注射用雷贝拉唑钠的质量研究.docx

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注射用雷贝拉唑钠的质量研究

注射用雷贝拉唑钠的质量研究

（作者:

___________单位:

___________邮编:

___________）

作者：

胡开方，牛万刚，朱友双

【摘要】目的通过对注射用雷贝拉唑钠质量方法的研究，制定出符合注射用雷贝拉唑钠的质量标准。

方法参考《中国药典》2005年版二部附录规定的检测方法，制定合适的注射用雷贝拉唑钠的鉴别、检查方法，采用高效液相法测定有关物质及含量，色谱柱：

C18柱（5μm,150mm×4.6mm）；流动相：

乙腈-水-三乙胺（30:

70:

0.5）（pH=7.0）；检测波长为292nm。

结果注射用雷贝拉唑钠在60.05～140.11μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系（r2=0.9994）,RSD=0.442%。

结论制定的方法专属性强，重复性好，可以作为检查注射用雷贝拉唑钠质量的检测依据。

【关键词】注射用雷贝拉唑钠；有关物质；含量测定；高效液相色谱法

消化系统病症是常见的多发病之一，其中溃疡病为最常见。

据IMSHEALTH的MIDS系统统计，治疗溃疡病药物一直稳居全球销售额首位。

近十几年抗溃疡药物研究已趋向于能选择性抑制胃酸分泌的药物，这些药物大致分为以下四类：

（1）胆碱能M-受体拮抗剂，如哌仑西平；

（2）组胺H2-受体拮抗剂，如西咪替丁和雷尼替丁；（3）黏膜保护促进剂，如前列腺素类似物PGE2等；（4）质子泵抑制剂（PPI）－H+/K+-APT酶抑制剂，如奥美拉唑和雷贝拉唑钠。

M-受体拮抗剂因副作用大，而抗溃疡作用较弱，逐渐被H2-受体拮抗剂所取代；后者目前虽然方兴未艾，且几经改进，但有不适应证和副作用等缺陷［1，2］。

作为细胞保护剂前列腺素类似物因其来源和合成困难，且作用强度不大，前景不太理想。

20世纪80年代开发上市的PPI，因其作用机制独特，作用特异性高，作用强度大且时间长，广泛用于与酸有关的各种紊乱性疾病而日益受到青睐。

雷贝拉唑钠是一种苯并咪唑取代物，通过与胃腔内壁细胞质子泵的键合，抑制胃酸分泌［3］。

本品特异性抑制三磷酸腺苷酶的作用，该酶是胃酸生成的关键酶。

雷贝拉唑钠（Rabeprazolesodium）是由日本卫材公司开发的质子泵抑制剂，国内外已经上市的剂型有肠溶片和肠溶胶囊，我公司已经成功开发出雷贝拉唑钠肠溶胶囊，规格为10mg/粒。

注射用雷贝拉唑钠于2004年7月在印度上市，剂量为20mg，生产公司为印度Cadila制药有限公司，商品名：

RabelocIV。

为方便临床选择用药，我们研制了注射用雷贝拉唑钠，规格为20mg/瓶。

综上所述，为控制产品的质量，本文设计了注射用雷贝拉唑钠的质量研究。

1药品、材料和仪器

1.1药品

（1）样品：

样品批号及规格：

050304、050306、050308（20mg/瓶）；样品处方：

雷贝拉唑钠：

甘露醇（20mg:

40mg）；样品来源：

扬子江药业集团有限公司药物研究所自制。

（2）对照品：

本品对照品来源：

以公司申报原料精制方法纯化所得精制品（批号：

041225），其有关物质为0.15%，含量为99.82%，可作为分析用对照品。

1.2材料甘露醇：

注射级，青岛明月海藻集团有限公司提供；甲醇：

色谱级，国药集团化学试剂有限公司提供；乙腈：

色谱级，国药集团化学试剂有限公司提供；三乙胺：

分析纯，天津市博迪化工有限公司提供。

1.3仪器紫外分光光度计：

UV2401PC（日本岛津）；高效液相色谱仪：

LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器（日本岛津）；分析天平：

100AS（德国赛多利斯）；酸度计：

PHS-25C（上海鹏顺科学仪器有限公司）；微粒分析仪：

GWF-5J（天河医疗仪器有限公司）。

2注射用雷贝拉唑钠的质量研究

2.1性状取本品三批样品（批号：

050304、050306、050308），目测检查；结果：

三批样品均为白色疏松块状物及粉末；本品所用的原料（雷贝拉唑钠）及辅料（甘露醇）均为类白色或白色，且为冷冻干燥制品。

样品性状由原辅料性状决定，根据以上结果确定本品性状为：

本品为白色或类白色疏松块状物及粉末。

2.2鉴别

2.2.1雷贝拉唑钠特征反应根据原料的鉴别方法确定本品的化学鉴别方法为：

取本品适量（约相当于雷贝拉唑钠10mg），加水20ml使溶解，取2ml，加稀盐酸5滴，再加硅钨酸试液1ml，摇匀，即产生白色絮状沉淀。

取注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：

050304、050306、050308），依上法测定，均产生白色絮状沉淀。

用处方量辅料，参照上述方法进行试验，结果无白色絮状沉淀。

结果显示：

本品所用辅料对上述鉴别无影响。

上述鉴别方法专属性强，列入标准。

2.2.2高效液相色谱法［4］在含量测定项下记录的高效液相色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰保留时间一致。

取本品三批样品（批号：

050304、050306、050308）及雷贝拉唑钠对照品，依上法测定，结果见图1～4。

按处方量比例配制辅料空白液，照含量检测法色谱条件进样，在对照品主峰保留时间位置，空白液无峰，结果见图5。

综合以上结果，高效液相鉴别方法专属性强，列入标准。

2.2.3钠盐鉴别反应本品为苯并咪唑的钠盐，因此应符合钠盐的鉴别反应，方法如下：

取铂丝，用盐酸润湿后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。

对注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：

050304、050306、050308），依上法测定，均有鲜黄色火焰。

取处方量辅料，参照上述方法进行试验，结果火焰无色。

结果显示：

本品所用辅料对上述鉴别无影响。

上述鉴别方法专属性强，列入标准。

3检查

3.1碱度仪器：

PHS-25C型酸度计；试剂：

仪器校正用标准缓冲溶液；试验方法：

取混合磷酸盐标准缓冲液（pH6.86）校正pH计（雷磁PHS-25C），使仪器示值为pH6.86，定位后，用pH9.28的四硼酸钠缓冲液核对仪器示值，调斜率使示值为pH9.28。

取注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：

050304、050306、050308）各1瓶，加水20ml使溶解，照pH值测定法，依法测定（中国药典2005年版二部附录ⅥH）［5］，测得结果见表1。

表1注射用雷贝拉唑钠碱度测定结果根据样品的pH值测定结果及处方工艺筛选结果确定本品的碱度范围为：

9.5～11.5。

3.2溶液的澄清度与颜色试剂：

浊度标准液；澄清度试验方法：

取三批样品各5瓶，分别加注射用水5ml使溶解，与5ml浊度标准液在暗室内垂直同置于伞棚灯下，照度为1000lx,从水平方向观察、比较；检查溶液的澄清度及其浑浊程度，结果见表2；试剂：

黄色标准比色液；颜色试验方法：

取三批样品各5瓶，分别加注射用水5ml使溶解，与5ml黄色1号标准液同置白色背景下，平行观察，检查溶液颜色，结果见表2。

本品稳定性考察结果表明：

本品在考察过程中溶液的颜色略有加深，其他指标均无明显变化，故参照稳定性考察结果，将本品临床试验用质量标准中溶液的颜色限定为“不超过黄色标准2号色”；由以上结果确定：

本品溶液应澄清；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2005年版二部附录ⅨB）比较，不得更浓；如显色，与黄色2号标准液（中国药典2005年版二部附录ⅨA）比较，不得更深。

表2注射用雷贝拉唑钠澄清度与颜色测定结果

3.3水分本试验分别采用干燥失重和费休氏法测定本品的水分，比较结果，选择并最终确定注射用雷贝拉唑钠的水分测定方法。

3.3.1干燥失重测定水分取三批样品各约1.0g，平行取3份，置于洁净、干燥并精密称定的扁形容量瓶中，精密称定，于五氧化二磷减压干燥至恒重后，置干燥器中放冷至室温，称重，根据减失重量计算本品的干燥失重（中国药典2005年版二部附录ⅧL）［5］。

干燥失重结果见表3。

干燥失重=（未干燥前重量-干燥后重量）/未干燥前重量×100%。

3.3.2水分测定取三批样品各100mg，照水分测定法（中国药典2005年版二部附录ⅧM第一法卡尔·费休法）测定［5］，结果见表4。

结果：

分别采用干燥失重及水分测定本品三批样品的含水量，结果表明两法测定的结果无明显差异，均不超过5.0%。

考虑到操作方便和结果的精密度，本品采用费休氏法进行测定水分，限度为不超过5.0%。

表3注射用雷贝拉唑钠干燥失重结果表4注射用雷贝拉唑钠水分测定结果

3.4装量差异检查照（中国药典2005年版二部附录ⅠB）注射剂项下的注射用无菌粉末的装量差异检查法检查［5］。

取三批样品各5瓶，除去标签、铝盖，瓶外壁用乙醇洗净，热风干燥，开启瓶盖，分别迅速精密称定，倾出内容物，瓶内壁用水、无水乙醇洗净，在热风下干燥，再分别称定每瓶的重量求出每一瓶的装量与平均装量，计算装量差异。

检查结果见表5。

3.5不溶性微粒仪器：

GWF-5J微粒分析仪；试验方法：

取样品2瓶，加入5ml注射用水使溶解，用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，先倒出部分供试品溶液冲洗开启口及取样杯，再将供试品溶液倒入取样杯中，静置脱气后，置于取样器上，开启搅拌，使溶液混合均匀（避免气泡产生），依法测定3次，每次取样5ml，记录数据，每个样品的第一次数据不计，取后续测定结果的平均值，另取本品4瓶，同法测定，取3次结果的平均值。

结果三批样品的不溶性微粒均符合规定，检查结果见表6。

3.6可见异物试验方法：

取三批样品各20瓶，除去溶液标签，擦净容器外壁，分别加入5ml无菌注射用水使溶解，轻轻旋转和翻转容器使药液中存在的可见异物悬浮，置供试品于遮光板边缘处，光照度为2000lx,在明视距离（供试品至人眼的距离为25cm），分别在黑色和白色背景下，手持供试品颈部使药液轻轻翻转，用目检视（中国药典2005年版二部附录XIH）［5］，结果均符合要求，见表7。

表5装量差异检查结果表6注射用雷贝拉唑钠不溶性微粒检查结果表7注射用雷贝拉唑钠可见异物检查结果

4含量测定

采用高效液相色谱法（HPLC法）。

4.1仪器与试药仪器：

高效液相色谱仪，LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器（日本岛津）；试剂：

乙腈（色谱级）、三乙胺（分析级）；流动相：

乙腈-水-三乙胺（30:

70:

0.5）（用磷酸调pH值至7.0）；混合溶剂：

乙腈-水-三乙胺（30:

70:

0.5）（用磷酸调pH值至10.0）。

4.2检测波长的选择精密称取雷贝拉唑钠对照品20mg，加“4.1项下”混合溶剂溶解并稀释,制成每1ml中含雷贝拉唑钠100μg的溶液，照分光光度法（中国药典2005年版二部附录IVA）测定，在200～400nm波长范围内进行紫外扫描，结果见图6。

图6含量测定HPLC法紫外扫描图

由图6可见本品在215nm、292nm波长处有最大吸收，215nm属于边缘吸收波长，会对测定结果产生影响，故我们选择292nm作为含量测定的波长。

4.3色谱条件与系统适用性色谱柱：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒度5μm，规格:

150mm×4.6mm；流动相：

乙腈-水-三乙胺（30:

70:

0.5）（用磷酸调pH值至7.0）；混合溶剂：

乙腈-水-三乙胺（30:

70:

0.5）（用磷酸调pH值至10.0）；流速：

1.0ml/min；检测波长：

292nm；进样量：

10μl。

4.4专属性试验按处方比例称取辅料甘露醇20mg，置100ml量瓶中，加“4.1项下”混合溶剂溶解并稀释至刻度，制成不含主药的辅料空白溶液；另取雷贝拉唑钠对照品10mg，同法制成对照品溶液。

分别取对照品溶液、辅料空白液及溶剂，照“4.3项下”的色谱条件进样10μl，记录色谱图，结果见图7～9。

结果表明：

在雷贝拉唑钠主峰位置，溶剂和辅料不出峰，溶剂和辅料对雷贝拉唑钠的含量测定无影响。

4.5标准曲线的制备精密称取雷贝拉唑钠对照品100.08mg，置100ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液；分别精密量取储备溶液3、4、5、6ml和7ml，置50ml量瓶中，再加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，分别量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度（C）为横坐标，雷贝拉唑峰峰面积（A）为纵坐标，计算回归方程，并绘制标准曲线，结果见表8。

结果表明：

本品供试溶液在60.05～140.11μg/ml浓度范围内，线性良好。

并确定含量检测浓度为：

100μg/ml。

4.6溶液稳定性取注射用雷贝拉唑钠（050304批）粉末30mg，置100ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，配制成每1ml含雷贝拉唑钠100μg的供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12h进行测定，记录峰面积。

见表9。

结果表明：

本品供试溶液常温放置12h稳定。

表9雷贝拉唑钠溶液稳定性

4.7回收率试验取雷贝拉唑钠对照品及处方量辅料，雷贝拉唑钠对照品按本品处方量的80%、100%、120%分别投料，按处方工艺制成注射液50ml。

分别精密量取溶液1ml，置100ml量瓶中，加混合溶剂稀释定溶至刻度，作为供试品溶液。

照含量测定项下的方法，分别测定三批样品的含量，计算回收率。

测定结果见表10。

4.8重复性试验取注射用雷贝拉唑钠（批号：

050304），照“4.6溶液稳定性”的方法配制样品。

同一人、同一天内、同一台检测仪器上，重复测定样品含量，共测定6次，计算含量及RSD，测定结果见表11。

结果表明：

此种方法的含量测定重复性好。

4.9中间精密度试验取注射用雷贝拉唑钠（批号：

050304），照”4.6溶液稳定性”的方法配制样品。

分别由3人于3台不同的高效液相色谱仪上3天测定本品的含量，结果见表12。

表10回收率试验结果表11注射用雷贝拉唑钠重复性测定结果（HPLC）表12中间精密度试验（批号：

050304）结果表明：

本方法测定注射用雷贝拉唑钠中间精密的较好。

4.10三批样品的含量测定精密称取装量差异下三批样品的细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠50mg），置100ml量瓶中，加［乙腈：

水：

三乙胺（30：

70：

0.5）（用磷酸调pH值至10.0）］溶液稀释至刻度,摇匀，再精密移取5ml至25ml量瓶中，用上述混合溶剂定容，摇匀，作为供试品溶液。

精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取雷贝拉唑钠对照品适量，制成100μg/ml的对照品溶液，同法测定。

按外标法以峰面积计算出供试品中雷贝拉唑钠的含量。

结果见表13。

表13注射用雷贝拉唑钠三批样品含量测定结果含量计算公式含量（%）=A样f平均×（W样/W平）×20×100%

根据上述试验结果确定注射用雷贝拉唑钠的含量测定方法同上。

5有关物质

参考含量测定的方法，确定本品有关物质检测的条件。

5.1仪器及试剂同含量测定项下。

5.2色谱条件与系统适用性同含量测定项下。

5.3检测方法取本品细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），精密称定，置50ml量瓶中，加混合溶剂溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1.5ml，置100ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；照高效液相色谱法进行试验，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高约为记录仪满量程的20%～25%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。

5.4专属性试验方法及结果见含量测定项下；结果显示：

溶剂及选用辅料对有关物质检查无干扰。

5.5检测限、定量限精密称取雷贝拉唑钠对照品67.0mg，加混合溶剂100ml使溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，并按1:

100的比例逐级稀释，取每次稀释液10μl进样，记录色谱图，按10倍信噪比计算本品的定量限，约为0.67ng；按3倍信噪比计算本品的检测限，约为0.2ng。

结果见图10、11。

图10雷贝拉唑钠定量限

图11雷贝拉唑钠检测限

5.6破坏性试验

5.6.1酸破坏取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，于水浴加热4h后，冷却，加混合溶剂至刻度，摇匀，制成每1ml中含雷贝拉唑钠0.5mg的供试液；取处方量辅料，混匀后，称取适量，同法酸破坏后，制成不含主药的模拟处方溶液。

取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图12、13。

图12酸破坏样品HPLC图

图13酸破坏辅料HPLC图

5.6.2碱破坏取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置50ml容量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，水浴加热4h后，冷却，加混合溶剂至刻度，摇匀，制成每1ml中含雷贝拉唑钠0.5mg的供试液；取处方量辅料，混匀后，称取适量，同法碱破坏后，制成不含主药的模拟处方溶液，取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图14、15。

图14碱破坏样品HPLC图

图15碱破坏辅料HPLC图

5.6.3氧化破坏取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置50ml容量瓶中，加30%的过氧化氢溶液5ml，水浴加热4h后，冷却，加混合溶剂至刻度，摇匀，制成每1ml中含雷贝拉唑钠0.5mg的供试液；取处方量辅料，混匀后，称适量，同法氧化破坏后，制成不含主药的模拟处方溶液。

取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图16、17。

5.6.4热破坏取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置于小烧杯中，电炉直接加热至浅棕色，用混合溶剂溶解制成每1ml含雷贝拉唑钠0.5mg的溶液；取处方量辅料，混匀后，按上法热处理，称取适量，制成不含主药的模拟处方溶液。

取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图18、19。

图16氧化破坏样品HPLC图

图17氧化破坏辅料HPLC图

图18热破坏样品HPLC图图19热破坏辅料HPLC图

5.6.5光破坏取注射用雷贝拉唑钠（050304批）细粉适量（约相当于雷贝拉唑钠25mg），置于紫外光下直接照射48h，用混合溶剂溶解制成每1ml含雷贝拉唑钠0.5mg的溶液；取处方量辅料，混匀后，按上法光照处理，称取适量，制成不含主药的模拟处方溶液。

取上述样品各10μl，注入液相色谱仪，见图20、21。

图20光破坏样品HPLC图

图21光破坏辅料HPLC图结果显示：

本品溶液在强碱性、光照、酸性、高温及氧化条件下产生破坏，在所选的色谱条件下，主峰与降解产物分离完全。

5.7三批样品的有关物质检验取注射用雷贝拉唑钠三批样品（批号：

050304、050306、050308），参照“5.3项下”方法检验本品的有关物质，结果见表14。

表14三批样品有关物质检查结果计算公式：

有关物质=（总杂质峰面积/1.5%主峰面积）×1.5

结果显示：

三批样品有关物质均在1.5%以内，考虑今后生产因素，参照原料标准，将本品有关物质限定为1.5%，并列入质量标准。

6小结

综上所述，参考《中国药典》2005年版二部附录规定的检测方法［5］及相关的参考文献，根据雷贝拉唑钠原料性质、口服制剂的国家标准及注射剂制剂通则，确定了合适的、较好的注射用雷贝拉唑钠的鉴别、检查方法，并采用高效液相法测定有关物质及含量。

通过验证，该分析方法准确、可靠、方便、快捷，很好地满足了本文研究中的各项分析要求，可以作为检查注射用雷贝拉唑钠质量的检测依据，并列入注射用雷贝拉唑钠的质量标准中。

【参考文献】

1刘宇宏，王世鑫.近年来质子泵抑制剂的研究进展.中国新药杂志，2001，10（3）：

161-164.

2康文力，王金生.新质子泵抑制剂的开发新品种.中国药业，2001，10（9）.

3陈孝治.新一代质子泵抑制剂-雷贝拉唑.世界药品信息,2001,2（6）:

52-53.

4裴晓丽，刘明月.HPLC测定雷贝拉唑钠原料的含量及有关物质.中国药学杂志，2004，39（8）：

631.

5国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部），2005年版.北京：

化学工业出版社，2005，附录.