富含血小板血浆和rhBMP.docx

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富含血小板血浆和rhBMP

富含血小板血浆和rhBMP

【摘要】【目的】研究自体富含血小板血浆和人重组骨形成蛋白对下颌骨组织形成的促进作用。

【方法】成年新西兰白兔45只，随机分为3组，每组15只，选择右侧下颌骨为实验侧、左侧下颌骨为对照侧。

A组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和PRP，B组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵和rhBMP-2，C组右侧下颌骨缺损区放置明胶海绵、PRP和rhBMP-2，各组左侧下颌骨缺损区只放置明胶海绵。

分别于术后2、4、8周各取5只兔子进行放射性核素99mTc-MDP骨显像、X线片和组织学切片检查。

【结果】A组动物右侧放射性核素计数在术后2、4周时明显高于左侧；B组动物右侧放射性核素计数在第4周时高于左侧，而在第2、8周时低于左侧；C组动物右侧放射性核素计数在第2、4周时均高于左侧，在第8周时两侧没有明显差别。

【结论】PRP单独或与rhBMP-2复合均能促进下颌骨组织的增长。

【关键词】富含血小板血浆;骨形成蛋白;骨再生

]牙槽骨是支持、稳固牙齿、维护咀嚼功能的重要组织，由于炎症、外伤、肿瘤、功能性萎缩等原因，牙槽骨非常容易吸收、丧失，进而影响咀嚼功能。

牙槽骨组织的吸收、丧失，导致牙齿松动，义齿、种植牙修复困难，进行牙槽骨移植是重建牙槽骨的重要手段。

关于牙槽骨的移植，主要是选择植骨材料的问题。

随着医学的不断发展，人们已经发现了众多可供移植的材料，如羟基磷灰石/脱矿骨复合物、医学组织工程材料支架等[1、2]，但至今为止尚未找到一种既安全、经济，又有理想效果的牙槽骨植骨材料。

本实验通过同位素骨显影技术观察自体富含血小板血浆及人重组骨形成蛋白对兔下颌骨缺损区骨组织代谢的影响，现报道如下。

1材料和方法

　材料

45只健康成年新西兰白兔，雌雄不限，体质量～kg，分笼饲养。

人重组骨形成蛋白-2，由广州威佳科技有限公司提供。

自体富含血小板血浆，手术前制备。

以明胶海棉作为PRP及rhBMP-2的载体。

　PRP的制备

　g/L戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，从兔耳中央动脉抽取5mL自体血，装在预先放有mL复方枸橼酸钠抗凝剂的10mL离心管中,参照Landeaserg法进行PRP提取：

将新鲜血分两次离心，第一次离心1000r/min×10min，吸管吸取全部上清液至交界面下3mm，移至另一离心管，平衡后再次离心1000r/min×10min，此时离心管中液体分为两层，吸取约3/4上清液弃掉，摇匀剩余液体，即为PRP，摇匀，备用。

经检测，离心前血小板计数为336×109/L，离心后血小板计数为1498×109/L，离心后的血小板浓度是离心前的450%左右。

制作过程严格无菌操作。

　手术与分组

健康成年新西兰白兔45只，随机分为A、B、C3组，每组15只。

每只兔在双侧下颌骨体部，即近犬齿、前臼齿根尖处建立骨缺损区，右侧为实验侧，其中A组放置PRP和明胶海绵，B组放置rhBMP-2和明胶海绵，C组放置PRP、rhBMP-2和明胶海绵；左侧为对照侧，均只放置明胶海绵。

　实验方法

　g/L戊巴比妥钠按g/kg腹腔注射麻醉，显效后在手术区局部注射g/L利多卡因。

常规备皮、消毒、铺巾。

沿下颌骨下缘作平行切口，长度为3～4cm，分层切开皮肤、皮下组织，暴露下颌骨下缘及下颌骨颊面，用裂钻在下颌骨体部颊侧中下1/3处制备缺损区，长、宽、深分别为8mm×6mm×2mm，手术时使用生理盐水降温，术后使用庆大霉素注射液冲洗防止感染。

缺损区制备后，兔子右侧：

A组以明胶海绵加PRP填塞，B组以明胶海绵加rhBMP-2填塞，C组以明胶海绵加PRP及rhBMP-2填塞；左侧均以明胶海绵填塞。

严密缝合伤口，分笼饲养。

术后给予青霉素肌注预防感染，剂量为40万U/次，每天一次，持续3d。

　观察指标

　放射性核素骨显像各组分别在术后第2、4、8周时随机抽取5只大白兔，由耳缘静脉注射962MBq99mTc-MDP，3h后在全麻状态下将大白兔仰卧固定，取其下颌骨正面及双侧摄取相的静态骨显像。

在双侧缺损区取约10mm×8mm的面积作为感兴趣区，使用高分辨准直器γ照相机进行骨显像，计算机软件分别计算每个ROI的平均放射性计数，并以下颌颏部正中同样面积的平均放射性计数比值相比较。

为减少误差，测量时每个ROI的放射性平均计数重复测量5次，取平均值。

在实验过程中对核医学医师采用单盲法。

　X线片检查经过核素检查后的大白兔，使用血管内注射空气法处死，取标本照X光照片，观察缺损区内新骨形成情况。

　组织学观察上述标本经100ml/L福尔马林固定，50ml/L硝酸脱钙，系列脱水，石蜡包埋，连续切片，HE染色，光镜观察。

　统计分析

采用配对t检验，SPSS软件进行统计分析。

2结果

　99mTc-MDP骨显像

A组动物实验侧放射性计数在第2、4周时明显高于对照侧，而8周时放射性计数与对照侧相比无显着性差别；B组动物实验侧放射性计数在第2、8周时低于对照侧，而第4周时高于对照侧；C组动物实验侧放射性计数在第2、4周时随着时间的推移明显增高，且明显高于对照组，到第8周时放射性计数明显降低，但与对照组相比无显着性差别。

　　　X线检查结果

所有结果显示，兔子下颌骨缺损区在术后2周时清晰可见，到术后4周时，缺损区已经有骨组织生长，术后8周时，缺损区基本消失，骨组织恢复良好，各组之间、实验侧与对照侧之间没有明显差别（图1）。

　组织学观察

A组和C组动物在术后2周时，实验侧骨组织呈迷路样增长，骨陷窝清晰可见，纤维组织比对照侧少，骨母细胞较多，部分为正方形，此时骨小梁排列仍不规则；8周时，实验侧和对照侧骨组织密度接近，实验侧骨细胞胞核大而黑，可见粘合线。

B组动物在术后2、4周时，实验侧和对照侧均可见较多的纤维组织，骨细胞的增殖较A、C组少，8周时骨组织基本成熟，两侧差别较小（图2）。

3讨论

PRP技术是以患者自体血为原料，通过梯度密度离心的方法获得富含血小板的血浆，再单独或联合其他生物材料注入硬组织缺损或软组织创伤处，从而修补缺损，诱导生长，加速局部创伤的愈合并提高愈合质量。

其作用的发挥有赖于PRP中浓缩血小板脱颗粒后产生的各类高浓度生长因子以及纤维蛋白原所形成的纤维网状支架〔4〕。

PRP中主要的生长因子是转移生长因子-β、血小板衍生生长因子、类胰岛素生长因子等〔5，6〕。

1998年Marx等〔7〕首次将PRP技术用于肿瘤术后病人的下颌重建，发现PRP可明显加速骨形成率，促进

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