动物细胞的基本形态观察和显微测量.docx
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动物细胞的基本形态观察和显微测量
动物细胞的基本形态观察和显微测量
教学目标及其基本要求：
介绍实验室的规则，掌握显微镜的使用方法，学习制备不同细胞的临时制片，观察了解细胞的基本形态。
学会使用测微尺，通过显微测量对红细胞的进化进行分析。
教学内容提要及时间分配
1.实验室规则：
第一次上实验课，介绍实验室纪律、要求及清扫工作。
10分钟
2.显微镜的使用方法：
包括显微镜的拿取、使用等。
20分钟
3.细胞的基本形态观察。
2小时
1）原理
2）观察方法与结果：
a）制备观察蟾蜍脊髓前角运动神经细胞
b）蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察
c）蟾蜍肝脏压片的制备与观察
d）蟾蜍血涂片及人血涂片的制备与观察
e）人口腔上皮细胞观察
4.测微尺的使用。
30分钟
教学重点及难点
教学重点
1.使学生了解如何利用显微镜观察细胞
2.掌握几种制片方法：
压片和涂片。
3.了解细胞的染色方法
4.显微测微尺的使用
教学难点
1.蟾蜍的处死及取材
2.血涂片的制备
3.侧微尺的使用
教学方法
注意理论和实际相结合，将实验课内容与理论课内容密切联系，调动学生的积极性，要求每个学生都亲自动手，分组操作。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
细胞形态观察照片、，板书等。
使用的教材及参考资料
a）《医学细胞生物学实验》第四版中国医科大学细胞生物学实验室
b）《细胞生物学》凌冶萍人民卫生出版社
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
1．首次实验课，介绍实验课的重要性，培养学生实验兴趣，注重培养学生对基本实验器械的运用技能，尤其对显微镜的使用和注意事项要向学生详细介绍，
思考题
1．物细胞的形态结构与其功能有哪些联系？
2.通过观察人、蟾蜍血涂片，我们知道了在人类进化过程中，人的红细胞发生了哪些变化？
液泡系和线粒体的活体染色
教学目标及其基本要求：
1.掌握活体染色方法、应用及使用的活体染色剂
2.掌握空气栓塞法处死兔子的方法
3.了解光学显微镜和电子显微镜下线粒体及液泡系的基本形态结构
教学内容提要及时间分配
1.讲述活体染色的概念、原理（15分钟）
2.具体实验操作及注意事项（15分钟）
3.实验操作（3小时）
4.总结讨论（30分钟）
教学重点及难点
教学重点
1．线粒体染体时，一定注意染色液不要没过肝组织，保持氧化状态。
2．观察液泡系时，注意显微镜的不同层次。
教学难点
1．用空气栓塞法处死兔子时，注意牢固固定兔子及正确选择耳缘静脉。
教学方法
1．示教法
2．提问、讨论
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书
使用的教材及参考资料
a）医学细胞生物学实验（第四版）
b）细胞生物学（主编：
凌治萍，七年制教材）
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
用空气栓塞法处死兔子时，要牢固固定兔子直至彻底死亡，避免兔子挣扎使学生受伤，
思考题
1．述光镜下肝细胞活体染色的线粒体的形态结构？
2．试描述光镜下软骨细胞液泡系的形态结构？
细胞中的微丝染色及微丝与细胞形态的实验观察
教学目标及其基本要求：
1、教学重点：
（1）掌握微丝的染色方法。
（2）了解光镜和电镜下的微丝基本形态和结构。
2、基本要求：
（1）掌握微丝的染色方法。
（2）了解光镜和电镜下的微丝基本形态和结构。
（3）了解细胞松弛素B对微丝的作用及原理。
（4）了解考马斯亮蓝染料在细胞生物技术中的应用。
教学内容提要及时间分配
1.教师：
（1）讲述和提问微丝的作用及组装，细胞松弛素B的作用（15分钟）。
（2）讲解实验的具体操作和注意事项，正常对照在实验中的作用及Triton，M-缓冲液，戊二醛的作用（15分钟）。
2.学生实验：
3小时
教学重点及难点
教学重点
教学重点：
1.恢复时间要足够，否则细胞不会恢复到未处理前的情况。
2.洗片时注意要轻些，不要反复冲洗，以免把细胞从载片上洗去。
教学难点
1.细胞盖片注意正反面。
2.染色后冲洗背面。
教学方法
讲解、提问、讨论。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书、图谱。
使用的教材及参考资料
a）《医学细胞生物学实验》第四版
b）《细胞生物学》七年制教材”
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
注意盖玻片的保湿，防止细胞干涸。
思考题
1．细胞骨架的组成有哪些？
2.绘出三种不同情况下细胞中微丝的分布
细胞生理活动的观察
教学目标及其基本要求：
1.通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。
2.熟悉小鼠腹腔注射和颈椎脱位处死方法。
3.进一步掌握临时装片技术和显微镜的使用方法。
教学内容提要及时间分配
内容提要：
1.小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察；
2.暗视野显微镜观察细胞的纤毛和鞭毛运动。
时间分配：
1.讲解细胞吞噬运动的基本原理和鞭毛、纤毛
运动的基本机制。
（30分钟）
2.同学亲手做实验，期间讲解或提问实验操作
步骤和各自作用。
（150分钟）
3.总结实验结果。
（30分钟）
教学重点及难点
教学重点
1.小鼠巨噬细胞的吞噬实验中，细胞内台盼兰的着色原因和实验前6%淀粉肉汤的成分及其作用。
2.鞭毛和纤毛运动有何异同。
3.在观察纤毛运动时，蜡屑加入量和取放位置及上额粘膜的取放方向。
教学难点
1．小鼠腹腔注射
教学方法
通过先讲解和提问方式掌握基本原理，具体结合实验得以消化、吸收。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书
使用的教材及参考资料
a）医学细胞生物学实验（第四版）
b）细胞生物学（主编：
凌治萍，七年制教材）
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
强调台盼兰在细胞活细胞计数中的染色原理与本实验中的的染色原理的区别，避免学生理解混淆。
思考题
1.小鼠巨噬细胞吞噬实验中，如何解释细胞内台盼兰的着色？
2.鞭毛和纤毛有何异同？
细胞组分的化学反应
教学目标及其基本要求：
1.了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理。
2.掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学反应染色方法。
教学内容提要及时间分配
1.教师：
讲解实验原理及操作技术（30分钟）。
2.学生实验：
（1）Brachet反应-显示细胞内的DNA和RNA（1小时40分钟）。
（2）细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示（1小时）。
（3）细胞内过氧化物酶的显示（20分钟）。
教学重点及难点
教学重点
1.了解细胞内DNA、RNA、碱性蛋白和酸性蛋白的显示方法。
2.过氧化物酶催化联苯胺反应的原理。
教学难点
1.DNA、RNA及碱性蛋白和酸性蛋白在细胞内的分布。
2.过氧化物酶的显示方法和实验原理。
教学方法
讲解、示教、讨论。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书、图谱。
使用的教材及参考资料
a）《医学细胞生物学实验》第四版
b）《细胞生物学》凌诒萍主编人民卫生出版社
c）《医学细胞化学与分子生物学技术》杨景山主编北医协和联合出版社
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
吸取小鼠股骨骨髓时，要事先吸取少量生理盐水或PBS润湿注射器；介绍复染的概念和作用。
思考题
1.用彩色笔绘出Brachet反应及PAS反应的镜下所见。
2.说明着色的碱性蛋白可能是什么物质?
细胞核与线粒体的分级分离
教学目标及其基本要求：
通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分，以了解其原理及过程。
教学内容提要及时间分配
一.原理
匀浆（Homogenization）和分级分离（Fractionation）的概念30分钟
二.细胞核的分离提取30分钟
1.颈椎脱位法处死小白鼠，迅速剖开腹部取肝。
2.匀浆。
3.2500rpm离心，涂片。
三.高速离心分离提取线粒体60分钟
17000rpm离心，涂片。
四.结果观察60分钟
教学重点及难点
教学重点
1．匀浆、分级分离、复习细胞核与线粒体的染色。
教学难点
2.匀浆及离心的正确操作。
教学方法
讲解、示教、讨论。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书、细胞核与线粒体的光镜照片。
使用的教材及参考资料
a）《医学细胞生物学实验》第四版
b）《细胞生物学》凌诒萍主编人民卫生出版社
c）《医学细胞化学与分子生物学技术》杨景山主编北医协和联合出版社
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
强调离心管的平衡的重要性和必要性。
思考题
1．简要说明分级分离细胞的原理及意义。
2．比较一下分离细胞核时涂片①、②、③有什么不同?
涂片③在你的实验结果中纯度如何？
3．描述一下涂片⑤所见结果。
细胞融合与培养细胞的形态观察和计数
教学目标及其基本要求：
1、教学重点：
（1）掌握细胞融合的原理和方法。
（2）了解培养的细胞形态和生长状态。
（3）掌握培养细胞的计数和活细胞鉴定方法。
2、基本要求：
（1）掌握细胞融合原理，应用PEG融合细胞的方法和细胞融合率的计算。
（2）了解培养细胞中的细胞形态和生长状态，掌握细胞计数的方法。
教学内容提要及时间分配
1、教师：
讲解实验原理及操作技术（30分钟）
2、学生实验：
（1）细胞融合（1.5小时）。
（2）培养细胞的形态观察（40分钟）。
（3）培养细胞的计数及活细胞鉴定（30分钟）。
教学重点及难点
教学重点
1.细胞融合时PEG的使用方法技巧。
2.细胞融合过程全部要求在37度水浴中进行。
3.计数板的准确使用方法和活细胞鉴定方法。
教学难点
1.细胞融合的操作和观察。
2.计数板的使用和计数。
教学方法
讲解、示教、讨论。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书、图谱。
使用的教材及参考资料
a）《医学细胞生物学实验》第四版
b）《细胞生物学》人民卫生出版社
c）《医学细胞化学细胞生物技术》
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
注意在水浴的环境中使PEG和细胞悬液混合，避免PEG凝固是实验成功的关键，要求学生对实验步骤了然于胸后再操作，可以保证实验操作的连贯性，以减少PEG中途凝固的机会。
思考题
l、在显微镜下按顺序绘制所观察到的细胞融合各阶段，并注明主要特点。
2、你测定的细胞融合率为多少?
3、下面是某些贴壁细胞培养数天后观察计数的结果：
瓶
培养基
镜下观察
计数
清澈度
颜色
细胞界限
胞内颗粒
空泡
碎片
总
死
甲
乙
丙
丁
混蚀
清
清
清
黄
橙黄
黄
紫红
不清
清楚
清楚
不清
多
少
较多
多
多大
少
有
多
满视野
无
有
多
6×104
9×104
2×106
2×104
5×104
2×102
5×104
1×104
（1）、根据上表分析各瓶细胞的生长情况是：
A细胞生长状态良好；
B培养时间太短；
C细胞污染可能性大；
D细胞与环境生长不适；
E细胞营养不足。
甲（）乙（）丙（）丁（）
（2）、根据你的判断应采取的措施是：
A将细胞弃去；
B立即换新鲜培养液；
C立即传代；
D放置继续观察；
E换到新的培养瓶中。
甲（）乙（）丙（）丁（）
4、作图
将你观察到的培养细胞作一草图。
细胞的原代培养
教学目标及其基本要求：
1.掌握原代培养的基本操作过程。
2.掌握细胞培养所需的仪器、设备。
3.了解和掌握无菌操作。
教学内容提要及时间分配
1．细胞培养的概念，原代培养及传代培养的概念（10min）。
2．观看细胞培养VCD（1小时）。
3．讲述实验操作中的注意事项及流程（20min）。
4．学生实验（2小时）。
5．总结讨论⑴细胞培养概念。
⑵细胞培养所需的仪器、设备。
⑶无菌操作注意事项。
⑷自己实验操作的体会、经验。
教学重点及难点
教学重点
1.实验过程始终注意无菌操作。
教学难点
1.实验过程始终注意无菌操作。
教学方法
1.采用多媒体教学，让同学们对整个细胞培养过程有一个完整系统的认识。
2.讨论、实验完毕，同学们以组为单位总结。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
多媒体VCD教学。
使用的教材及参考资料
a）细胞生物学实验（第四版）。
b）细胞的原代培养和传代培养。
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
培养学生使用倒置显微镜寻找，区分和观察培养瓶内贴壁细胞和消化后悬浮的细胞的能力。
思考题
1.原代培养与传代培养的区别？
2.根据实验经验，试总结无菌操作的注意事项。
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