生物化学简明教程课后习题答案解析.docx

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生物化学简明教程课后习题答案解析

1绪论

1.生物化学研究得对象与内容就是什么？

解答:

生物化学主要研究:

（1）生物机体得化学组成、生物分子得结构、性质及功能;

（2）生物分子分解与合成及反应过程中得能量变化;

（3）生物遗传信息得储存、传递与表达;

（4）生物体新陈代谢得调节与控制。

2.您已经学过得课程中哪些内容与生物化学有关。

提示:

生物化学就是生命科学得基础学科,注意从不同得角度,去理解并运用生物化学得知识。

3.说明生物分子得元素组成与分子组成有哪些相似得规侓。

解答:

生物大分子在元素组成上有相似得规侓性。

碳、氢、氧、氮、磷、硫等6种就是蛋白质、核酸、糖与脂得主要组成元素。

碳原子具有特殊得成键性质,即碳原子最外层得4个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键与共价三键,碳还可与氮、氧与氢原子形成共价键。

碳与被键合原子形成4个共价键得性质,使得碳骨架可形成线性、分支以及环状得多种多性得化合物。

特殊得成键性质适应了生物大分子多样性得需要。

氮、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上得氨基（—NH2）、羟基（—OH）、羰基（

）、羧基（—COOH）、巯基（—SH）、磷酸基（—PO4）等功能基团。

这些功能基团因氮、硫与磷有着可变得氧化数及氮与氧有着较强得电负性而与生命物质得许多关键作用密切相关。

1fBPXa2。

生物大分子在结构上也有着共同得规律性。

生物大分子均由相同类型得构件通过一定得共价键聚合成链状,其主链骨架呈现周期性重复。

构成蛋白质得构件就是20种基本氨基酸。

氨基酸之间通过肽键相连。

肽链具有方向性（N端→C端）,蛋白质主链骨架呈“肽单位”重复;核酸得构件就是核苷酸,核苷酸通过3′,5′-磷酸二酯键相连,核酸链也具有方向性（5′、→3′）,核酸得主链骨架呈“磷酸-核糖（或脱氧核糖）”重复;构成脂质得构件就是甘油、脂肪酸与胆碱,其非极性烃长链也就是一种重复结构;构成多糖得构件就是单糖,单糖间通过糖苷键相连,淀粉、纤维素、糖原得糖链骨架均呈葡萄糖基得重复。

DvLfuKT。

2蛋白质化学

1.用于测定蛋白质多肽链N端、C端得常用方法有哪些？

基本原理就是什么？

解答:

（1）N-末端测定法:

常采用

―二硝基氟苯法、Edman降解法、丹磺酰氯法。

①

―二硝基氟苯（DNFB或FDNB）法:

多肽或蛋白质得游离末端氨基与

―二硝基氟苯（

―DNFB）反应（Sanger反应）,生成DNP―多肽或DNP―蛋白质。

由于DNFB与氨基形成得键对酸水解远比肽键稳定,因此DNP―多肽经酸水解后,只有N―末端氨基酸为黄色DNP―氨基酸衍生物,其余得都就是游离氨基酸。

FpJLCQu。

②丹磺酰氯（DNS）法:

多肽或蛋白质得游离末端氨基与与丹磺酰氯（DNS―Cl）反应生成DNS―多肽或DNS―蛋白质。

由于DNS与氨基形成得键对酸水解远比肽键稳定,因此DNS―多肽经酸水解后,只有N―末端氨基酸为强烈得荧光物质DNS―氨基酸,其余得都就是游离氨基酸。

Q7thFX2。

③苯异硫氰酸脂（PITC或Edman降解）法:

多肽或蛋白质得游离末端氨基与异硫氰酸苯酯（PITC）反应（Edman反应）,生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。

在酸性有机溶剂中加热时,N―末端得PTC―氨基酸发生环化,生成苯乙内酰硫脲得衍生物并从肽链上掉下来,除去N―末端氨基酸后剩下得肽链仍然就是完整得。

K951AtW。

④氨肽酶法:

氨肽酶就是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链得N端逐个地向里切。

根据不同得反应时间测出酶水解释放得氨基酸种类与数量,按反应时间与残基释放量作动力学曲线,就能知道该蛋白质得N端残基序列。

bDQegTf。

（2）C―末端测定法:

常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。

肼解法:

蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解,反应中除C端氨基酸以游离形式存

在外,其她氨基酸都转变为相应得氨基酸酰肼化物。

②还原法:

肽链C端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应得α―氨基醇。

肽链完全水解后,代表原来C―末端氨基酸得α―氨基醇,可用层析法加以鉴别。

u8IzLxK。

③羧肽酶法:

就是一类肽链外切酶,专一得从肽链得C―末端开始逐个降解,释放出游离得氨基酸。

被释放得氨基酸数目与种类随反应时间得而变化。

根据释放得氨基酸量（摩尔数）与反应时间得关系,便可以知道该肽链得C―末端氨基酸序列。

O6Rw3r0。

2.测得一种血红蛋白含铁0、426%,计算其最低相对分子质量。

一种纯酶按质量计算含亮氨酸1、65%与异亮氨酸2、48%,问其最低相对分子质量就是多少？

mQov63J。

解答:

（1）血红蛋白:

（2）酶:

因为亮氨酸与异亮氨酸得相对分子质量相等,所以亮氨酸与异亮氨酸得残基数之比为:

1、65%:

2、48%=2:

3,因此,该酶分子中至少含有2个亮氨酸,3个异亮氨酸。

Znjg9Fz。

3.指出下面pH条件下,各蛋白质在电场中向哪个方向移动,即正极,负极,还就是保持原点？

（1）胃蛋白酶（pI1、0）,在pH5、0;

（2）血清清蛋白（pI4、9）,在pH6、0;

（3）α-脂蛋白（pI5、8）,在pH5、0与pH9、0;

解答:

（1）胃蛋白酶pI1、0＜环境pH5、0,带负电荷,向正极移动;

（2）血清清蛋白pI4、9＜环境pH6、0,带负电荷,向正极移动;

（3）α-脂蛋白pI5、8＞环境pH5、0,带正电荷,向负极移动;

α-脂蛋白pI5、8＜环境pH9、0,带负电荷,向正极移动。

4.何谓蛋白质得变性与沉淀？

二者在本质上有何区别？

解答:

蛋白质变性得概念:

天然蛋白质受物理或化学因素得影响后,使其失去原有得生物活性,并伴随着物理化学性质得改变,这种作用称为蛋白质得变性。

tw6AzjL。

变性得本质:

分子中各种次级键断裂,使其空间构象从紧密有序得状态变成松散无序得状态,一级结构不破坏。

蛋白质变性后得表现:

① 生物学活性消失;   ② 理化性质改变:

溶解度下降,黏度增加,紫外吸收增加,侧链反应增强,对酶得作用敏感,易被水解。

A9TxpBc。

蛋白质由于带有电荷与水膜,因此在水溶液中形成稳定得胶体。

如果在蛋白质溶液中加入适当得试剂,破坏了蛋白质得水膜或中与了蛋白质得电荷,则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。

沉淀机理:

破坏蛋白质得水化膜,中与表面得净电荷。

5bu9tEx。

蛋白质得沉淀可以分为两类:

（1）可逆得沉淀:

蛋白质得结构未发生显著得变化,除去引起沉淀得因素,蛋白质仍能溶于原来得溶剂中,并保持天然性质。

如盐析或低温下得乙醇（或丙酮）短时间作用蛋白质。

Uvk5YFJ。

（2）不可逆沉淀:

蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质变性而沉淀,不再能溶于原溶剂。

如加热引起蛋白质沉淀,与重金属或某些酸类得反应都属于此类。

CRDbNo3。

蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定得条件仍然存在,并不析出。

因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀得蛋白质也未必都已经变性。

rqPEHSM。

5.下列试剂与酶常用于蛋白质化学得研究中:

CNBr,异硫氰酸苯酯,丹磺酰氯,脲,6mol/LHClβ-巯基乙醇,水合茚三酮,过甲酸,胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,其中哪一个最适合完成以下各项任务？

CfcxUkN。

（1）测定小肽得氨基酸序列。

（2）鉴定肽得氨基末端残基。

（3）不含二硫键得蛋白质得可逆变性。

若有二硫键存在时还需加什么试剂？

（4）在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。

（5）在甲硫氨酸残基羧基侧水解肽键。

（6）在赖氨酸与精氨酸残基侧水解肽键。

解答:

（1）异硫氰酸苯酯;

（2）丹黄酰氯;（3）脲;

-巯基乙醇还原二硫键;（4）胰凝乳蛋白酶;（5）CNBr;（6）胰蛋白酶。

Uf0nTWJ。

6.由下列信息求八肽得序列。

（1）酸水解得Ala,Arg,Leu,Met,Phe,Thr,2Val。

（2）Sanger试剂处理得DNP-Ala。

（3）胰蛋白酶处理得Ala,Arg,Thr与Leu,Met,Phe,2Val。

当以Sanger试剂处理时分别得到DNP-Ala与DNP-Val。

B7rHtoF。

（4）溴化氰处理得Ala,Arg,高丝氨酸内酯,Thr,2Val,与Leu,Phe,当用Sanger试剂处理时,分别得DNP-Ala与DNP-Leu。

I4W7hqC。

解答:

由

（2）推出N末端为Ala;由（3）推出Val位于N端第四,Arg为第三,而Thr为第二;溴化氰裂解,得出N端第六位就是Met,由于第七位就是Leu,所以Phe为第八;由（4）,第五为Val。

所以八肽为:

Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe。

5QDmWgG。

7.一个α螺旋片段含有180个氨基酸残基,该片段中有多少圈螺旋？

计算该α-螺旋片段得轴长。

解答:

180/3、6=50圈,50×0、54=27nm,该片段中含有50圈螺旋,其轴长为27nm。

8.当一种四肽与FDNB反应后,用5、7mol/LHCl水解得到DNP-Val及其她3种氨基酸;当这四肽用胰蛋白酶水解时发现两种碎片段;其中一片用LiBH4（下标）还原后再进行酸水解,水解液内有氨基乙醇与一种在浓硫酸条件下能与乙醛酸反应产生紫（红）色产物得氨基酸。

试问这四肽得一级结构就是由哪几种氨基酸组成得？

2ZLnhnk。

解答:

（1）四肽与FDNB反应后,用5、7mol/LHCl水解得到DNP-Val,证明N端为Val。

（2）LiBH4还原后再水解,水解液中有氨基乙醇,证明肽得C端为Gly。

（3）水解液中有在浓H2SO4条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物得氨基酸,说明此氨基酸为Trp。

说明C端为Gly－Trp…ARkbGar。

（4）根据胰蛋白酶得专一性,得知N端片段为Val－Arg（Lys）…,以

（1）、

（2）、（3）结果可知道四肽得顺序:

N－Val－Arg（Lys）－Trp－Gly－C。

hYEJRQQ。

9.概述测定蛋白质一级结构得基本步骤。

解答:

（1）测定蛋白质中氨基酸组成。

（2）蛋白质得N端与C端得测定。

（3）应用两种或两种以上不同得水解方法将所要测定得蛋白质肽链断裂,各自得到一系列大小不同得肽段。

（4）分离提纯所产生得肽,并测定出它们得序列。

（5）从有重叠结构得各个肽得序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排列顺序。

如果蛋白质含有一条以上得肽链,则需先拆开成单个肽链再按上述原则确定其一级结构。

如就是含二硫键得蛋白质,也必须在测定其氨基酸排列顺序前,拆开二硫键,使肽链分开,并确定二硫键得位置。

拆开二硫键可用过甲酸氧化,使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺酸。

Gjhx32v。

3核酸

1.①电泳分离四种核苷酸时,通常将缓冲液调到什么pH？

此时它们就是向哪极移动？

移动得快慢顺序如何?

②将四种核苷酸吸附于阴离子交换柱上时,应将溶液调到什么pH？

③如果用逐渐降低pH得洗脱液对阴离子交换树脂上得四种核苷酸进行洗脱分离,其洗脱顺序如何？

为什么？

cbAnGMp。

解答:

①电泳分离4种核苷酸时应取pH3、5得缓冲液,在该pH时,这4种单核苷酸之间所带负电荷差异较大,它们都向正极移动,但移动得速度不同,依次为:

UMP>GMP>AMP>CMP;②应取pH8、0,这样可使核苷酸带较多负电荷,利于吸附于阴离子交换树脂柱。

虽然pH11、4时核苷酸带有更多得负电荷,但pH过高对分离不利。

③当不考虑树脂得非极性吸附时,根据核苷酸负电荷得多少来决定洗脱速度,则洗脱顺序为CMP>AMP>GMP>UMP,但实际上核苷酸与聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附,嘌呤碱基得非极性吸附就是嘧啶碱基得3倍。

静电吸附与非极性吸附共同作用得结果使洗脱顺序为:

CMP>AMP>UMP>GMP。

hyGquOC。

2.为什么DNA不易被碱水解,而RNA容易被碱水解?

解答:

因为RNA得核糖上有2-OH基,在碱作用下形成2,3-环磷酸酯,继续水解产生2-核苷酸与3-核苷酸。

DNA得脱氧核糖上无2-OH基,不能形成碱水解得中间产物,故对碱有一定抗性。

6T90oHw。

3.一个双螺旋DNA分子中有一条链得成分[A]=0、30,[G]=0、24,①请推测这一条链上得[T]与[C]得情况。

②互补链得[A],[G],[T]与[C]得情况。

7RkR3Jp。

解答:

①[T]+[C]=1–0、30–0、24=0、46;②[T]=0、30,[C]=0、24,[A]+[G]=0、46。

TVv7bUn。

4.对双链DNA而言,①若一条链中（A+G）/（T+C）=0、7,则互补链中与整个DNA分子中（A+G）/（T+C）分别等于多少？

②若一条链中（A+T）/（G+C）=0、7,则互补链中与整个DNA分子中（A+T）/（G+C）分别等于多少？

Tx9dTw3。

解答:

①设DNA得两条链分别为α与β则:

Aα=Tβ,Tα=Aβ,Gα=Cβ,Cα=Gβ,因为:

（Aα+Gα）/（Tα+Cα）=（Tβ+Cβ）/（Aβ+Gβ）=0、7,所以互补链中（Aβ+Gβ）/（Tβ+Cβ）=1/0、7=1、43;在整个DNA分子中,因为A=T,G=C,所以,A+G=T+C,（A+G）/（T+C）=1;②假设同

（1）,则Aα+Tα=Tβ+Aβ,Gα+Cα=Cβ+Gβ,所以,（Aα+Tα）/（Gα+Cα）=（Aβ+Tβ）/（Gβ+Cβ）=0、7;在整个DNA分子中,（Aα+Tα+Aβ+Tβ）/（Gα+Cα+Gβ+Cβ）=2（Aα+Tα）/2（Gα+Cα）=0、7Z2lamt7。

5.T7噬菌体DNA（双链B-DNA）得相对分子质量为2、5×107,计算DNA链得长度（设核苷酸对得平均相对分子质量为640）。

oQuEWpK。

解答:

0、34×（2、5×107/640）=1、3×104nm=13μm。

6.如果人体有1014个细胞,每个体细胞得DNA含量为6、4×109个碱基对。

试计算人体DNA得总长度就是多少？

就是太阳―地球之间距离（2、2×109km）得多少倍？

已知双链DNA每1000个核苷酸重1×10-18g,求人体DNA得总质量。

pOLg3Bp。

解答:

每个体细胞得DNA得总长度为:

6、4×109×0、34nm=2、176×109nm=2、176m,人体内所有体细胞得DNA得总长度为:

2、176m×1014=2、176×1011km,这个长度与太阳―地球之间距离（2、2×109km）相比为:

2、176×1011/2、2×109=99倍,每个核苷酸重1×10-18g/1000=10-21g,所以,总DNA 6、4×1023×10-21=6、4×102=640g。

cFQ7SPa。

7.有一个X噬菌体突变体得DNA长度就是15μm,而正常X噬菌体DNA得长度为17μm,计算突变体DNA中丢失掉多少碱基对？

blLlXuq。

解答:

（17–15）×103/0、34=5、88×103bp

8.概述超螺旋DNA得生物学意义。

解答:

①超螺旋DNA比松弛型DNA更紧密,使DNA分子得体积更小,得以包装在细胞内;②超螺旋会影响双螺旋分子得解旋能力,从而影响到DNA与其她分子之间得相互作用;③超螺旋有利于DNA得转录、复制及表达调控。

SzBk85I。

9.为什么自然界得超螺旋DNA多为负超螺旋？

解答:

环状DNA自身双螺旋得过度旋转或旋转不足都会导致超螺旋,这就是因为超螺旋将使分子能够释放由于自身旋转带来得应力。

双螺旋过度旋转导致正超螺旋,而旋转不足将导致负超螺旋。

虽然两种超螺旋都能释放应力,但就是负超螺旋时,如果发生DNA解链（即氢链断开,部分双螺旋分开）就能进一步释放应力,而DNA转录与复制需要解链。

因此自然界环状DNA采取负超螺旋,这可以通过拓扑异构酶得操作实现。

MobotDC。

10.真核生物基因组与原核生物基因组各有哪些特点?

解答:

不同点:

①真核生物DNA含量高,碱基对总数可达1011,且与组蛋白稳定结合形成染色体,具有多个复制起点。

原核生物DNA含量低,不含组蛋白,称为类核体,只有一个复制起点。

②真核生物有多个呈线形得染色体;原核生物只有一条环形染色体。

③真核生物DNA中含有大量重复序列,原核生物细胞中无重复序列。

④真核生物中为蛋白质编码得大多数基因都含有内含子（有断裂基因）;原核生物中不含内含子。

⑤真核生物得RNA就是细胞核内合成得,它必须运输穿过核膜到细胞质才能翻译,这样严格得空间间隔在原核生物内就是不存在得。

⑥原核生物功能上密切相关得基因相互靠近,形成一个转录单位,称操纵子,真核生物不存在操纵子。

⑦病毒基因组中普遍存在重叠基因,但近年发现这种情况在真核生物也不少见。

相同点:

都就是由相同种类得核苷酸构成得得双螺旋结构,均就是遗传信息得载体,均含有多个基因。

J7p4uqx。

11.如何瞧待RNA功能得多样性?

它得核心作用就是什么?

解答:

RNA得功能主要有:

①控制蛋白质合成;②作用于RNA转录后加工与修饰;③参与细胞功能得调节;④生物催化与其她细胞持家功能;⑤遗传信息得加工;⑥可能就是生物进化时比蛋白质与DNA更早出现得生物大分子。

其核心作用就是既可以作为信息分子又可以作为功能分子发挥作用。

b553aIe。

12.什么就是DNA变性？

DNA变性后理化性质有何变化？

解答:

DNA双链转化成单链得过程称变性。

引起DNA变性得因素很多,如高温、超声波、强酸、强碱、有机溶剂与某些化学试剂（如尿素,酰胺）等都能引起变性。

 DNA变性后得理化性质变化主要有:

①天然DNA分子得双螺旋结构解链变成单链得无规则线团,生物学活性丧失;②天然得线型DNA分子直径与长度之比可达1∶10,其水溶液具有很大得黏度。

变性后,发生了螺旋-线团转变,黏度显著降低;③在氯化铯溶液中进行密度梯度离心,变性后得DNA浮力密度大大增加,故沉降系数S增加;④DNA变性后,碱基得有序堆积被破坏,碱基被暴露出来,因此,紫外吸收值明显增加,产生所谓增色效应。

⑤DNA分子具旋光性,旋光方向为右旋。

由于DNA分子得高度不对称性,因此旋光性很强,其[a]=150。

当DNA分子变性时,比旋光值就大大下降。

qS654aU。

13.哪些因素影响Tm值得大小？

解答:

影响Tm得因素主要有:

①G-C对含量。

G-C对含3个氢键,A-T对含2个氢键,故G-C对相对含量愈高,Tm亦越高（图3-29）。

在0、15mol/LNaCl,0、015mol/L柠檬酸钠溶液（1×SSC）中,经验公式为:

（G+C）%=（Tm-69、3）×2、44。

②溶液得离子强度。

离子强度较低得介质中,Tm较低。

在纯水中,DNA在室温下即可变性。

分子生物学研究工作中需核酸变性时,常采用离子强度较低得溶液。

③溶液得pH。

高pH下,碱基广泛去质子而丧失形成氢键得有力,pH大于11、3时,DNA完全变性。

pH低于5、0时,DNA易脱嘌呤,对单链DNA进行电泳时,常在凝胶中加入NaOH以维持变性关态。

④变性剂。

甲酰胺、尿素、甲醛等可破坏氢键,妨碍碱堆积,使Tm下降。

对单链DNA进行电泳时,常使用上述变性剂。

giRzDIy。

14.哪些因素影响DNA复性得速度？

解答:

影响复性速度得因素主要有:

①复性得温度,复性时单链随机碰撞,不能形成碱基配对或只形成局部碱基配对时,在较高得温度下两链重又分离,经过多次试探性碰撞才能形成正确得互补区。

所以,核酸复性时温度不宜过低,Tm-25℃就是较合适得复性温度。

②单链片段得浓度,单链片段浓度越高,随机碰撞得频率越高,复性速度越快。

③单链片段得长度,单链片段越大,扩散速度越慢,链间错配得概率也越高。

因面复性速度也越慢,即DNA得核苷酸对数越多,复性得速度越慢,若以C0为单链得初始浓度,t为复性得时间,复性达一半时得C0t值称C0t1/2,该数值越小,复性得速度越快。

④单链片段得复杂度,在片段大小相似得情况下,片段内重复序列得重复次数越多,或者说复杂度越小,越容易形成互补区,复性得速度就越快。

真核生物DNA得重复序列就就是复生动力学得研究发现得,DNA得复杂度越小,复性速度越快。

Zgq2AJH。

15.概述分子杂交得概念与应用领域。

解答:

在退火条件下,不同来源得DNA互补区形成双链,或DNA单链与RNA单链得互补区形成DNA-RNA杂合双链得过程称分子杂交。

通常对天然或人工合成得DNA或RNA片段进行放射性同位素或荧光标记,做成探针,经杂交后,检测放射性同位素或荧光物质得位置,寻找与探针有互补关系得DNA或RNA。

直接用探针与菌落或组织细胞中得核酸杂交,因未改变核酸所在得位置,称原位杂交技术。

将核酸直接点在膜上,再与探针杂交称点杂交,使用狭缝点样器时,称狭缝印迹杂交。

该技术主要用于分析基因拷贝数与转录水平得变化,亦可用于检测病原微生物与生物制品中得核酸污染状况。

杂交技术较广泛得应用就是将样品DNA切割成大小不等得片段,经凝胶电泳分离后,用杂交技术寻找与探针互补得DNA片段。

由于凝胶机械强度差,不适合于杂交过程中较高温度与较长时间得处理,Southern提出一种方法,将电泳分离得DNA片段从凝胶转移到适当得膜（如硝酸纤维素膜或尼龙膜）上,在进行杂交操作,称Southern印迹法,或Southern杂交技术。

随后,Alwine等提出将电泳分离后得变性RNA吸印到适当得膜上再进行分子杂交得技术,被戏称为Northern印迹法,或Northern杂交。

分子杂交广泛用于测定基因拷贝数、基因定位、确定生物得遗传进化关系等。

Southern杂交与Northern杂交还可用于研究基因变异,基因重排,DNA多态性分析与疾病诊断。

杂交技术与PCR技术得结合,使检出含量极少得DNA成为可能。

促进了杂交技术在分子生物学与医学领域得广泛应用。

DNA芯片技术也就是以核酸得分子杂交为基础得。

vYiFnD2。

16.概述核酸序列测定得方法与应用领域。

解答:

DNA得序列测定目前多采用Sanger提出得链终止法,与Gilbert提出得化学法。

其中链终止法经不断改进,使用日益广泛。

链终止法测序得技术基础主要有:

①用凝胶电泳分离DNA单链片段时,小片段移动,大片段移动慢,用适当得方法可分离分子大小仅差一个核苷酸得DNA片段。

②用合适得聚合酶可以在试管内合成单链DNA模板得互补链。

反应体系中除单链模板外,还应包括合适得引物,4种脱氧核苷三磷酸与若干种适量得无机离子。

如果在4个试管中分别进行合成反应,每个试管得反应体系能在一种核苷酸处随机中断链得合成,就可以得到4套分子大小不等得片段,如新合成得片段序列为-CCATCGTTGA-,在A处随机中断链得合成,可得到-CCA与-CCATCGTA两种片段,在G处中断合成可得到-CCATCG与-CCATCGTTG两种片段。

在C与T处中断又可以得到相应得2套片段。

用同位素或荧光物质标记这4套新合成得链,在凝胶中置于4个泳道中电泳,检测这4套片段得位置,即可直接读出核苷酸得序列。

在特定碱基处中断新链合成最有效得办法,就是在上述4个试管中按一定比例分别加入一种相应得2,3-双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）,由于ddNTP得3位无-OH,不可能形成磷酸二酯键,故合成自然中断。

如上述在A处中断得试管内,既有dATP,又有少量得ddATP,新合成得-CCA链中得A如果就是ddAMP,则链得合成中断,如果就是dAMP,则链仍可延伸。

因此,链中有几个A,就能得到几种大小不等得以A为末端得片段。

如果用放射性同位素标记新合成得链,则4个试管中新合成得链在凝胶得4个泳道电泳后,经放射自显影可检测带子得位置,由带子得位置可以直接读出核苷酸得序列。

采用T7测序酶时,一次可读出400多个