人教版高中生物选修1微生物的实验室培养精编作业.docx
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人教版高中生物选修1微生物的实验室培养精编作业
微生物的实验室培养
一、单选题
1．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）
A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C.在适宜的条件下培育
D.结果都是可在培养基表面形成单个的菌落
【答案】D
【解析】稀释涂布法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养，A、B、C正确；只有稀释度足够大，才可以在培养基表面形成单个的菌落,D错误。
2．发酵工程的正确操作过程是：
①发酵②培养基的配制③灭菌④产品的分离与提纯
⑤菌种的选育⑥扩大培养和接种[来源:
学科网ZXXK]
A．①③④⑤②⑥B．⑤②③⑥①④
C．②⑤③①⑥④D．⑥⑤②④③①
【答案】B
【解析】略
3．下列关于微生物培养和利用的叙述，正确的是
A．利用稀释涂布平板法可对微生物进行计数
B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落
C．在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌
D．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌
【答案】ABD
【解析】
试题分析：
用稀释涂布平板法可以分离微生物也可以对微生物进行计数；接种时连续划线可以将菌体分散，经过培养可以得到单个菌落；在只含有尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌；当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红——纤维素的复合物便没法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
故选ABD
考点：
本题考查微生物的培养和利用。
点评：
本题意在考查考生的识记能力和理解应用能力，属于中等难度题。
4．关于微生物的实验室培养，下列表述正确的是
A.溶化时将称好的牛肉膏从称量纸上取下倒入烧杯
B.常见的消毒方法包括灼烧、煮沸、紫外线和喷洒化学试剂等
C.配制固体培养基时加入琼脂，其目的是为微生物生长提供碳源
D.用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀
【答案】D
【解析】试题分析：
溶化时将称好的牛肉膏同称量纸一同放入烧杯，而不是将牛肉膏从称量纸上直接倒入烧杯，A项错误；灼烧是常见的灭菌方法，不是消毒方法，B项错误；琼脂是凝固剂，其作用是使液体培养基转变成固体培养基，不为微生物生长提供任何营养成分，C项错误；用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀，D项正确。
考点：
微生物的分离和培养
5．下列关于微生物培养的叙述，正确的是
A.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
B.分离土壤中的细菌时，采集的土样经高温灭菌后制成土壤稀释液
C.土壤中各种细菌的数量不同，因此分离不同细菌时要采用不同的稀释度
D.用平板划线法纯化大肠杆菌时，灼烧接种环的次数少于培养基上划线区域数
【答案】C
【解析】倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，A错误；分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，其中的微生物全部被杀死，不能得到目的菌，因此不能灭菌处理，B错误；土壤中各种细菌的数量不同，因此分离不同细菌时要采用不同的稀释度，C正确；用平板划线法纯化大肠杆菌时，每一次划线前后都要灭菌，所以灼烧接种环的次数多于培养基上划线区域数，D错误。
6．培养基配制需要运用灭菌和消毒技术，但两者消灭的微生物种类和数量是不同的，下列哪一项能正确表示消毒结果和灭菌结果之间的关系（ ）
A.
B.
C.
D.
【答案】B
【解析】灭菌是指杀灭或者去除物体上所有微生物，包括抵抗力极强的细菌芽孢在内。
注意微生物不仅包括细菌，还有病毒，真菌，支原体，衣原体等等。
消毒是指杀死物体上的部分微生物，也可能是致病的微生物，细菌芽孢和非病原微生物可能还是存活的。
所以，一般来说，灭菌的结果应包含消毒的结果，选B。
【点睛】比较消毒和灭菌
项目
消毒
灭菌
条件
使用较为温和的理化方法
使用强烈的理化因素
结果
杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）
杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
适用
实验操作的空间、操作者的衣着和手
微生物的培养器皿、接种用具和培养基等
常用方法
煮沸消毒法（如100℃，5～6min），巴氏消毒法（80℃，15min），酒精、氯气、石碳酸等化学药剂消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
7．下列在微生物的实验室培养过程中，关于平板划线操作的叙述正确的是
A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B.打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞好棉塞
C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D.最后应将平板倒置，放入培养箱中培养
【答案】D
【解析】试题分析：
微生物培养接种实验中在每次使用的接种环、培养皿在使用后均要灭菌，A错误；操作过程是在无菌条件下进行的，打开的菌种管口通过火焰以防止杂菌进入试管造成污染，但并不是将试管进行灭菌，B错误；平板划线要分区域多次划线,第二次划线要从第一次划线的末端开始，C错误；接种完成后，将平板倒置，放人培养箱中培养，D正确。
考点：
本题考查微生物培养的知识。
意在考查能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
8．下列有关微生物培养的叙述错误的是（）
A．培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素
B．培养细菌时需将pH调至中性或微碱性
C．培养霉菌时需将培养基的pH调至碱性
D．培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件
【答案】C
【解析】维生素是乳酸菌生长繁殖所必须的，在体内又不能合成，因此要在培养乳酸菌的培养基中添加维生素，A正确；细菌生长繁殖所需要的PH是中性或微碱性，所以培养细菌时需将PH调至中性或微碱性，B正确；霉菌生长所需要的PH是酸性，培养霉菌时应将PH调至酸性，在碱性情况下不易繁殖，甚至会导致霉菌死亡，培养霉菌时应将PH调至酸性，C错误；厌氧微生物在有氧时无氧呼吸受抑制，因此培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件，D正确．
【考点定位】微生物的分离和培养
【名师点睛】本题是根据微生物的代谢特点配制培养基和控制培养条件的题目，根据选项涉及的具体问题梳理相关知识点，然后分析判断．
9．基因工程所用的DNA连接酶来源于（）
A．基因工程B．酶工程
C．细胞工程D．发酵工程
【答案】B
【解析】：
基因工程、细胞工程和发酵工程中所需要的酶，往往是通过酶工程来获得。
如连接酶、限制性内切酶。
10．在微生物的培养过程中对操作者的双手、培养基、培养皿、接种环、超净工作台的处理方法依次是
A.酒精消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒
B.酒精消毒、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒
C.紫外线消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒
D.酒精消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、干热灭菌、酒精消毒
【答案】A
【解析】消毒是使用较为温和的理化方法，杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），适用于实验操作的空间、操作者的衣服和手、食品等；灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，适用于微生物的培养器皿、接种用具和培养基等。
据此可知：
在微生物的培养过程中对操作者的双手、培养基、培养皿、接种环、超净工作台的处理方法依次是酒精消毒、高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、紫外线消毒，A项正确，B、C、D三项均错误。
11．欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（）
A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释
B．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
C．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板
D．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照
【答案】B
【解析】
试题分析：
从土壤中分离分解尿素的细菌时，由于土壤浸出液的微生物种类和数量较多，因此需要用无菌水进行一系列梯度稀释，故A正确；用尿素为唯一氮源的培养基可以筛选出分解尿素的细菌，加入刚果红指示剂只能鉴定出分解尿素的细菌，而不能筛选，故B错误；同一浓度的土壤浸出液至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，故C正确；未接种的培养基在相同条件下培养为对照组，可以判断培养基是否灭菌彻底，故D正确。
考点：
本题考查微生物的实验室培养的有关知识，意在考查考生识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
12．刚果红是一种酸性染料，能将下列哪些物质染色（）
①纤维二糖②葡萄糖③纤维素④苏木精⑤弹性纤维
A．①③④B．①②③C．②③④D．③④⑤
【答案】D
【解析】刚果红是一种酸性染料，可与纤维素反应形成红色复合物，在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等；在植物制片中可以跟苏木精作二重染色。
13．下图表示几种含氮物质之间相互转化的关系，下列表述正确的是：
A．⑤⑦是异化作用的过程，⑥⑧是同
化作用的过程
B．完成①过程的生物均为原核生物，在生态系统中的地位属于分解者
C．疏松土壤可促进④过程，抑制②过程
20070405
D．③过程是脱氨基作用
【答案】C
【解析】略
14．下列对刚果红染色法的叙述，不正确的是
A．可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应
B．可以在倒平板时就加入刚果红
C．既可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，也可以在倒平板时就加入刚果红
D．可以将刚果红与培养基中的其他物质混合后再灭菌倒平板
【答案】D
【解析】
试题分析：
常用的刚果红染色法有两种：
一是先培养微生物长出菌落后，再加入刚果红进行颜色反应；一种是配制好培养基灭菌后
，倒平板时加入灭菌处理的刚果红，再接种微生物培养，直至产生透明圈，所以，A、B、C三项均正确，D项错误。
考点：
本题考查纤维素分解菌的筛选的相关知识，意在考查能理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用的能力。
15．有关平板划线操作不正确的是
A.在第一次划线前灼烧接种环和每次划线前灼烧接种环的目的相同
B.灼烧接种环后，必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环菌液
C.划线结束后，将平板倒置，放入培养箱中培养
D.划线时要最后一区的划线不能与第一区线相连
【答案】A
【解析】在第一次划线前灼烧接种环是为了消灭接种环上可能存在的微生物，避免引入杂菌，每次划线前灼烧接种环是为了杀死接种环上残留的菌种，使划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落，A项错误；灼烧接种环后，必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环菌液，否则高温接种环会杀死菌种，B项正确；划线结束后，将平板倒置，以防止皿盖上的冷凝水珠滴落在培养基上，C项正确；第一区线菌种的密度最大，划线时最后一区的划线不能与第一区线相连，以避免多个菌体连在一块，D项正确。
【点睛】平板划线法技术要求：
（1）操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：
第一次操作
每次划线之前
划线结束
目的
杀死接种环上原有的微生物
杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少
杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
（2）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
（3）c．第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
（4）划线时最后一区不要与第一区相连。
（5）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。
二、非选择题
16．自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途。
研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究。
请回答下列问题：
（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是________（填序号）
①酒精灯②接种环③高压蒸汽灭菌锅④棉塞
（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。
（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是_________________________________。
（4）涂布培养四天后，可通过观察________的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类。
（5）为了进一步筛选高效固氮菌，研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如下表：
甲菌乙菌丙菌丁菌
菌量（个/mL）2.1×1052.5×1051.8×1052.0×105
含氮量（K）3.324.385.345.32
①培养过程中需不断振荡的目的是__________________________________________________。
②可以采用________方法对固氮菌进行计数，假设计数室长和宽均为1mm，深0.1mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为________个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应________。
③由上述结果可知，________菌的固氮效率最高。
【答案】
（1）②
（2）缺氮
（3）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果（4）菌落
（5）①让固氮菌与培养液充分接触②抽样检测2.8×108对培养液稀释后计数③丙
【解析】
试题分析：
（1）平板培养基配制的基本流程为：
计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节PH→灭菌（将配制好的培养基转移至锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅）→倒平板（在酒精灯火焰旁进行），上述过程不需要接种环，即②。
（2）自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，可在缺氮培养基上生长，因此，若要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于缺氮培养基上进行筛选。
（3）在涂布平板时，若滴加到培养基表面的菌悬液过多，则会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。
（4）不同的微生物表现出不同的菌落形态特征，所以涂布培养四天后，可通过观察菌落的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类。
（5）①培养过程中需不断振荡的目的是让固氮菌与培养液充分接触。
②对固氮菌进行计数，可采用抽样检测的方法。
假设计数室长和宽均为1mm，深0.1mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为1mm×1mm×0.1mm×7×10mL×400×10000=2.8×108个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应对培养液稀释后计数。
③表中信息显示：
丙菌培养液中的含氮量最高，说明丙菌的固氮效率最高。
考点：
本题考查微生物的培养与应用的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。
17．（8分）请分析回答下列有关微生物的问题：
（1）微生物培养基的配方中，一般都含有水、__________和无机盐。
对微生物培养基进行灭菌的常用方法是______________。
（2）如图所示的操作是培养基配置过程中的倒平板，该操作的正确使用顺序是________（用图中的序号和箭头表示）。
②步骤需要培养基冷却到_________才能进行操作。
③步骤操作的目的是__________。
（3）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是_______。
（4）获取的菌种通常是在___________条件下进行短时间保藏，也可以利用___________的方法短期保存。
【答案】碳源和氮源高压蒸汽灭菌④→①→②→③50℃左右防止水蒸气冷凝后滴入培养基造成污染避免培养基污染棉塞低温（4℃）甘油管藏
【解析】
试题分析：
自然界中目的菌株的筛选的依据是根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找．实验流程为土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定．常用的接种方法主要有平板划线法与稀释涂布平板法。
（1）微生物培养基的配方中一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，对其灭菌的方法是高压蒸汽灭菌。
（2）图示过程表示倒平板过程，倒平板操作首先需要在④酒精灯火焰旁进行，锥形瓶口要过火焰①以防污染，然后倒平板②，最后将培养皿倒置④。
倒平板时需要培养基冷却到50℃左右能操作，③将平板倒置步骤操作的目的是防止水蒸气冷凝后滴入培养基造成污染。
（3）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净，这样可以避免培养基污染棉塞。
（4）菌种的临时保藏法通常在低温（4℃）条件下进行，长期保存需要使用甘油管藏法。
（该题倒数第4个字有误，短期改成长期）
18．微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。
以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。
请分析回答：
（1）土壤有________________之称，该类微生物应取自_____________的土壤。
（2）用于筛选和纯化该类微生物的培养基从功能上讲属于________培养基。
对培养基进行灭菌，常用的方法是____________________________。
（3）接种后，必须密封培养，其原因是__________________。
培养一段时间后，在培养基上形成降油圈，此时选取降油圈____________的菌落作为高效菌株。
（4）扩大培养过程中需要对微生物进行计数，取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为___________个/mL。
该统计结果______（低于/高于）实际值。
【答案】微生物的天然培养基长期被石油污染（含石油多的）选择高压蒸汽灭菌法该类微生物是厌氧型微生物最大1000低于
【解析】试题分析：
熟记并理解微生物的实验室培养、微生物的分离与计数的相关知识、形成清晰的知识网络。
在此基础上从题意中提取信息并结合题意作答。
（1）土壤有“微生物的天然培养基”之称。
筛选能降解石油的目的菌，应取自长期被石油污染（含石油多的）的土壤。
（2）配制以石油为唯一碳源的培养基，用以筛选出能降解石油的菌株，则此培养基从功能上看为选择培养基。
常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。
（3）接种后，必须密封培养的原因是：
该类微生物是厌氧型微生物。
目的菌分解石油时会在培养基上形成降油圈，所以应选择降油圈大的菌落作为高效菌株。
（4）取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为[（200＋180＋220）÷3]÷0.2＝1000个/mL。
培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此用此计数方法统计的结果往往低于实际值。
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