细菌霉菌及酵母菌计数方法验证.docx
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细菌霉菌及酵母菌计数方法验证
有限公司GMP管理文件
题目
细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
制定
审核
批准
制定日期
审核日期
批准日期
颁发部门
GMP办
颁发数量
生效日期
分发单位
企管部、质保部、生产部、工程部
文件编码
共14页第1页
一、目的：
当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。
二、适用范围：
细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。
三、责任者：
质量标准分析方法验证小组。
四、正文：
1、验证申请
2、验证立项申请表
3、验证方案
4、验证方案的批复
5、验证报告
6、验证报告的审批
7、验证证书
文件编码
第2页
细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请
细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证申请。
我公司细菌、霉菌及酵母菌计数方法严格按照《中华人民共和国兽药典》2005年版质量标准分析方法验证指导原则进行，今拟对细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证。
请予以批准！
附：
细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证小组成员名单
组长：
成员：
申报单位：
质量标准分析方法验证小组
申报日期：
年月日
文件编码
第3页
验证申请批复
立项部门
申请日期
立项题目
要求完成日期
验证原因
类别
验证要求及目的
立项部门负责人签名：
主管部门意见
签名：
年月日
验证部门意见
签名：
年月日
总经理意见
签名：
年月日
指定编制验证方案的部门：
编制验证方案要求：
验证完成要求及日期：
总经理签名：
年月日
备注：
文件编码
第4页
细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案
一、概述：
1、名称：
微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。
2、目的：
当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。
3、验证判断标准：
《中华人民共和国兽药典》2005年版附录XIJ
4、验证人员：
质保部：
负责对验证结果进行评价。
化验室：
负责验证情况的检测和监督。
总经理：
负责对验证结果进行评价。
5、验证日期：
二、验证
1、验证依据：
《中华人民共和国兽药典》2005年版附录XIJ微生物限度检查法。
按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。
2、内容：
（1）菌液所用的菌株传代次数为3代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数60cfu的孢子悬液。
（2）验证方法验证试验进行了3次独立的平行试验。
A、试验组供试液（Ⅰ）纯化水1ml（Ⅱ）药品名称（1：
100）10g，取供试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入60cfu试验菌。
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第5页
B、菌液组测定所加试验菌数。
C、供试品对照组取相当于供试品1g（1ml），按菌落数据计数方法测定供试品本底菌数。
D、稀释剂对照组用相应稀释液0.9%无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液60cfu，按薄膜过滤法制备计菌落数。
（Ⅰ）纯化水
项目
菌株
试验组A
菌液组B
供试品对照组C
稀释剂对照组D
D组菌回收率%
D/B
C组菌回收率%
（A-C）/B
大肠
埃希菌
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
≥70
≥70
平均：
金黄色
葡萄球菌
≥70
≥70
平均：
枯草芽孢杆菌
≥70
≥70
平均：
白色念珠菌
≥70
≥70
平均：
黑曲霉
≥70
≥70
平均：
文件编码
第6页
（Ⅱ）产品名称
项目
菌株
试验组A
菌液组B
供试品对照组C
稀释剂对照组D
D组菌回收率%
D/B
C组菌回收率%
（A-C）/B
大肠
埃希菌
≥70
≥70
平均：
金黄色
葡萄球菌
≥70
≥70
平均：
枯草芽孢杆菌
≥70
≥70
平均：
白色念珠菌
≥70
≥70
平均：
黑曲霉
≥70
≥70
平均：
以上试验同时取试验用稀释液0.9%无菌氯化钠1ml，依薄膜过滤法操作，作为阴性对照试验，均应无菌生长。
（3）验证方案的实施情况，及偏差情况分析。
对于细菌霉菌及酵母菌计数方法验证方案应进行严格细致精密认真的实施，根据统计结果，数据基本上应在允许偏差范围。
（4）培训：
所有参与的人员在开始验证前应作充分的培训。
（5）结果判断
由上表可知，在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率，（稀释剂对
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第7页
照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%，试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数
的百分率）应均大于70%，则按该验证供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌霉菌及酵母菌数。
（6）再验证
当建立药品的微生物限度检查法时，进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。
若药品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。
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第8页
验证方案批复
验证方案名称
验证方案起讫日期
验
证
工
作
负责验证部门
人员
参加部门
人员
参加部门
人员
参加部门
人员
检验部门
人员
验证方案概要
结论
验证小组负责人年月日
验证小组成员会签
生产使用部门意见
负责人年月日
验证管理部门意见
负责人年月日
总经理意见
年月日
备注
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细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证报告
一、概述：
1、名称：
微生物限度检查法细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证报告。
2、目的：
当建立微生物限度检查法时，应进行细菌霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌霉菌及酵母菌数的测定。
3、验证判断标准：
《中华人民共和国兽药典》2005年版附录XIJ
4、验证人员：
质保部：
负责对验证结果进行评价。
化验室：
负责验证情况的检测和监督。
总经理：
负责对验证结果进行评价。
5、验证日期：
二、验证
1、验证依据：
《中华人民共和国兽药典》2005年版附录XIJ微生物限度检查法。
按供试液的制备和细菌霉菌及酵母菌计数所规定的薄膜过滤法及其有关要求进行。
2、内容：
（1）菌液所用的菌株传代次数为3代，接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，培养24小时，
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，培养48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为60cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌沙布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数60cfu的孢子悬液。
（2）验证方法验证试验进行了3次独立的平行试验。
A试验组供试液（Ⅰ）纯化水1ml（Ⅱ）药品名称（1：
100）10g，取供
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试液1ml过滤冲洗，在最后一次冲洗液中加入60cfu试验菌。
B菌液组测定所加试验菌数。
C供试品对照组取相当于供试品1g（1ml），按菌落数据计数方法测定供试品本底菌数。
D稀释剂对照组用相应稀释液0.9%无菌氯化钠，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液60cfu，按薄膜过滤法制备计菌落数。
项目
菌株
试验组A
菌液组B
供试品对照组C
稀释剂对照组D
D组菌回收率%
D/B
C组菌回收率%
（A-C）/B
大肠
埃希菌
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
83.33
73.33
96
96
97
60
60
60
52
52
51
50
51
50
平均96
60
52
50
金黄色
葡萄球菌
97
97
96
60
60
60
53
54
54
52
52
52
80.67
71.67
平均97
60
54
52
枯草芽孢杆菌
96
96
96
60
60
60
51
52
52
50
50
50
83.33
73.33
平均96
60
52
50
白色念珠菌
95
96
95
60
60
60
52
52
52
51
52
52
86.67
71.67
平均95
60
52
52
黑曲霉
96
96
96
60
60
60
53
53
52
51
50
51
85.00
71.67
平均96
60
53
51
（Ⅰ）纯化水
文件编码
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项目
菌株
试验组A
菌液组B
供试品对照组C
稀释剂对照组D
D组菌回收率%
D/B
C组菌回收率%
（A-C）/B
大肠
埃希菌
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
86.67
85.00
89
89
88
60
60
60
38
38
38
52
51
52
平均89
60
38
52
金黄色
葡萄球菌
91
90
91
60
60
60
40
41
41
50
50
50
83.33
83.33
平均91
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