医疗器械等灭菌效果的检测.docx

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医疗器械等灭菌效果的检测

医疗器械等灭菌效果的检测

一、医院消毒灭菌效果监测：

1.必要性：

①消毒灭菌效果监测方法专业性强，不检验不知道结果；

②新建病房、新消毒设备、新消毒剂均应做效果监测。

③特殊对象、特殊需要，必做效果监测。

如移植术前、ICU病房、危重病人等。

2.科学性：

以科学的试验设计、熟练的技术、可靠的结果、确切地分析，得出结果评价。

3.规范性：

以权威规范为依据，符合其基本原则要求。

如检测时机的确定、标准菌株的选择、标本数、重复次数、实验方法等确立。

二、监测方法的分类：

1、根据检测方法性质分：

①物理方法：

测量压力灭菌温度、测量紫外线强度等；

②化学方法：

各种化学指示卡；

③生物方法：

嗜热/枯草芽孢灭菌效果监测自然菌存活数监测；

2、根据消毒灭菌对象性质分：

①空气消毒：

②表面消毒：

3.根据具体消毒对象分：

①压力蒸汽灭菌：

②各种器械：

③化学消毒剂：

④紫外线灯杀菌效果：

⑤手和皮肤消毒效果：

⑥空气消毒效果：

⑦物体表面消毒效果：

三、必要条件：

1、专业实验室：

2、必备设备器材：

3、选择实验方法：

4、熟练实验技术：

四、卫生部对500张床位以上医院感染管理的质量指标规定：

（1）医院感染率≤10%；灭菌切口感染≤0.5%

（2）医院感染的漏报率≤20%；

调查样本量不少于年监测病人数的10%

（3）医院必须对消毒、灭菌效果定期进行监测。

灭菌合格率必须达到100%

（4）使用中的消毒剂、灭菌剂应进行生物和化学监测。

消毒剂每季度生物监测1次，细菌含量必须<100cfu/ml，不得检出致病微生物；灭菌剂每月检测1次，不得检出微生物。

化学监测应根据消毒、灭菌剂的性能定期监测。

（5）压力蒸气灭菌进行工艺、化学和生物监测。

环氧乙烷必须每锅进行工艺监测，每包进行化学监测，每月进行生物监测。

压力蒸气锅每天第一锅必须做B-D试验。

（6）紫外线灯强度监测：

每季度1次；新灯管30W≥90µW/cm2,旧灯管≥70µW/cm2

（7）胃肠镜等诊疗器材消毒标准不得检出致病微生物；腹腔镜、关节镜等应灭菌处理，不得检出任何微生物。

（8）进入人体组织、血液、器官的医疗用品应灭菌处理，不得检出致病微生物；接触黏膜医疗用品细菌总数≤20cfu/g（或100cm2）；接触皮肤的医疗用品细菌总数≤200cfu/g（或100cm2），不得检出致病微生物。

（9）母婴同室、婴儿室物体表面和医护人员手不得检出沙门氏菌。

（10）医院各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌数标准：

环境类别空气物体表面医护人员手

cfu/cm3cfu/cm2cfu/cm2

Ⅰ类层流洁净手术室、≤10≤5≤5

洁净病房

Ⅱ类普通手术室、产房、≤200≤5≤5

婴儿室、普通隔离病房

Ⅲ类儿科、妇科检查室、≤500≤10≤10

注射、换药、治疗、

急诊、化验、普通病房

Ⅳ类传染病科及病房——≤15≤15

五、为保证医院消毒灭菌可靠，应认真做好医院消毒灭菌效果监测

1、影响消毒灭菌因素很多，使消毒灭菌效果难以保证。

2、消毒灭菌效果生物监测专业性强，条件难创造，结果评价难度大，实验周期长。

3、化学测试试剂法较复杂，结果准确；试纸法简便易行，但精确度较差。

六、压力蒸汽灭菌效果的监测：

（一）BD试纸：

检查灭菌器工艺状态，并不能反应灭菌器使用中被灭菌物品的实际灭菌效果。

发现阳性应进行灭菌器性能检查调试。

（二）指示胶带：

表示是否经过灭菌处理，并不能反应被灭菌物品实际灭菌效果。

（三）化学指示卡：

检测每包被灭菌物品的灭菌效果。

建议最好每包被灭菌物品中心放一片化学指示卡,待灭菌处理后,视其变色程度（灭菌效果）决定是否使用。

（四）用生物指示剂作系统监测：

采用生物灭菌指示剂来检查压力蒸汽灭菌效果是最科学、最可靠的监测方法。

由中国预防医学科学院流行病微生物研究所，北京鑫四环消毒技术开发中心联合产销的嗜热脂肪杆菌芽孢（SS1，K31）是国际公认的标准菌株。

现制成标准菌片，供检查压力蒸汽灭菌效果检测。

w菌株特点：

1、该菌为需氧芽孢杆菌，细菌繁殖体G兰氏染色阴性呈紫色，细菌芽胞孔雀绿着色。

其细菌繁殖体对培养基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨琼脂上生长良好，表面粗糙呈米黄色。

2、最适生长繁殖温度为56–65℃，培养24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。

3、本生物指示剂载体为高级滤纸片，染菌量为5×105–106cfu/片，封装在小纸袋内，热死亡时间为121℃，3.9min阳性，19min阴性；D10值1.3–1.9min，符合美国药典第十一版规定标准。

该菌无毒，热抗稳定，在冰箱内4℃下保存一年抗力无明显下降，在常温（20℃左右）可保存1个月。

w使用方法：

1、该芽孢菌片使用时将装有菌片的小纸袋放在被灭菌的物品中心部位（每锅放置菌片数按卫生部规定）。

2、灭菌后，再无菌操作下取出小纸袋中的菌片，投放到溴甲酚紫培养液管中。

同时将未经灭菌的菌片投入另一管培养基中作对照。

3、56℃–60℃培养，48h观察结果，对照管为米黄色；若灭菌后菌片培养液颜色不变仍为淡紫色，为阴性（–），表示灭菌彻底；如变黄为阳性（+），表示灭菌不彻底。

w培养基成分和配制方法：

1、成分：

胰蛋白胨10g、葡萄糖5g、蒸馏水1000ml、1.6%溴甲酚紫酒精溶液指示剂1ml。

2、配制方法：

（1）1.6g溴甲酚紫溶于98.4ml的96%酒精溶液中摇匀；

（2）把前三种成分溶解后，调解pH7.0-7.2，加入指示剂摇匀；

（3）每管分装5ml，以121℃20min灭菌后，放4℃冰箱内保存，备用。

w注意事项：

1、防止指示剂中酒精挥发而使溴甲酚紫含量过高（溴甲酚紫含量过高后可抑菌生长）；

2、菌片灭菌后应及时取出培养；

3、禁止菌片接触任何消毒剂及放射源以免影响抗力。

七、化学消毒剂消毒效果监测：

（一）消毒剂有效含量的测试：

1、主要是有效含量不稳定的消毒剂，如过氧乙酸、含氯消毒剂等应进行含量测试。

2、化学试剂滴定法较复杂但结果精确；试纸法方便快速，但准确性差。

专用测氯试纸——比较准确；复合测试试纸（可同测过氧乙酸、含氯消毒剂）——准确性较差。

戊二醛试纸；含碘、臭氧等试纸尚待研究。

（二）化学消毒剂使用溶液污染菌数的检测

1、选好用好中和剂：

2、做到：

对应，浓度、比例合适

3、中和剂选择原则：

①本身对菌无影响

②确能去除杀菌因子

③生成物对菌无影响

④对照完全

★试验分组：

①菌液+药液培养

②（药+菌液）+中和剂培养

③中和剂+菌液培养

④（药+中和剂）+菌液培养

⑤PBS+菌液培养

⑥PBS培养

⑦中和剂培养

⑧培养基培养

1）方法：

第一步：

用容量为1ml的灭菌吸管，吸取1ml消毒溶液。

第二步：

将吸取的1ml样液加入到9ml的稀释液中，这个稀释液的配制成分取决于消毒剂溶液的成分，即在生理盐水溶液中加入合适的中和剂。

浸泡器械用消毒液缸稀释管营养琼脂平皿

图1Kelsey和Maurer提出消毒剂溶液在使用过程中的试验

第三步：

将上述消毒稀释液试管送到实验室，从采样到试验时间不要超过1h，随后用一支50滴/ml量的滴管（出可用有0.02ml刻度的血清吸管），吸取混合液，在每一个营养琼脂平板表面上（培养基平板表面上已无水分），滴10滴（每滴量为0.02ml），同样滴二个平板。

第四步：

将二个平板分别孵育于二种不同温度的孵箱内；一个放在37℃孵箱内1～2天；另一个平板孵育于20℃左右的室温下3～7天，随后计算二个平板上的菌落数，除以2，即得出每个平板上的平均菌落数。

2）试验结果：

平板培养后有细菌菌落存在，表示消毒溶液中有细菌存在。

若一个板上长1～2个菌落，可以忽略，因为消毒剂溶液毕竟是一种化学消毒剂，而不是灭菌剂，因此培养出极少量活菌是属正常。

若一个平板上生长5个或5个以上的菌落，则应注意这消毒剂溶液已被污染。

从平板上检出菌落数，可以计算出每毫升消毒溶液中存在的细菌数，其计算方法如下：

◆由于消毒样液是按1：

10稀释，用50滴/ml的滴管滴10滴。

如果10滴的消毒剂/稀释液混合液生长了5个菌落，可计算出1ml消毒溶液中存在250个活菌。

换句话说，在一个板上滴上10滴，它是1ml的1/5，因此计算如下：

5（一个平板上长菌落总数）×10（用消毒液稀释10倍）×5（在平板滴10滴，只占消毒剂/稀释液混合液的1/5）=250个菌。

5×10×1=100个菌，即每毫升消毒液中存在的细菌数。

若一个平板上长20个菌落，则每毫升消毒液中有5×10×5=250个细菌，这样多的细菌，说明此消毒剂溶液已经失效，不能再使用。

平板上细菌的污染情况

每滴上各有少数菌落表示不能继续使用

每滴上存在许多菌落表示严重污染

3）消毒剂溶液中长菌的原因:

消毒剂溶液中长菌，常见有下列几种原因：

①容器没有洗净，未经加热消毒处理。

②配制消毒剂溶液时，消毒剂和水量不准确，使消毒浓度过低不能杀死细菌或抑制细菌。

③消毒剂溶液贮存过久，已经失效。

④由于过多的有机物质在消毒剂溶液中，消耗消毒剂而使消毒剂失效。

⑤在消毒剂溶液中存在着各种抑制消毒剂物质。

八、医疗器械灭菌效果的检测：

采样时间；在灭菌处理后，存放有效期内采样。

（一）常规监测

1、检测方法：

缝合针、针头、手术刀片等件医疗器械各5件，分别投入5ml的无菌洗脱液中。

注射器则取5副在5ml无菌肉汤中分别抽吸5次。

手术钳、镊子等大的医疗器械取2件，用棉拭子反复涂擦采样，将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中。

振打80次,吸取1ml接种平皿做活菌计数，37℃培养48h，计算菌落数。

2、结果判定：

平板上无菌生长为灭菌合格。

3、注意事项：

若消毒因子为化学消毒剂时，采样液中应加入相应的中和剂。

（二）无菌检验

1、无菌检验前准备

（1）洗脱液与培养基无菌检验：

无菌试验前3天，于需-厌氧培养基中各接种1ml洗脱液，分别至30~35℃与20~25℃培养72h，应无菌生长。

（2）阳性对照管菌液制备：

试验前一天取金黄色葡萄球菌（CMCC26003）新鲜培养物，接种1环至需-厌氧培养基内，在30~35℃培养16~18h，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释10cfu/ml备用。

取生孢梭菌（CMCC6494）的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物1环接种于相同培养基内，30~35℃培养16~18h，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释10cfu/ml备用。

取白色念珠菌（CMCC98001）真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1环，接种于相同培养基内，20~25℃培养24h，用0.9％无菌氯化钠溶液稀释10cfu/ml~10cfu/ml备用。

2、无菌操作：

（1）取缝合针、针头、刀片等小件医疗器械5件直接侵入6管需--厌氧培养管（其中1管作阳性对照）与4管霉菌培养管。

培养基用量为15ml/管。

（2）取5副注射器，在5ml洗脱液中反复抽吸5次，接种需-厌氧培养管（6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养管（共4管）。

接种量：

1ml注射器为0.5ml，2ml注射器为1ml，5~10ml注射器为2ml，20~50ml注射器为5ml，培养基用量为2ml以下为15ml/管，接种量5ml为40ml/管。

（3）手术钳、镊子等大件医疗器械取2件用棉拭子涂擦采样，投入5ml无菌洗脱液中，接种于需-厌氧培养管（6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养管（共4管）。

接种量为1ml/管，培养基用量为15ml/管。

3、培养：

将需-厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均于30～35℃培养5天。

霉菌培养管与阴性对照管于20～25℃培养7天。

4、结果判定：

阳性对照在24h内应有菌生长，阴性对照无菌生长，需-厌氧培养管及霉菌培养管无菌生长，可判为灭菌合格。

★如需-厌氧培养管及霉菌培养管中任何1管显混浊并证明有菌生长，应重新取样，分别复测2次，如各管无菌生长仍可判为灭菌合格。

5、注意事项：

（1）在洁净度100级区域中进行，严格无菌操作。

（2）采样后送检时间不得超过6h，样品保存于4℃，则不超过24h。

（3）如消毒因子为消毒剂，采样液中应加入中和剂。

（4）采样面积，100cm2。

（5）设好阳性、阴性对照。

九、手和皮肤消毒效果检测：

1、采样时间，在消毒后立即采样。

2、采样方法

（1）手，手曲面手指跟到手指端（一只手约30cm2），采样液10ml。

（2）皮肤，5cm×5cm。

采样液10ml。

3、检验方法

取1ml采样液做活菌计数，37℃培养48h。

4、采样结果计算：

平板上菌落数X稀释倍数

细菌总数（cfu/cm2）=---------------------------------

采样面积（cm2）

5、结果判定：

（1）I、II类区域工作人员，细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域工作人员，细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域工作人员，细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

●母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员，不得检出沙门氏菌及其他致病菌。

6、注意事项：

（1）采样器材应无菌。

（2）采样液中应含相应的中和剂。

（3）阳性对照的设定问题。

（4）消毒时间要求，外科手消毒3分钟、卫生手消毒1分钟，皮肤消毒5分钟。

十、物体表面消毒效果监测

1、采样时间：

消毒处理后采样。

2、采样方法

用5cm×5cm灭菌规格板，采样面积≥100cm2。

门把手等不规则表面直接用棉拭子采样。

3、采样液10ml（含中和剂）。

4、检验方法：

同上

5、结果判定：

（1）I、II类区域，细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤15cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面，不得检出沙门氏菌。

十一、空气消毒效果监测

1、采样时间：

消毒后、操作前进行采样。

2、采样方法：

（1）布点：

室内面积≤30m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积>30m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。

（2）平板暴露法

平板直径9cm、采样高度1.5m，暴露5min。

3、检验方法

平板37℃培养48h。

计数菌落数并分离致病菌。

4、平板暴露法结果计算

50000N

细菌总数（cfu/m3）=--------------------

A×T

A为平板面积（cm2）；T为暴露时间（min）；N为平均菌落数（cfu）

5、结果判定

（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。

（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

6、注意事项：

采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min进行采样。

十二、紫外线灯管强度的检测：

1、紫外线是不可见光，紫光≠杀菌。

2、紫外线直射、折射。

3、紫外线穿透力弱。

4、杀菌紫外线为C波段，中心波长2537AO

5、紫外线杀菌剂量：

强度X时间

6、检测紫外线灯管强度的方法：

紫外线强度仪；紫外线强度指示卡

7、紫外线灯管的质量：

玻璃无气泡、气线；启动快；不闪动；寿命长；照射强度标准：

30W灯管新灯≥90µW/cm2；旧灯≥70µW/cm2

8、紫外线强度测试距灯光垂直100cm照射直接读强度值。

注意：

①作好防护：

戴眼镜、手套，必要时戴防护面罩。

②紫外灯管开启后稳定5分钟后，读测试数值。

③紫外线强度变化与灯管质量电压，反光罩光洁度等有关。

十三、几点信息和看法：

1、对消毒技术和方法的评价问题：

1）含氯消毒剂的更替；

2）戊二醛和邻苯二甲醛；

3）动态消毒机的效果评价；

4）臭氧消毒的优缺点（氧化作用突出）；

5）空气和表面消毒相结合；

◆消毒是积极的治疗，对任何人都是必不可少的！

◆健康的生命才是最宝贵的！

◆为了保护健康和生命，让我们共同为发展消毒事业而努力！

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