分子生物学知识点.docx
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分子生物学知识点
一
1、分子生物学：
研究核酸等生物大分子功能、形态构造等特性及其重要性和规律性科学，是人类从分子水平上真正揭开生物世界奥秘，由被动适应自然界转向积极地改造和重组自然界基本学科
2、基因：
是合成一种功能蛋白或RNA分子所必须所有DNA序列。
一种典型真核基因涉及：
编码序列-外显子；内含子；5’端和3’端非翻译区UTR；调控序列
3、基因组：
某一特定生物体整套遗传物质综合。
基因组大小用所有DNA碱基对总数表达
5、分子生物学发展史
1869年Miesher初次从莱茵河鲑鱼精子中提取了DNA。
19，德国科学家Kossel第一种分离了腺嘌呤、胸腺嘧啶和组氨酸。
1953年，Watson和Crick提出DNA反向平行双螺旋构造模型，为充分解释遗传信息传递规律铺平了道路。
1961年，法国科学家Jacob和Monod提出并证明了操纵子作为调节细菌细胞代谢分子机制。
此外，她们还初次提出存在一种与染色体DNA序列互相补、能将编码在染色体DNA上遗传信息带到蛋白质合成场合并翻译产生蛋白质信使核糖核酸。
这一学说对分子生物学发展起到了十分重要作用。
1968年，美国科学家Nirenberg由于在破译DNA遗传密码方面贡献，与Holley和Khorana等人分享了诺贝尔生理医学奖。
Holley功绩在于阐明了酵母丙氨酸tRNA核苷酸序列，并证明所有tRNA具备相似构造，而Khorana第一种合成了核苷酸分子，并且人工复制了酵母基因
6、中心法则内容
DNA是自身复制模板
DNA通过转录作用将遗传信息传递给中间物质RNA
RNA通过翻译作用将遗传信息表达到蛋白质
在某些病毒中，RNA也可以自我复制，并且还发当前某些病毒蛋白质合成过程中，RNA可以在逆转录酶作用下合成DNA.
7、分子生物学3条基本原理：
构成生物体各类有机大分子单体在不同生物中都是相似；
生物体内一切有机大分子构成都遵循共同规则；
某一特定生物体所拥有核酸及蛋白质分子决定了它属性。
8、分子生物学研究内容
DNA重组技术（基因工程）：
将不同DNA片段按照人们设计定向连接起来，在特定受体细胞中与载体同步复制并得到表达，产生影响受体细胞新遗传性状
基因表达调控
生物大分子构造和功能研究（构造分子生物学）
基因组、功能基因组与生物信息学研究
9、DNA重组技术应用
可被用于大量生产某些在正常细胞代谢中产量很低多肽；
可用于定向改造某些生物基因组构造；
可被用来进行基本研究
10、基因表达调控
在个体生长发育过程中基因表达调控重要发生在转录水平或翻译水平上
原核生物基因表达调控重要发生在转录水平上
真核生物发生在各种不同水平上
体当前：
信号转导研究，转录因子研究，RNA剪接
11、信号转导：
指外部信号通过细胞膜上受体蛋白传到细胞内部，并激发诸如离子通透性、细胞形状或其她细胞功能方面应答过程
作用原理：
信号转导之因此能引起细胞功能变化，重要是由于信号最后活化了某些蛋白质分子，是之发生构造变化，从而直接作用于靶位点，打开或关闭某些基因
12、转录因子：
是一群能与基因5‘端上游特定序列专一结合，从而保证目基因以特定强度在特定期间与空间表达蛋白质分子
二
1、外显子、内含子：
真核生物基因组中，蛋白质表达序列常被某些不表达间隔序列隔开，表达某些称为外显子，不表达某些称内含子
2、DNA作为遗传物质所具备特点：
分子构造相对稳定，能自我复制，在先后裔保持持续性和稳定性；能指引蛋白质合成，从而控制整个生命过程；有储存巨大数量遗传信息潜在能力；能引起可遗传变异
3、甲基化
甲基化位点：
甲基化修饰广泛存在于真核生物基因中，发生在CpG岛上，导致基因失活
甲基化在复制中调控：
复制起始调控与DNA被修饰状况有关，完全甲基化复制原点可起始复制，半甲基化子代复制原点只有恢复完全甲基化状态之后才可以被继续运用
甲基化在错配修复过程中调控：
在DNA错配修复当中，一旦复制叉通过复制起始位点，母链就会在开始DNA合成前几秒至几分钟内被甲基化，此后只要两条DNA链上碱基配对浮现错误，错配修复系统就会依照“保存母链，修复子链”原则，找出错误碱基所在DNA链，并在相应母链甲基化腺苷酸上游鸟甘酸5‘位置切开子链，再依照错配碱基相对于DNA切口方位启动修复途径，合成新子链片段
5、染色体上蛋白涉及组蛋白和非组蛋白
组蛋白：
染色体构造蛋白，与DNA构成核小体，分为H1、H2A、H2B、H3、H4，富含大量赖氨酸和精氨酸，H3、H4富含精氨酸，H1富含赖氨酸，H2A、H2B介于两者之间
组蛋白特性：
进化上极端保守，不同生物体组蛋白氨基酸构成是十分相似，特别是H3、H4；②无组织特异性；③肽链上氨基酸分布不对称性，碱性氨基酸集中分布在N端半条链上，大某些疏水基团分布在C端；
组蛋白修饰作用，甲基化、乙基化、磷酸化、ADP核糖基化；
富含赖氨酸组蛋白H5，H5具备种特异性
非组蛋白：
染色体上存在大量非组蛋白，具多样性，涉及酶类，细胞分裂关于收缩蛋白、骨架蛋白、以及肌动蛋白、肌球蛋白，也许是染色体构成某些
非组蛋白类型：
HMG蛋白，能与DNA结合也能与H1作用，但与DNA结合并不牢固，也许与DNA超螺旋关于；
DNA结合蛋白，与DNA牢固结合在一起，分子量较低，是与DNA复制或转录关于酶或调节物质；
A24非组蛋白，溶解性与组蛋白相似，C端与H2A相似，有两个N端
1、原核生物基因组构造特点：
基因组很小，大多只有一条染色体
构造简炼
存在转录单元
多顺反子
有重叠基因（Sanger发现
2、真核生物基因组构造特点：
真核基因组构造庞大，普通远不不大于原核
具有大量重复序列
非编码序列多，多于编码序列（9:
1）
转录产物为单顺反子
基因不持续性，断裂基因、内含子、外显子
存在大量顺式作用元件，启动子、增强子、沉默子等
存在大量DNA多态性（DNA序列中发生变异面导致个体间核苷酸序列差别
端粒构造
3、原核生物DNA特点：
原核生物中普通只有一条染色体，且大都带有单拷贝基因，只有很少数基因是以多拷贝形式存在；DNA分子绝大某些是用来编码蛋白质，几乎每个基因序列都与它所编码蛋白质序列成线性相应状态；存在转录单元，原核生物DNA序列中功能有关RNA和蛋白质基因往往丛集在基因组一种或几种特定部位形成转录单元或功能单位，可以被一起转录为含各种mRNA分子（多顺反子mRNA）；功能上有关几种构造基因先后相连，形成操纵子；各种基因启动子和操作子某些DNA序列各种各样，以便与RNA聚合酶及阻遏蛋白发生不同限度结合，对基因表达进行精细调节；有重叠基因，同一段DNA携带两种以上不同蛋白质信息
4、真核生物DNA特点
在体细胞中含量稳定；在生殖细胞中含量减半；能携带遗传信息；能精准自我复制；能产生可遗传变异
5、C值：
指一种生物单倍体基因组DNA总量
C值反常现象：
真核细胞基因组最大特点是它具有大量重复且功能DNA序列，序列大多被不编码蛋白质非功能DNA所隔开；C值不随生物进化限度和复杂性而增长；亲缘关系密切生物C值相差甚大；高等真核生物具备比用于遗传高得多C值
6、真核细胞DNA序列分类：
不重复序列：
普通只有一种或几种拷贝，占DNA总量40%-80%，构造基因基本属于不重复序列
中度重复序列：
重复次数在10-10000次之间，占DNA总量10%-40%，各种rRNA、tRNA以及某些构造基因
高度重复序列-卫星DNA：
只在真核生物中浮现，不转录，是异染色质成分，也许与染色体稳定性关于
7、核小体构造特点：
是由H2A、H2B、H3、H4各两个分子生成八聚体和由大概200bpDNA和一种组蛋白H1构成，是DNA压缩第一种阶段；盘状八聚体是核小体核心颗粒，涉及由H2A、H2B、H3、H4分别构成二聚体，H3、H4二聚体位于核心；146bpDNA序列环绕核心八聚体1.75圈，组蛋白H1与剩余DNA序列结合起连接作用；相邻核小体间由连接DNA序列构成；组蛋白与DNA序列结合是非特异性
10、DNA链压缩7倍→核小体压缩6倍→螺线管压缩40倍→超螺线管压缩5倍→染色体
总压缩8400
11、DNA一级构造：
是指4种核苷酸连接及其排列顺序表达了该DNA得化学构成
特点：
脱氧核糖核苷酸以3’，5’磷酸二酯键聚合成为脱氧核糖核酸（DNA）链。
链一端核苷酸有自由5’磷酸基团，称5’端；另一端核苷酸具备自由3’羟基，称3’端。
交替磷酸和2-脱氧核糖构成分子骨架，碱基为侧链，碱基类似于蛋白质氨基酸侧链，影响着所形成核酸构造和功能。
意义：
携带遗传信息；决定DNA二级构造；决定DNA空间构造
12、DNA二级构造：
是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成双螺旋构造
双螺旋构造模型要点：
1.主链：
主链是由两条反向平行多核苷酸链环绕同一中心轴构成右手螺旋构造2.嘌呤和嘧啶碱基对层叠于双螺旋内侧，脱氧核糖和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架3.碱基对：
两条链上碱基以氢键相连，G与C配对，A与T配对4.螺距：
3.4nm5.大沟和小沟：
链中螺旋型凹槽，大沟对于在遗传上有重要功能蛋白质辨认DNA双螺旋构造上特定信息是非常重要，只有在沟内，蛋白质才干“感觉”到不同碱基顺序
13、DNA二级构造类型：
右手螺旋：
A-DNA构象：
当相对湿度变化（75%如下）或由钠盐变为钾盐、铯盐，DNA构造可成为A构象。
它是B-DNA螺旋拧得更紧状态。
DNA-RNA杂交分子、RNA-RNA双链分子均采用A构象。
B-DNA构象：
相对湿度为92%时，DNA钠盐纤维为B-DNA构象。
在天然状况下，绝大多数DNA以B构象存在。
左手螺旋：
Z-DNA构象：
在一定条件下（如高盐浓度），DNA也许浮现Z构象。
Z-DNA是左手双螺旋，磷酸核糖骨架呈Z字形走向。
不存在大沟，小沟窄而深，并具备更多负电荷密度。
Z-DNA存在与基因表达调控关于。
14、DNA二级构造决定因素：
氢键，强特异性，高度方向性
碱基堆积力，同一条链中相邻碱基之间非特异性作用力，来源于疏水作用和累积范德华力
静电力，磷酸集团负电对DNA双链稳定性起负作用，阳离子可对之产生屏蔽，DNA溶液离子浓度越低，DNA越不稳定
碱基分子内能，碱基内能越高，氢键和碱基堆积力越容易被破坏，DNA双链越不稳定
核苷酸排列顺序，碱基构成相似，但嘌呤和嘧啶排列顺序不同双螺旋稳定性会有很大差别
DNA修饰：
甲基化不体现基因活性，未甲基化体现基因活性
15、引起双链构象转变因素：
核苷酸序列；碱基构成；盐种类；相对湿度
16、DNA链呼吸作用：
双螺旋DNA构造中，配对碱基之间氢键处在持续不断断裂和再生动态平衡之中，这种氢键迅速断裂和再生过程
17、DNA变性：
DNA双链氢键断裂，逐渐变为近似于无规则线团过程称为变性。
增色效应：
在变性过程中，260nm紫外线吸取值先缓慢上升，当达到某一温度时骤然上升
融解温度（Tm）：
变性过程紫外线吸取值增长中点温度
18、DNA复性（Renaturation）：
热变性DNA缓慢冷却，单链恢复成双链。
减色效应：
随着DNA复性，260nm紫外线吸取值减少现象。
复性条件：
消除磷酸基静电斥力；破坏链内氢键
复性机制：
随机碰撞，取决于DNA浓度、溶液温度、离子强度等；成核作用；拉链作用
19、DNA高档构造：
指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成特定空间构造，超螺旋是其重要形式，可分为正超螺旋和负超螺旋
松弛DNA
正超螺旋
拓扑异构酶：
通过切断DNA一条或两条链中磷酸二酯键，然后重新缠绕和封口来变化DNA连环数酶，酶
通过切断DNA中一条链减少负超螺旋，增长一种连环数；酶
也称DNA促旋酶
20、DNA半保存复制：
由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成复制方式
意义：
DNA半保存复制表白DNA在代谢上稳定性，保证亲代遗传信息稳定地传递给后裔。
24、DNA复制原则：
半保存复制；复制起始出当前称为原点特定序列上；复制控制普通是在复制起始点处；复制叉移动普通是单向或双向；链延伸方向是5‘-3‘方向；大多数状况下是半不持续；在模板存在条件下DNA聚合酶以短RNA片段作为引物开始合成DNA短片段；存在各种DNA链合成起始机制，除了RNA引物外，此外某些装置如DNA链与一种末端蛋白共价结合，以及缺口共价延伸，或者亲本链已被环出末端；终结也是在复制过程某个固定点；复制机制取决于基因组构造和构象来保护产生完整染色体；虽然在一种单细胞中也可进行各种复制机制操作
21、原核生物（大肠杆菌）DNA复制过程：
双链解开：
大概20个DnaA蛋白在ATP作用下与oriC处4个9bp保守序列相结合；在HU蛋白和ATP共同作用下,DNA复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性,形成开链；解链酶六体分别与单链DNA相结合（需DnaC协助）,进一步解开DNA双链
复制原点：
DNA复制有特定起始位点，ori（或o）、富含A、T区段，复制起点是固定，体现为固定序列，并辨认参加复制起始特殊蛋白质
复制子：
从复制原点到终点，构成一种复制单位，
复制叉：
复制时，解链酶等先将DNA一段双链解开，形成复制点，这个复制点形状象一种叉子
复制方向和速度：
单起点、双向等速，多起点、双向等速
RNA引物合成：
DnaB蛋白活化引物合成酶，引起RNA引物合成，先由RNA聚合酶在DNA模板上合成一段RNA引物；滞后链引起过程由引起体开完毕
DNA链延伸：
在DNA复制时由DNA聚合酶从引物3‘端开始合成新DNA链，合成方向与复制叉移动方向一致并持续合成链为前导链；引起体在滞后链分叉方向上迈进，在模板上断断续续引起生成滞后链引物RNA短链，再由DNA聚合酶
作用合成DNA直至遇到下一种引物或冈崎片段，合成方向与复制叉移动方向相反，形成许多不持续片段，最后再连成一条完整DNA链为滞后链
半不持续复制：
DNA复制时其中一条子链合成是持续，而另一条子链合成是不持续
冈崎片段：
在DNA复制过程中，前导链能持续合成，而滞后链只能是断续合成5‘-3’各种短片段，这些不持续小片段
切除RNA引物，弥补缺口，连接相邻DNA片段（复制终结）：
在DNA聚合酶Ⅰ催化下切除RNA引物；留下空隙由DNA聚合酶Ⅰ催化合成一段DNA弥补上；在DNA连接酶作用下，连接相邻DNA链
复制终结
a、终结序列
E.coli有两个终结区域，分别结合专一性终结蛋白
序列一：
terEterDterA
序列二：
terFterBterC
每个区域只对一种方向复制叉起作用
b、专一性终结蛋白
E.coli中由tusgene编码
通过抑制DNA螺旋酶而发挥终结作用
4、前导链：
DNA复制时，以复制叉向前移动方向为原则，一条模板链是3‘-5‘走向，DNA能以5’-3‘方向持续合成，称为前导链
滞后链：
另一条模板是5‘-3‘走向，DNA也是以5’-3‘方向合成，但复制叉移动方向正好相反，所有，随着复制叉移动，形成许多不持续片段，最后连成一条完整DNA链，为滞后链
22、真核生物中DNA复制特点：
真核生物每条染色体上有各种复制起点，多复制子；
真核生物染色体在所有复制完之前,各个起始点不再重新开始DNA复制；
真核生物迅速生长时，往往采用更多复制起点
复制元相对较小（40-100kb），复制速度较慢,大约500~5000bp/min.
真核生物有各种DNA聚合酶
组蛋白八聚体是以全保守方式传给子代分子
24、原核生物与真核生物DNA复制比较：
真核生物每条染色体上可以又各种复制起点；原核生物只有一种；
真核生物染色体在所有完毕复制前各个起点上DNA不能再开始；而在迅速生长原核生物中复制起点可以持续开始新DNA复制，可以有各种复制叉；
真核生物有各种DNA聚合酶；原核生物只有三种
真核生物有端粒复制
原核细胞生长和增值速度取决于培养条件，迅速分裂细胞有较多复制叉，复制叉多少决定了复制起始频率高低；真核细胞DNA复制调控发生在三个水平上：
细胞生活周期水平调控：
即限制点调控，决定细胞停留在G1期还是进入S期
染色体水平调控：
决定不同染色体或同一染色体不同部位复制子按一定顺序在S期起始复制
复制子水平调控：
决定复制起始与否，这种调控方式高度保守
23、DNA损伤：
碱基脱落；碱基（或核苷）变化；错误碱基；碱基缺失或插入；嘧碇碱基二聚化；链断裂；DNA链交联；氧自由基对DNA损伤
24、DNA修复：
DNA修复系统：
错配修复，恢复错配；碱基切除修复，切除突变碱基；核苷酸切除修复，修复被破坏DNA；DNA直接修复，修复嘧啶二聚体或甲基化DNA；易错修复，应急办法；SOS修复概念：
SOS修复是指DNA受到严重损伤、细胞处在危急状态时所诱导一种DNA修复方式，修复成果只是能维持基因组完整性，提高细胞生存率，但留下错误较多
25、转座子或转座元件：
基因组上不必借助于同源序列就可移动DNA片段
转座：
转座子转移过程
26、转座作用机制：
转座作用涉及到转座子复制，当一种拷贝插入基因组新位置，本来位置上仍可保存一种拷贝，因而转座作用并不是转座子由基因组一处转移到另一处简朴过程
27、转座重要过程：
在靶DNA上制造一种交错切口，转座子与突出单链末端相连接，填充缺口
28、两种不同类型转座：
复制型转座，转座子被复制，靶点插入一种新拷贝，本来位置上拷贝仍保存，涉及酶：
转座酶，作用于本来转座子末端；解离酶，作用于复制拷贝如TnA
非复制型转座，转座子作为一种物理实体直接从一种部位转移到另一种部位，供体分子留下一种断裂，也许被修复或降解，涉及酶：
只需要转座酶
29、转座作用遗传学效应：
转座引起插入突变，转座插入位置上浮现新基因，转座产生染色体畸变，转座引起生物进化
30、原核生物转座子类型：
插入序列，复合转座子，TnA转座子家族和可转移噬菌体
转座子构造特性：
转座子具备反向末端重复序列以及具备编码转座酶基因
插入序列：
IS是最简朴转座子，不具有任何宿主基因，它们是细菌染色体或质粒DNA正常构成某些，因其插入使靶点处基因失活而被发现
复合转座子：
复合转座子是一类带有某些抗药性基因（或其她宿主基因）转座子，其两翼往往是两个相似或高度同源IS序列。
TnA家族：
TnA转座作用两个过程被转座酶和解离酶完毕，其编码基由于tnpA和tnpR。
解离酶需要一种确切内部位点，是TnA家族特色，转座酶含量是转座作用限制因子
31、真核生物中转座子：
分为转座子和反转录转座子
转座子：
玉米中控制因子，分为自主性因子和非自主性因子；果蝇中转座子，如P转座子导致杂种不育
反转录转座子：
指通过RNA为中介，反转录成DNA后进行转座可动元件，有：
反转录病毒、RNA，整合宿主靶DNA；病毒超家族，有LTR，编码反转录或整合酶，可含内含子；非病毒超家族，无重复序列，不编码转座产物、无内含子
32、与DNA复制关于物质
原料：
四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）
模板：
以DNA两条链为模板链，合成子代DNA
引物：
DNA合成需要一段RNA链作为引物
引物合成酶（引起酶）：
此酶以DNA为模板合成一段RNA，这段RNA作为合成DNA引物，实质是以DNA为模板RNA聚合酶
DNA聚合酶:
以DNA为模板DNA合成酶，以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物，反映需要有模板指引，反映需要有3‘-OH存在，DNA链合成方向为5’到3‘
原核生物中DNA聚合酶（大肠杆菌）：
性质聚合酶Ⅰ聚合酶Ⅱ聚合酶Ⅲ
3'-5'外切活性+++
5'-3'外切活性+--
5'-3'聚合活性+中+很低+很高
新生链合成--+
聚合酶Ⅰ：
重要是对DNA损伤修复；以及在DNA复制时切除RNA引物并弥补其留下空隙
聚合酶Ⅱ：
修复紫外光引起DNA损伤
聚合酶Ⅲ：
DNA复制重要聚合酶，还具备3’-5’外切酶校对功能，提高DNA复制保真性
真核生物中DNA聚合酶：
αβγδε
定位细胞核细胞核线粒体细胞核细胞核
3’-5’
外切--+++
酶活性
5’-3’+++++
功能：
引物合成修复作用线粒体核DNA复制修复
DNA复制复制
DNA连接酶：
若双链DNA中一条链有切口，一端是3‘-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接，但是它不能将两条游离DNA单链连接起来，DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用
DNA拓扑异构酶：
拓扑异构酶І：
使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋，重要集中在活性转录区，同转录关于，例：
大肠杆菌中ε蛋白
拓扑异构酶Π：
该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子，同复制关于，例：
大肠杆菌中DNA旋转酶
DNA解螺旋酶/解链酶：
通过水解ATP获得能量来解开双链DNA，E.coli中rep蛋白就是解螺旋酶，尚有解螺旋酶I、II、III。
单链结合蛋白：
稳定已被解开DNA单链，制止复性和保护单链不被核酸酶降解
33、端粒复制特点：
真核生物线性染色体两个末端具备特殊构造，称为端粒，有许多成串短重复序列构成。
端粒功能为稳定染色体末端构造，防止染色体间末端连接，并可补偿滞后链5‘末端在消除RNA引物后导致空缺、端粒由端粒酶（核糖核蛋白复合物）加到DNA末端。
端粒酶事实上是一种逆转录酶，只是模板位于酶分子内部，端粒酶中RNA也许尚有别作用
三
1、转录：
指拷贝出一条与DNA链序列完全相似（T/U）RNA单链过程，是基因表达核心
2、转录基本过程：
无论是原核还是真核细胞，转录基本过程都涉及：
模板辨认：
全酶上σ因子辨认DNA模板上起始位点，使全酶结合在起始位点上形成全酶-DNA复合物，即聚合酶与启动子可逆性结合形成封闭复合物（closedcomplex）。
随着着DNA构象变化，封闭复合物变成开放复合物（opencomplex），聚合酶全酶所结合DNA序列中有一小段双链被解开。
开放复合物与最初两个NTP相结合并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键后即转变成涉及RNA聚合酶、DNA和新生RNA三元复合物。
转录起始：
转录开始后，σ因子及时从复合物上脱落，由核心酶催化RNA合成，RNA链上第一种核苷酸键产生
原核生物转录起始
转录起始由RNA聚合酶与DNA模板启动子结合。
启动子具备下列共同点：
在-10bp处有一段共有序列（consensussequence），富含AT，即–TATAAT-，系Pribnow等一方面发现，因而称为Pribnow盒（box），再往上游-35bp中心处又有一组保守共有序列，即-TTGACT-，结合过程可分为二个环节，一方面由σ因子辨认启动子–35区，全酶与该区结合，形成疏松复合物，此时DNA双链未解开，因而称为封闭型转录起始复合物，继而RNA聚合酶移向–10区及转录起始点，在–20区处DNA发生局部解链，形成12～17bp单链区，RNA聚合酶与DNA结合更紧密，形成开放型转录起始复合物。
以单链模板链为模板，RNA聚合酶上起始位点和延伸位点被相应NTP占据，聚合酶β亚基催化第一种磷酸二酯键生成，σ亚基从全酶解离，形成DNA-RNA聚合酶（核心酶）结合在一起起始延伸复合物。
真核生物转录起始
转录因子与RNA聚合酶一起共同参加转录起始过程。
相应于RNA聚合酶I、Ⅱ、ⅢTF，分别称为TFI、TFⅡ、TFⅢ。
TFⅡD是当前已知唯一能结合TATA盒蛋白质，在转录起始中作为第一步，指引RNA聚合酶Ⅱ进入作用位点。
真核生物RNA聚合酶不能直接与DNA结合，在转录
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