常见缓冲液的配方.docx

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常见缓冲液的配方

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20Co

1mol/L精胺（Spermine）:

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20Co

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）:

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物

学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

小份贮存于-20Co

分成小份贮存于-20Co或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加

0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100mlo

1mol/L氯化钾（KCI）:

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100mlo

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100mlo

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L）,混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA?

2H2O和20g的NaOH,

并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES:

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH

6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl:

力口8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT:

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-p-D-半乳糖苷）于10ml

水中，分成小份贮存于-20Co

100mmol/LPMSF:

1mol/LMgCI2:

溶解20.3gMgCI2?

6H2O于足量的水中，定容到100mlo

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙

或贮存于-20Co

20mg/ml蛋白酶K

（ProteinaseK）:

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml

水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20Co10mg/mlRnase（无DNase）（DNase—freeRNase）:

溶解10mg的胰蛋白

RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris—HCl调pH至7.5，于

100mlo

-20C贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）:

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至10N氢氧化钠（NaOH）:

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁

力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1Lo

10%SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100%三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5%X—gal（5-溴-4-氯-3-吲哚一3-半乳糖苷）：

溶解25mg的X—gal

于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20C。

100XDenhardt试剂（Denhardt'sregent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll，400型）

2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）

水2g2g2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于

-20C贮存。

10X标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl100mmol/LMgCl2

100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）

0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）

水5ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

200ul100mmol/L贮液

50ul1mmol/L贮液

0.5ml10mg/mL贮液

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20C0

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80C可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP10mmol/LdCTP10mmol/LdGTP10mmol/LdTTP

水2ul100mmol/LdATP贮液

12ul20％PEG8000/2.5MNaCl

成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20％聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20XSSC

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

3mol/L氯化钠水88.2g175.3g

补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加lOOulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1%。

在37C温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC

失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力

搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤

除去树脂后分成小份，充氮气于-80C贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4?

H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为

1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积

为1L。

1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值

877

685

625

565

510

450

390

330

280123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

7206.0

6.1

6.2

6.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl1mmol/LEDTA

水1ml1mol/LTris-HCI（pH7.4-8.0,25C）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer

将121g的Tris碱溶解于约

0.9L水中，再根据所要求的pH（25C下）加

浓盐酸的体积（ml）pH8.6

142128.53846566671.3769.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2

.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50XTris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

2mol/LTris碱

1mol/L乙酸

100mmol/LEDTA

水242g57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）补足1L5XTris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水54g27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4C贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6X碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠

6mmol/LEDTA18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚绿

0.25％二甲苯青FF

水300ul10N氢氧化钠

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.8g15mg25mg

补足到10ml6X聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF5mmol/LEDTA15％聚蔗糖（400型）

水1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml6X溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型）水2.5ml1％溴酚蓝

2.5ml1％二甲苯青FF1.5g

补足到10ml6X甘油凝胶上样液（4C贮存）

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF5mmol/LEDTA50％甘油

水1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

3ml3.9ml6X蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF5mmol/LEDTA40％聚蔗糖

水1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

4g

补足到10ml

0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF

200mmol/LEDTA

0.1％SDS

50％甘油

水20mg

20mg4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）100ul10％SDS5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨10g

酵母提取物5g

氯化钠10g

如果需要用1NNaOH（〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨20g

酵母提取物5g

氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

soc培养基

成分、方法同sOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每

100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L

葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的

滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨12g

酵母提取物24g

甘油4ml

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60C,再加100ml灭菌的170mmol/L

KH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4

溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2XYT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨16g

酵母提取物10g

氯化钠4ml

如果需要用1NNaOH（〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨20g

酵母提取物10g

葡萄糖20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml

的终浓度添加于生长培养基。

-20°C贮存。

常以25ug/ml〜50ug/ml羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20C贮存。

常以25ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20C

贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于

-20C贮存。

常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于

-20C贮存。

常以12.5ug/ml〜25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20C贮存。

常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于

-20C贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水

乙醇，定容至10ml0分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20C贮存0常以10ug/ml〜50ug/ml的终浓度添加于生长培养基0