶液，搅拌溶解8.0.5%溴甲酚绿：
0.5g溴甲酚绿溶于100ml乙醇溶液，搅拌溶解
9.甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：
0.1%甲基红与0.5%溴甲酚绿等体积混合，阴凉处保存期三个月。
10.0.02mol/L的盐酸标准溶液（保存期2个月）
实验操作步骤：
1.称样：
按粗蛋白含量称取样品质量（可控制点：
降低容量误差对结果绝对误差的影响），
粗蛋白含量/%
称样量
/g
消化时间/min
滴定体积/ml
滴定管量程对应最大粗蛋白绝对误差
25ml（±0.04）
50ml（±0.05）
10
0.87
70
>10
0.16
0.20
20
0.88
70
>10
0.16
0.20
30
0.58
70
>10
0.24
0.30
40
0.66
70
>15
0.21
0.27
50
0.53
70
>15
0.27
0.33
60
0.58
70
>20
0.24
0.30
70
0.50
70
>20
0.28
0.35
80
0.44
70
>20
0.32
0.40
90
0.39
70
>20
0.36
0.45
准确至0.0002g，置于干燥的消化管中（可控制点：
避免样品粘挂于消化管壁影响样品的消化）。
2.消化：
加入硫酸铜约0.4g，加入硫酸钾约6g，轻轻抖动摇匀，再加入15ml浓硫酸，摇匀，开始应小火加热使样品焦化、泡沫消失（可控制点：
避免样品在消化过程中上冲粘附于消化管壁），在消化炉上消化一定的时间至消化液呈澄清透明的蓝绿色，相应的消化时间对应于上表中，最终的消化仲裁判定应在溶液澄清后继续消化至少30min（可控制点：
消化完全）。
3.转移：
将试样消煮液冷却，用洗瓶加入少量蒸馏水稀释（不可直接转移高浓度的消煮液，因为稀释是个剧烈的放热过程，容易炸裂容量瓶），摇匀，转入100ml容量瓶中，转移过程应充分，A.确保转移过程中消化管口始终在漏斗之上并向下倾斜，用带细尖嘴洗瓶冲洗管口3遍，在漏斗上靠掉管口边缘溶液再向上竖起，B.冲洗内壁，上下甩动3次，同A转移入容量瓶中，再重复2次。
4.定容:
冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。
严禁热定容，即溶液未冷却进行定容。
要加速冷却过程，可将容量瓶盖好盖子放入流水中进行冷却。
5.蒸馏：
A.蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸（可控制点：
确保水中氨以硫酸铵形式存在，保证蒸馏过程中空白的稳定性）。
B.将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20ml硼酸吸收液和2滴溴甲酚绿—甲基红指示剂的锥形瓶内。
C.用待蒸馏试样分解液润洗移液管2cm长末端，再放入容量瓶中吸取试液润洗移液管2-3次；准确移取试样分解液10.00ml注入蒸馏装置的反应室中，放入时移液管应靠在反应室入口的底部上，放完后不可用蒸馏水冲洗移液管外壁；用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml左右氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，直至反应液变棕色，将玻璃塞塞好，且有碱剩余在入口处密封，防止漏气。
蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，用蒸馏水冲洗冷凝感末端，洗液均流入锥形瓶内，再蒸馏1min（可控制点：
以pH试纸指示蒸馏终点），然后停止蒸馏。
6.滴定：
用0.02mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由绿色或蓝绿色变为淡红色为终点。
同样条件做空白，取10.00ml水从步骤2开始或者从步骤5开始。
7.计算：
粗蛋白（%）=
×100%
式中C：
盐酸
升级会员 