美国药典34版71无菌检测中文.docx

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美国药典34版71无菌检测中文

71STERILITYTESTS无菌检测

PortionsofthisgeneralchapterhavebeenharmonizedwiththecorrespondingtextsoftheEuropeanPharmacopeiaand/ortheJapanesePharmacopeia.Thoseportionsthatarenotharmonizedaremarkedwithsymbols

tospecifythisfact.

此通则的各部分已经与欧洲药典和/或日本药典的对应部分做了协调。

不一致的部分用符号

来标明。

ThesePharmacopeialproceduresarenotbythemselvesdesignedtoensurethatabatchofproductissterileorhasbeensterilized.Thisisaccomplishedprimarilybyvalidationofthesterilizationprocessoroftheasepticprocessingprocedures.

这些药典规定程序自身的设计不能确保一批产品无菌或已经灭菌。

这主要是通过灭菌工艺或者无菌操作程序的验证来完成。

Thetestisappliedtosubstance,preparations,orarticleswhich,accordingtothePharmacopeia,arerequiredtobesterile.However,asatisfactoryresultonlyindicatesthatnocontaminatingmicroorganismhasbeenfoundinthesampleexaminedundertheconditionsofthetest.

检测应用于根据药典要求无菌的如物质、药剂或商品。

而令人满意的结果只包括在这样的检测条件下被测样品的完全无微生物污染。

Precautionsagainstmicrobialcontamination微生物污染的预防

Thetestforsterilityiscarriedoutunderasepticconditions.Inordertoachievesuchconditions,thetestenvironmenthastobeadaptedtothewayinwhichthesterilitytestisperformed.Theprecautionstakentoavoidcontaminationaresuchthattheydonotaffectanymicroorganismsthataretoberevealedinthetest.Theworkingconditionsinwhichthetestsareperformedaremonitoredregularlybyappropriatesamplingoftheworkingareaandbycarryingoutappropriatecontrols.

无菌测试要在无菌条件下进行。

为了达到这样的条件，测试环境要适应于无菌测试的要求。

为了避免微生物污染而采取的预防措施不能有可检出的微生物污染。

进行测试的环境要进行定期的取样检测并采取适宜的控制措施。

Culturemediaandincubationtemperature培养基和培养温度

MediaforthetestmaybepreparedasdescribedbeloworequivalentcommercialmediamaybeusedprovidedthatcomplywiththerequirementsoftheGrowthPromotionTestofAerobes,Anaerobes,andFungi.

用于无菌测试的培养基可以按下述方法配制或采用满足好氧菌，厌氧菌和真菌促生长要求的物质的等效商业培养基。

Thefollowingculturemediahavebeenfoundtobesuitableforthetestforsterility.FluidThioglycollateMediumisprimarilyintendedforthecultureofanaerobicbacteria.However,itwillalsodetectaerobicbacteria.Soybean–CaseinDigestMediumissuitableforthecultureofbothfungiandaerobicbacteria.

下面的培养基已经被证实适合进行无菌检测。

巯基醋酸盐液体培养基主要用于厌氧菌的培养。

但其也用于检测好氧菌。

大豆酪蛋白消化物培养基适合于培养霉菌和好氧菌。

FluidThioglycollateMedium巯基醋酸盐液体培养基

L-CystineL-胱氨酸

0.5g

SodiumChloride氯化钠

2.5g

DextroseMonohydrate/Anhydrous葡萄糖水化物/无水葡萄糖

5.5/5.0g

Agar琼脂

0.75g

YeastExtract（water-soluble）

酵母提取物（水溶性）

5.0g

PancreaticDigestofCasein

酪蛋白胰酶消化物

15.0g

SodiumThioglycollate巯基乙酸钠

0.5g

orThioglycolicAcid或者巯基乙酸

0.3ml

ResazurinSodiumSolution（1in1000）,

freshlyprepared

刃天青钠溶液（1比1000），新配制

1.0ml

PurifiedWater纯化水

1000ml

pHaftersterilization:

7.1±0.2灭菌后pH：

7.1±0.2

MixtheL-cystine,sodiumchloride,dextrose,yeastextract,andpancreaticdigestofcaseinwiththepurifiedwater,andheatuntilsolutioniseffected.Dissolvethesodiumthioglycollateorthioglycolicacidinthesolutionand,ifnecessary,add1Nsodiumhydroxidesothat,aftersterilization,thesolutionwillhaveapHof7.1±0.2.Iffiltrationisnecessary,heatthesolutionagainwithoutboiling,andfilterwhilehotthroughmoistenedfilterpaper.Addtheresazurinsodiumsolution,mix,andplacethemediuminsuitablevesselsthatprovidearatioofsurfacetodepthofmediumsuchthatnotmorethantheupperhalfofthemediumhasundergoneacolorchangeindicativeofoxygenuptakeattheendoftheincubationperiod.Sterilizeusingavalidatedprocess.Ifthemediumisstored,storeatatemperaturebetween2and25inasterile,airtightcontainer.Ifmorethantheupperone-thirdofthemediumhasacquiredapinkcolor,themediummayberestoredoncebyheatingthecontainersinawater-bathorinfree-flowingsteamuntilthepinkcolordisappearsandbycoolingquickly,takingcaretopreventtheintroductionofnonsterileairintothecontainer.Donotusethemediumforalongerstorageperiodthanhasbeenvalidated.

将L-胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物、酪蛋白胰酶消化物与纯化水混合，并加热至实现溶解。

将巯基乙酸钠或者巯基乙酸溶解于该溶液，如果需要可再加入1N氢氧化钠，以便在灭菌后该溶液呈pH值7.1±0.2。

如需要则过滤，再次加热该溶液但不得煮沸，并趁热以湿润滤纸将该溶液过滤。

加入刃天青钠溶液，混匀，并将该培养基置于适当容器中，该容器应为培养基提供特定的面积－深度比，以使在培养期末表明氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分。

使用经过验证的工艺进行灭菌。

如果需要储存该培养基，将其置于无菌、气密容器中，在2°至25°之间储藏。

如果超过上部三分之一的培养基已经呈粉色，可以用以下方法恢复该培养基一次：

在水浴锅中或者自由流动蒸气中加热该容器，直至粉色消失，并迅速放凉，须小心防止非无菌空气进入到容器中。

禁止使用超过验证储存期限的培养基。

FluidThioglycollateMediumistobeincubatedat30°-35°.Forproductscontainingamercurialpreservativethatcannotbetestedbythemembranefiltrationmethod,FluidThioglycollateMediumincubatedat20-25°maybeusedinsteadofSoybean-CaseinDigestMediumprovidedthatithasbeenvalidatedinGrowthPromotionTestofAerobes,Anaerobes,andFungi.Whereprescribedorjustifiedandauthorized,thefollowingalternativethioglycollatemediummightbeused.PrepareamixturehavingthesamecompositionasthatoftheFluidThioglycollateMedium,butomittingtheagarandtheresazurinsodiumsolution.Sterilizeasdescribedabove.ThepHaftersterilizationis7.1±0.2.Heatinawaterbathpriortouseandincubateat30-35°underanaerobicconditions.

巯基醋酸盐液体培养基将在30-35°条件下进行培养。

如果产品含有不能用滤膜法检测的防腐剂，在20-25°培养的巯基醋酸盐液体培养可以代替通过好氧菌、厌氧菌和真菌促生长实验验证的大豆-酪蛋白消化物培养基。

如果有规定或经授权的正当理由，下面的替代巯基醋酸盐培养基也可以使用。

配制与巯基醋酸盐液体培养基成分相同，但省略了琼脂和刃天青钠溶液的混合物，按上述方法灭菌。

灭菌后pH值为7.1±0.2。

使用前水浴加热，在厌氧条件下培养。

Soybean–CaseinDigestMedium大豆-酪蛋白消化物培养基

PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酶消化物

17.0g

PapaicDigestofSoybeanMeal大豆粉木瓜蛋白酶消化物

3.0g

SodiumChloride氯化钠

5.0g

DibasicPotassiumPhosphate磷酸氢二钾

2.5g

Dextrose（C6H12O6·H2O）葡萄糖

2.5/2.3g

PurifiedWater纯化水

1000mL

灭菌后pH7.3±0.2

DissolvethesolidsinthePurifiedWater,heatingslightlytoeffectasolution.Coolthesolutiontoroomtemperature,andadjustthepHwith1Nsodiumhydroxidesothat,aftersterilization,itwillhaveapHof7.3±0.2.Filter,ifnecessarytoclarify,dispenseintosuitablecontainers,andsterilizeusingavalidatedprocedure.Storeatatemperaturebetween2and25inasterilewell-closedcontainer,unlessitisintendedforimmediateuse.Donotusethemediumforalongerstorageperiodthanhasbeenvalidated.

将固体物质溶解于纯净水，轻微加热以实现溶解。

放凉溶液至室温，并用1N氢氧化钠调整pH值，以便在灭菌后其pH值呈7.3±0.2。

过滤，如需要则使之澄清，分装入适合的容器，并用经过验证的程序消毒。

如果不立刻使用，则在2°到25°之间以无菌且密闭良好的容器保存。

禁止使用超过验证储存时间的培养基。

Soybean–CaseinDigestMediumistobeincubatedat22.5±2.5.

大豆-酪蛋白消化物培养基将在22.5±2.5°条件下培养。

MediaforPenicillinsorCephalosporins用于青霉素和头孢菌素的培养基

WheresterilitytestmediaaretobeusedintheDirectInoculationoftheCultureMediummethodunderTestforSterilityoftheProducttobeExamined,modifythepreparationofFluidThioglycollateMediumandtheSoybean–CaseinDigestMediumasfollows.Tothecontainersofeachmedium,transferasepticallyaquantityofβ-lactamasesufficienttoinactivatetheamountofantibioticinthespecimenundertest.Determinethequantityofβ-lactamaserequiredtoinactivatetheantibioticbyusinga-lactamasepreparationthathasbeenassayedpreviouslyforitspenicillin-orcephalosporin-inactivatingpower.[NOTE—Supplementedβ-lactamasemediacanalsobeusedinthemembranefiltrationtest.]Alternatively（inanareacompletelyseparatefromthatusedforsterilitytesting）,confirmthatanappropriateamountof-lactamaseisincorporatedintothemedium,followingeithermethodunderValidationTest,usinglessthan100colony-formingunits（cfu）ofStaphylococcusaureus（seeTable1）asthechallenge.Typicalmicrobialgrowthoftheinoculatedculturemustbeobservedasaconfirmationthatthe-lactamaseconcentrationisappropriate.

当无菌检查培养基用于供试产品无菌检查项下的培养基直接接种法时，按如下内容变更巯基醋酸盐液体培养基和大豆-酪蛋白消化物培养基的制备方法。

向每一种培养基的容器中，以无菌操作转移足够灭活供试样品中所存在抗生素的β-内酰胺酶。

使用此前已经对其青霉素或头孢菌素灭活能力进行了测定的β-内酰胺酶配制品，来测定灭活该抗生素所必需的β-内酰胺酶数量。

[注意：

补充的β-内酰胺酶培养基也可以用于膜过滤试验]或者（在与无菌试验所用场所彻底隔离的区域中），按照验证试验项下的任意一种方法，使用少于100个菌落（cfu）的金黄色葡萄球菌（见表1）作为验证菌，来确认适当数量的β-内酰胺酶已经被整合到该培养基中。

必须观测到接种后培养物中出现典型微生物生长，才能确认β-内酰胺酶浓度是适当的。

Table1.StrainsoftheTestMicroorganismsSuitableforUseintheGrowthPromotionTestandthe

ValidationTest

表1适合用于生长促进试验和验证试验中的试验微生物的菌株

Aerobicbacteria好氧菌

Staphylococcusaureus

金黄色葡萄球菌

ATCC6538,CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518

NBRC13276

Bacillussubtilis枯草芽孢杆菌

ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054,NBRC3134

Pseudomonasaeruginosa

绿脓杆菌

ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118,NBRC13275

Anaerobicbacterium厌氧菌

Clostridiumsporogenes

产芽胞梭状芽胞杆菌

ATCC19404,CIP79.3,NCTC532orATCC11437,NBRC14293

Fungi霉菌

Candidaalbicans白色念珠菌

ATCC10231,IP48.72,NCPF3179,NBRC1594

Aspergillusniger黑曲霉

ATCC16404,IP1431.83,IMI149007,NBRC9455

1 AnalternativemicroorganismisKocuriarhizophila（micrococcusluteus）ATCC9341.替代微生物是藤黄微球菌（micrococcusluteus），ATCC9341

2AnalternativetoClostridiumsporogenes,whenanonspore-formingmicroorganismisdesired,isBacetroidesvulgatus（ATCC8482）.当需要不形成芽孢微生物时，产芽胞梭状芽胞杆菌的替代微生物是Bacetroidesvulgatus（ATCC8482）

Themediausedcomplywiththefollowingtests,carriedoutbefore,orinparallel,withthetestontheproducttobeexamined.

所使用的培养基须符合下列试验，这些试验应在检验供试产品之前或者同时进行。

STERILITY无菌状态

Confirmthesterilityofeachsterilizedbatchofmediumbyincubatingaportionofthemediaatthespecifiedincubationtemperaturefor14days.Nogrowthofmicroorganismsoccurs.

通过在指定培养温度下将一部分培养基培养14天，来确认每一批已灭菌培养基的无菌状态。

不得出现微生物生长。

GROWTHPROMOTIONTESTOFAEROBES,ANAEROBES,andFUNGI

好氧菌、厌氧菌、霉菌的生长促生长试验

Testeachlotofready-preparedmediumandeachbatchofmediumpreparedeitherfromdehydratedmediumorfromingredients1.SuitablestrainsofmicroorganismsareindicatedinTable1.

检查每一批已经配制好的培养基和每一批用脱水培养基或配料制备的培养基1。

适当微生物菌株见表1。

InoculateportionsofFluidThioglycollateMediumwithasmallnumber（notmorethan100cfu）ofthefollowingmicroorganisms,usingaseparateportionofmediumforeachofthefollowingspeciesofmicroorga