USP61非无菌产品的微生物检查微生物的计数检查.docx

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USP61非无菌产品的微生物检查微生物的计数检查

USP61非无菌产品的微生物检查：

微生物的计数检查

＜61＞　微生物试验

（61）非无菌产品的微生物检查：

微生物计数试验

序言

后面描述的试验对可在好氧条件下生长的嗜温细菌和真菌进行定量计数。

设计此试验主要是为了确定一种原料药和制剂的微生物质量是否符合已建立的质量标准。

作此用途时，遵循下面给出的说明，包括采样编号，并按照下面的说明判定结果。

此方法不适用于以活的微生物作为活性成份的产品。

也可以使用其它的微生物规程，包括自动化方法，只要它们和已经证明的药典方法等效。

通用规程

在设计好的条件下进行检定，避免供试品受到外部微生物的污染。

避免污染所采取的预防措施必须不影响试验中出现的任何微生物。

如果供试品中含有抑菌活性，那么应当尽可能的将其去除或中和。

如果用灭活剂来达到此目的，那么必须证明其有效性以及对微生物不具有毒性。

如果表面活性剂用于样品制备，那么必须证明其对微生物的无毒性及与所用灭活剂的相容性。

计数方法

如下所示，使用膜过滤法或平板计数法其中一种。

通常微生物计数用最大几率计数（MPN）法是最不精确的；但是，对生物负荷极低的特定产品组，它可能是最为适宜的方法。

选择方法取决于这些因素，如产品性质及要求的微生物限度。

选择的方法必须允许对足量的样品量进行试验，从而判断是否符合质量标准。

必须建立所选方法的适用性。

促生长试验和计数方法的适用性

一般考虑

必须建立实验检出供试品中所含微生物的能力。

如果试验操作或产品方面引入了可能影响试验结果的变更，则必须确认适用性。

试验菌株的制备

使用标准化的稳定试验菌悬液，或者按下述说明制备。

使用种子批培养保存技术（生产菌种系统）以便从原始主种子批中取出用于接种的活菌传代不超过5次。

每种细菌和真菌试验菌株的生长情况在表1中分别详细说明。

使用pH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液或pH7.2的磷酸盐缓冲液制备试验悬液；为了悬浮黑曲霉孢子，可加入0.05%的聚山梨醇酯80（吐温80）。

在2小时内使用悬液，如果在2°到8°保存，可在24小时内使用。

制备并稀释黑曲霉或枯草芽孢杆菌的营养细胞新鲜悬液的替代选择，是制造一个稳定的孢子悬液，然后将适量的孢子悬液用于试验接种。

稳定的孢子悬液可在2°到8°保存，保存时间是一个经过验证的时间。

表1.试验微生微的制备和使用

Microorganism

微生物

Preparationof

TestStrain

试验菌株的制备

GrowthPromotion

促生长

SuitabilityofCountingMethodinthe

PresenceofProduct

在使用产品的情况下，计数方法的适用性

TotalAerobicMicrobialCount

好氧菌总数

TotalYeastsand

MoldsCount

酵母和霉菌总数

TotalAerobicMicrobialCount

好氧菌总数

TotalYeastsand

MoldsCount

酵母和霉菌总数

Staphylococcusaureus

suchasATCC6538,

NCIMB9518,CIP

4.83,orNBRC13276

金黄色葡萄球菌，如ATCC6538,

NCIMB9518,CIP

4.83，或NBRC13276

Soybean-CaseinDigestAgarorSoybean-CaseinDigestBroth

30°-35°

18-24hours

大豆酪蛋白胨消化琼脂或大豆酪蛋白胨消化肉汤

30°-35°

18-24小时

Soybean-Casein

DigestAgarand

Soybean-Casein

DigestBroth

≤100cfu

30°-35°

≤3days

大豆酪蛋白胨消化琼脂和大豆酪蛋白胨消化肉汤

≤100cfu

30°-35°

≤3天

Soybean-Casein

DigestAgar/MPN

Soybean-Casein

DigestBroth

≤100cfu

30°-35°

≤3days

大豆酪蛋白胨消化琼脂/MPN大豆酪蛋白胨消化肉汤

≤100cfu

30°-35°

≤3天

Pseudomonas

Aeruginosa

suchasATCC9027,

NCIMB8626,CIP

82.118,orNBRC

13275

铜绿假单孢菌，如ATCC9027,

NCIMB8626,CIP

82.118,或NBRC

13275

Soybean-CaseinDigestAgarorSoybean-CaseinDigestBroth

30°-35°

18-24hours

大豆酪蛋白胨消化琼脂或大豆酪蛋白胨消化肉汤

30°-35°

18-24小时

Soybean-Casein

DigestAgarand

Soybean-Casein

DigestBroth

≤100cfu

30°-35°

≤3days

大豆酪蛋白胨消化琼脂和大豆酪蛋白胨消化肉汤

≤100cfu

30°-35°

≤3天

Soybean-Casein

DigestAgar/MPN

Soybean-Casein

DigestBroth

≤100cfu

30°-35°

≤3days

大豆酪蛋白胨消化琼脂/MPN大豆酪蛋白胨消化肉汤

≤100cfu

30°-35°

≤3天

Bacillussubtilis

suchasATCC6633,

NCIMB8054,CIP

52.62,orNBRC3134

枯草芽孢杆菌，如ATCC6633,

NCIMB8054,CIP

52.62,或NBRC3134

Soybean-CaseinDigest

AgarorSoybean-

CaseinDigestBroth

30°-35°

18-24hours

大豆酪蛋白胨消化琼脂或大豆酪蛋白胨消化肉汤

30°-35°

18-24小时

Soybean-Casein

DigestAgarand

Soybean-Casein

DigestBroth

≤100cfu

30°-35°

≤3days

大豆酪蛋白胨消化琼脂和大豆酪蛋白胨消化肉汤

≤100cfu

30°-35°

≤3天

Soybean-Casein

DigestAgar/MPN

Soybean-Casein

DigestBroth

≤100cfu

30°-35°

<3days

大豆酪蛋白胨消化琼脂/MPN大豆酪蛋白胨消化肉汤

≤100cfu

30°-35°

≤3天

Candidaalbicans

suchasATCC10231,

NCPF3179,IP48.72,

orNBRC1594

白色念珠菌，如ATCC10231,

NCPF3179,IP48.72,

或NBRC1594

SabouraudDextrose

AgarorSabouraud

DextroseBroth

20°-25°

2-3days

沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤

20°-25°

2-3天

Soybean-Casein

DigestAgar

≤100cfu

30°-35°

≤5days

大豆酪蛋白胨消化琼脂

≤100cfu

30°-35°

≤5天

Sabouraud

DextroseAgar

≤100cfu

20°-25°

≤5days

沙氏葡萄糖琼脂

20°-25°

≤5天

Soybean-Casein

DigestAgar

≤100cfu

30°-35°

≤5days

MPN:

notapplicable

大豆酪蛋白胨消化琼脂

≤100cfu

30°-35°

≤5天

MPN：

不可用

SabouraudDextroseAgar

≤100cfu

20°-25°

≤5days

沙氏葡萄糖琼脂

20°-25°

≤5天

Aspergillusniger

suchasATCC16404,

IMI149007,IP

1431.83,orNBRC

9455

黑曲霉，如ATCC16404,

IMI149007,IP

1431.83,或NBRC

9455

SabouraudDextrose

AgarorPotato-DextroseAgar20°-25°

5-7days,oruntilgood

sporulationisachieved

沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯-葡萄糖琼脂

20°-25°

5-7天，或直至形成良好的孢子

Soybean-Casein

DigestAgar

≤100cfu

30°-35°

≤5days

大豆酪蛋白胨消化琼脂

≤100cfu

30°-35°

≤5天

Sabouraud

DextroseAgar

≤100cfu

20°-25°

≤5days

沙氏葡萄糖琼脂

20°-25°

≤5天

Soybean-Casein

DigestAgar

≤100cfu

30°-35°

<5days

MPN:

notapplicable

大豆酪蛋白胨消化琼脂

≤100cfu

30°-35°

≤5天

MPN：

不可用

SabouraudDextroseAgar

≤100cfu

20°-25°

≤5days

沙氏葡萄糖琼脂

20°-25°

≤5天

阴性对照

为了验证试验条件，用所选稀释液代替试验样品作为阴性对照。

其中不得有微生物生长。

培养基的促生长

对每批现成的培养基及每批由脱水培养基或描述成分制备的培养基进行试验。

将表1中所列出的少量（不超过100cfu）微生物接种到大豆-酪蛋白消化肉汤和大豆-酪蛋白琼脂份/平板上，每次使用单独的培养基份/平板。

将表1中说明的少量（不超过100cfu）微生物接种到沙氏葡萄糖琼脂平板上，每次用一个单独的培养基平板。

按照表1中描述的条件进行培养。

对于固体培养基，获得的生长值与标准化的接种物所计算的值的差值不得超过2。

对于新配制的接种物，其微生物生长情况与过去使用原来经过试验并获批准的培养基得到的结果相当。

如果可见明显微生物生长与早先用过去试验过并获批准的培养基得到的结果相当，则液体培养基适合。

产品存在情况下计数方法的适用性

样品制备

制备样品的方法依据于供试品的物理特性。

如果证实下述规程无一令人满意，那么必须建立一个适当的可供选择的规程。

水溶性产品—将供试品溶解或稀释（通常1比10倍制备稀释液）于pH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液或pH7.2的磷酸盐缓冲液或大豆-酪蛋白消化肉汤中。

如果有必要，将pH值调整到6到8。

必要时，用同样的稀释液进一步稀释。

不溶于水的非脂肪产品—将供试品（通常1比10倍制备稀释液）悬浮于pH7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液或pH7.2的磷酸盐缓冲液或大豆-酪蛋白消化肉汤中。

可加入表面活性剂，如1g/L的聚山梨醇酯80来促进溶湿差的物质悬浮。

如有必要，将pH值调整到6到8。

必要时，用同样的稀释