双波长高效液相色谱法测定复方芦丁片中维生素C和芦丁含量.docx
《双波长高效液相色谱法测定复方芦丁片中维生素C和芦丁含量.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《双波长高效液相色谱法测定复方芦丁片中维生素C和芦丁含量.docx（9页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
双波长高效液相色谱法测定复方芦丁片中维生素C和芦丁含量
双波长高效液相色谱法测定复方芦丁片中维生素C和芦丁的含量
?
30?
安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2012Jan;16
（1）
双波长高效液相色谱法测定复方芦丁片中
维生素C和芦丁的含量
孙银华
（安徽省马鞍山市药品检验所,安徽马鞍山243000）
摘要:
目的建立复方芦丁片中维生素C和芦丁含量的测定方法.方法采用高效液相色谱法,甲醇.05mol?
L磷酸二氢
钾缓冲液[磷酸调节pH=（3.0±0.1）]（45:
55）为流动相;流速1.0ml?
min～;检测波长为254nm和355nm双波长测定.结
果维生素C在19.392～242.400mg?
L范围内呈良好的线性关系,r=1.0000,平均回收率为99.14%,RSD:
0.69%（n=
5）;芦丁在9.3613—117.0165mg?
L范围内呈良好的线性关系,r=0.9996,平均回收率为98.63%,RSD=1.19%（n=5）.
结论该方法简便,准确,重复性好,能同时测定复方芦丁片中维生素C和芦丁的含量.
关键词:
高效液相色谱法;复方芦丁片;含量测定;芦丁;维生素C
DeterminationofvitaminCandrutinincompoundrutin
tabletsbyHPLCwithdual-wavelength
SUNYinhua
（MaanshanInstituteofDrugControl,Maanshan243000,China）
Abstract:
0bjectiveToestablishamethodforthedeterminationofvitaminCandrutinincompoundrutintablets.MethodsThesep—
arationwasperformedonHPLC.Themobilephasewasmethanol—potassiumdihydrogenphosphatesolution（0.05mol?
L）（adjusted
pHto3.0±0.1withphosphoricacid）（45:
55）ataflowrateof1.0ml?
min～.Thedetectionwavelengthwasat254nmand355nm.
ResultsThelinearofvitaminCwasintherangeof19.392—242.400mg?
L（r=1.0000）.Theaveragerecoverywas99.14%
andRSDwas0.69%（n=5）.Thelinearofrutinwasintherangeof9.3613～117.0165mg?
L（r=0.9996）.Theaveragereeov—
crywas98.63%andRSDwas1.19%（n=5）.ConclusionThemethodisconvenient,rapid,accurateandreproducible.Itcanbe
suitableforthesimultaneousdeterminationofvitaminCandrutinincompoundrutintablets.
Keywords:
HPLC;compoundrutintablets;determination;rutin;vitaminC
2.7.2异喹啉物回收率试验取异喹啉物对照品贮备液,分
别精密取0.16,0.2,0.24ml,置20ml量瓶中,分3组（高,中,
低）,共9份,每份按处方比例加入辅料及格列喹酮,再加入流
动相适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,得续滤液,按上述
色谱条件测定.结果平均回收率为1130.3%,RSD=0.38%（n
=
9）.结果见表2.
2.8有关物质测定按2.2.2制备供试品溶液;精密量取1
ml,置100ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为对照溶液;
另取异喹啉物对照品,用流动相溶解制成每1ml中含10g
的溶液,作为异喹啉物对照品溶液.取供试品溶液,对照溶液
与对照品溶液各20l,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至
格列喹酮峰保留时间的2倍,未知杂质采用自身对照法,异喹
啉物采用外标法测定.测定三批样品,结果见表3.
表3样品有关物质测定结果及比较
结果表明异喹啉物两种方法测定结果相差不大,总杂质
相差较大,异喹啉物测定用外标法测定,在230nm和310nm
对照品和样品同时测定,只要灵敏度符合要求均能测出.通
过专属性试验可知未知杂质在310nm波长处吸收很小,有的
检测不出.在230ntn波长处测定能较好的反应样品的有关物质.
3讨论
有关物质测定波长的选择应是主要杂质的最大吸收,而
不是主药的最大吸收,通过降解试验考察降解杂质有6个,每
个杂质的最大吸收不同,但各杂质及格列喹酮的最大吸收均
在215～230nm之间,并且比310nm大很多;同时考察了220
rim,测定杂质结果与230nm相当,但波长小,噪声增加,所以
确定测定波长为230nm.
参考文献:
[1]陈震.有关物质的研究与申报[J].药品技术审评论坛,2010
（3）:
39—45.
[2]谢沐风,罗霞萍,陈亚美.如何建立HPLC法测定有关物质的方
法[J].中国药品标准,2002,3（6）:
6—8.
[3]牛海军,邵旭,查贝贝.RP—HPLC法测定牡荆素原料中的有
关物质[J].安徽医药,2011,15
（1）:
34—5.
【4]李玮,陈柏林.氟罗沙星注射液中高分子杂质测定[J].安徽
医药,2011,15
（1）:
38—9.
[5]张射兵,刘实,卢洲,等.RP.HPLC法测定三氟柳原料的有
关物质fJ].安徽医药,2010,14（8）:
897—9.
（收稿日期:
2011—08一O1）
安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2012Jan;16
（1）?
31.
复方芦丁片含有芦丁和维生素C两种成分,主要用于治
疗脆性增加的毛细血管出血症,也用于高血压脑病,脑出血,
视网膜出血,出血性紫癜,急性出血性肾炎,再发性鼻出血,创
伤性肺出血,产后出血等的辅助治疗.原标准是卫生部药品
标准化学药品及制剂第一册,其维生素C含量测定是碘液滴
定法,大量实验数据表明…,用碘滴定法测定维生素C含量
波动较大,人为影响因素较多,如颜色的判断,操作速度的快
慢等;其芦丁含量测定采用的是uV法.
近年采用HPLC测定芦丁含量的报道较多”,然同时
测定复方芦丁片中芦丁和维生素C的含量未见报道,笔者采
用高效液相色谱同时测定复方芦丁片中维生素C和芦丁的
含量,此法简便,准确,现报道如下.
1仪器与试药
1.1仪器Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公
司）,Waters2998PhotodiodeArrayDetecer二极管阵列检测器
（美国Waters公司）,Empower色谱工作站（美国Waters公
司）;SunfireC】8（5txm,4.6mmx150mm）色谱柱（美国Wa—
ters公司）;JK一120超声清洗器（上海金棋实业公司超声电子
工程部）;BP211D电子天平（德国Sartorius公司）.
1.2试药维生素C对照品（中国药品生物制品检定所,批
号:
100425—200702,标示含量为100.0%）;芦丁对照品（中国
药品生物制品检定所,批号:
100080-200707,供HPLC法测
定）;甲醇为色谱纯,余试剂为分析纯（国药集团化学试剂有
限公司）;复方芦丁片（上海朝晖药业有限公司,批号090902;
江苏方强制药有限责任公司,批号20090424;江苏亚邦爱普
森药业有限公司,批号1003005）.
2实验方法与结果
2.1色谱条件与系统适应性色谱柱:
SunfireC（5txm,
4.6mmx150mm）;流动相:
甲醇_o.05mol?
L磷酸二氢钾
缓冲液[磷酸调节pH=（3.0±0.1）]（45:
55）;流速1.0ml?
min～;柱温:
30oC;进样量为20l,检测波长为254am和355
nm双波长测定;理论板数按维生素C峰计算不低于2500;按
芦丁峰计算不低于3500,维生素C与芦丁分离度大于15.
2.2对照品溶液的制备精密称取维生素C对照品12.12
mg置25m1量瓶中,加水10ml超声使其溶解并用水稀释至
刻度,摇匀,作为贮备液①;精密称取芦丁对照品12.93mg置
50ml量瓶中,加甲醇2Oml超声使溶解并用甲醇稀释至刻
度,摇匀,作为和贮备液②.精密量取贮备液①和贮备液②各
5ml置50ml量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,作为混
合对照品溶液.
2.3供试品溶液的制备取复方芦丁片20片,精密称重,研
细,精密称取相当于1片的重量,置100ml量瓶中,加50%甲
醇60ml,超声使溶解,并用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤
过,精密量取续滤液5ml置50ml量瓶中,并用50%甲醇稀
释至刻度,摇匀,用0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液作为供
试品溶液.
2.4线性关系考察精密量取对照品贮备液①和贮备液②
各1,2,3ml,分别置25m1量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,
摇匀;再精密量取对照品贮备液①和贮备液②各3ml置10
ml量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀;再精密量取对照品
贮备液①和贮备液②各3ml,混匀.维生素C浓度分别为:
19.392,38.784,58.176,145.440和242.400mg?
L～:
芦丁浓
AU
0.40
0.30
0.20
O.10
O.O0
0.002.004.O06.00/rain
A对照品（254nm）
AU
0.060
0.040
0.020
0.000
B对照品（355nm）
0.002.004.O06.00/rain
C供试品（254nm）
AU
0.040
0.030
0.020
0.O1O
0.000
0.002.O04.O06.O0/min
D供试品（355nm）
AU
0.060
0.040
0.020
0.000
E空白
图1双波长法测定复方芦丁片含量的HPLC色谱图
度分别为:
9.3613,18.7226,28.0840,70.2099和117.0165
mg?
L～.按”2.1”项下色谱条件精密量取上述溶液各20
l,注入液相色谱仪,在254nm波长处记录维生素C色谱图,
在355nm波长处记录芦丁色谱图.维生素C峰面积分别为:
994426,2006917,3014770,7479992和12505558;芦丁峰
面积分别为:
309198,614460,902562,2262303和3881
525.以浓度为横坐标（）,各色谱峰面积为纵坐标（y）,进行
线性回归,得回归方程.维生素C标准曲线方程为:
Y=51
547X+2420.5,相关系数r=1.0000,线性范围为19.392～
242.400mg?
L～;芦丁标准曲线方程为:
Y=33097X一17
130,相关系数r=0.9996,线性范围为9.3613～117.0165
mg?
L～.
2.5精密度试验取混合对照品溶液,在上述色谱条件下,
连续进样5次,以各组分峰面积分别计算,结果维生素C峰面
积分别为:
2070405,2066239,2069153,2076801和2086
710,RSD为0.40%;芦丁峰面积分别为:
753841,751785,753
808,756298和759580,RSD为0.40%.表明本方法精密度
?
32?
安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2012Jan;16
（1）
良好.
2.6重复性试验取同一批号的样品5份,按供试品溶液制
备项制备及上述色谱条件测定,结果维生素c标示量含量分
别为99.25%,101.11%,100.73%,100.46%,100.73%平均
值为100.46%,RSD=0.71%（n=5）;芦丁标示量含量分别
为98.84%,100.46%,101.55%,99.80%,100.96%平均含量
为的100.32%,RSD=1.05%（n=5）,表明本法测定样品重
复性良好.
测定,记录峰面积,维生素C峰面积分别为:
2070450,2056
822,2045890,2017659和1996745;芦丁峰面积分别为:
753841,753546,756790,746981和745932.其峰面积RSD
分别为1.47%和0.63%,结果表明供试品溶液在10h内稳
定.
2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品（批号:
090902）5份,分别精密加入同一对照品溶液,按供试品溶液
的制备方法及上述色谱条件测定.计算回收率,结果见表1.
2.7稳定?
I生试验取混合对照品溶液,分别于1…248,10h实验表明,本法准确性较好.
表1加样回收率试验（=5）
2.9样品含量测定取3批样品分别按上述方法制备及色
谱条件测定,以标准曲线方程计算含量,其中芦丁的含量以峰
面积计算的无水芦丁的含量与1.089相乘所得的结果,并与现
行标准测的维生素C含量和芦丁含量进行比较,结果见表2.
表2复方芦丁片含量测定结果（标示量的百分含量%）
3讨论
3.1流动相的选择参阅相关资料J,试验中选择甲醇一
0.1%冰醋酸（10:
90）为流动相,结果维生素C峰前面有一个
小峰,分离度达到要求,但提取PDA光谱图该峰与维生素C
光谱图一致;选择甲醇一水（50:
50）的0.0025mol?
L樟脑磺
酸溶液为流动相,结果维生素C峰与芦丁峰中间有一个倒置
峰,影响维生素C峰的积分以及和芦丁峰的分离度;选择甲
醇.05mol?
L磷酸二氢钾缓冲液并调节比例为（45:
55）
维生素C和芦丁分离效果好,保留时间,对称因子,塔板数均
符合要求.
3.2检测波长的选择采用PDA检测器,采集210—400nm
3D图谱,提取维生素C色谱峰处的光谱图,表明其在245am
波长处有最大吸收,提取芦丁色谱峰处的光谱图,表明其在
255nm和355am波长处有最大吸收.参阅相关资料J,维
生素C的测定多选择254am波长作为检测波长,但试验发现
此波长处维生素C和芦丁的响应值相差较大,在同一色谱图
中无法同时很好地显示维生素C和芦丁峰形,而在355nm波
长处维生素C基本无吸收,故在254nm和355am波长处双
波长同时测定,记录峰面积,比较峰面积大小,确定254nm为
维生素C检测波长,355nm为芦丁检测波长.
3.3溶剂的选择芦丁水溶性较差,可溶于甲醇,乙醇,原标
准采用60%乙醇作为溶剂,维生素C在水中易溶,在乙醇
中略溶,结合流动相综合考虑,在配置对照品贮备液时分别用
甲醇和水作为芦丁和维生素c的溶剂,在配置混合对照品时
采用50%甲醇作为溶剂,样品采用50%甲醇提取并超声10
min即可将芦丁与维生素C溶解.
参考文献:
[1]陈再洁,郑建明,王智.高效液相色谱法测定维生素c片中
Vc含量[J].分析仪器,2008,l（6）:
37—9.
[2]马君义,张串霞,赵保堂.RP.HPLC法测定不同厂家芦丁片和复
方芦丁片中芦丁的含量[J].西北师范大学,2010,46（5）:
74—7.
[3]宋玉英,付鑫.HPLC法测定芦丁片的含量和有关物质[J].中
国药师,2010,13（8）:
1216—7.
[4]李华英.高效液相法测定芦丁片的含量[J].海峡药学,2007,19
（6）:
60—1.
[5]田磊.HPLC法同时测定复方银翘氨敏胶囊中维生素c及对
乙酰氨基酚的含量[J].安徽医药,2010,14（9）:
1026—7.
[6]代龙.HPLfi同时测定珍菊降压片中氢氯噻嗪与芦丁的含量
[J].安徽医药,2009,13（5）:
510—1.
[7]徐岳鑫,董赛文,张雪峰.高效液相法测定维c银翘片中维生素
c的含量[J].中国药业,2008,17（10）:
40.
[8]薛继雄,刘金来.反相高效液相法测定复方维生素泡腾片中维
生素C的含量[J].医药导报,2007,26（6）:
670—1.
[9]国家药典委员会.卫生部药品标准化学药品及制剂第l册[s].
北京:
中国医药科技出版社,1989:
88.
（收稿日期:
2011—05—15）
升级会员 