MSC检定规程模板版药典.docx
《MSC检定规程模板版药典.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《MSC检定规程模板版药典.docx(5页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
MSC检定规程模板版药典
MSC检定规程模板2015版药典
委托检验
检验项目和规程
检品名称:
委托单位名称(公章):
委托单位地址:
联系人和联系电话:
日期:
第5代细胞
1鉴别试验
1.1细胞形态
检定标准:
在倒置显微镜下观察,细胞应贴壁生长,呈长梭形。
1.2STR图谱鉴别
检定标准:
应表达人的16个等位基因,为单一细胞来源。
1.3流式细胞仪检测细胞表面标记物
按照BD公司的人间充质干细胞分析试剂盒(BD货号562245)说明进行。
检定标准:
CD73、CD90、CD105≥95%;CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR≤2%。
1.4种属间细胞污染检查(PCR法)
检定标准:
应为人源细胞,无种属间交叉污染。
1.5染色体核型分析
检定标准:
参考正常中国人体细胞的G显带带型标准,染色体数量应为46XX或者46XY,染色体结构应无缺失、重复、倒位、易位。
2细菌、真菌检查
细胞接种于细胞培养瓶中,参照《中华人民共和国药典》2015年版第三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程进行,细胞持续培养2周逐日镜检,细胞形态正常,无病变,血吸附试验阴性。
5.2体外不同指示细胞接种培养法检测病毒因子
细胞接种于细胞培养瓶中,按照体外不同指示细胞接种培养法(中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程)进行。
细胞形态正常,血吸附试验阴性,血凝试验阴性。
5.3动物体内接种法
5.3.1乳鼠脑内及腹腔接种
取细胞悬液注射于出生24小时内的乳鼠腹腔和脑内,按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,21天后乳鼠应至少有80%健存。
5.3.2小鼠脑内及腹腔接种
取细胞悬液注射于小鼠腹腔和脑内,按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,21天后小鼠应至少有80%健存。
5.3.3豚鼠腹腔接种
取细胞悬液注射于豚鼠腹腔,按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,42天后豚鼠应健存,解剖无结核病变。
5.4鸡胚接种检查
取细胞悬液注射于5~7日鸡胚卵黄囊,按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应至少80%存活。
取细胞悬液注射于9~11日龄鸡胚尿囊腔,按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应至少80%存活,尿囊液血凝试验应为阴性。
5.5特殊人源病毒检查
5.5.1HIV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.5.2HBV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.5.3HCV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.5.4HCMV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.5.5EBV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.5.6HPV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.5.7HHV检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.6牛源病毒检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.7猪细小病毒检查
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
5.8逆转录病毒检查
参照中国药典2015版三部附录逆转录酶活性检查法,应为阴性。
6免疫学反应检测
6.1淋巴细胞增殖抑制试验
按照淋巴细胞增殖抑制试验法检测,应具有抑制淋巴细胞增殖的能力。
6.2特定淋巴细胞亚群检测
按照特定淋巴细胞亚群检测法检测淋巴细胞Th1\Th17增殖抑制率和Treg增殖促进率。
6.3淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验
按照淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验法检测,应具有抑制淋巴细胞分泌TNF-α能力。
7诱导分化能力检查
7.1成骨分化
细胞在体外成骨诱导培养后,茜素红S染色分析成骨细胞分化能力。
7.2成脂分化
细胞在体外成脂诱导培养后,油红O染色检测细胞内红色脂肪滴。
8细胞活性检测
8.1细胞数和细胞存活率
血细胞计数板对细胞计数,台盼蓝染色法检测细胞平均存活率应不低于90%
8.2细胞生长曲线
用细胞计数方法绘制细胞生长曲线来判断细胞活力。
8.3细胞周期测定
用流式细胞术进行细胞周期测定。
9成瘤性检测
9.1裸鼠体内接种试验
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应为阴性。
9.2软琼脂克隆形成试验
按照中国药典2015版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求,应无克隆形成。
9.3端粒酶活性检测
按照端粒酶活性检测法检测。