临床检验技师微生物检验讲义第三十章细菌对药物的敏感试验9941122.docx
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临床检验技师微生物检验讲义第三十章细菌对药物的敏感试验9941122
第三十章细菌对药物的敏感试验
本章内容
一、药敏试验中抗菌药物的选用
二、细菌对药物的敏感试验扩散法（K-B法）
稀释法
杀菌试验
体外联合药物敏感试验
厌氧菌、结核分枝杆菌及酵母样真菌的体外抗菌药物敏感试验体内抗菌药物的活性与浓度测定
三、细菌的耐药性和产生机制
细菌耐药的机制
细菌耐药性表型的检测
药敏试验中抗菌药物的选用
原则：
•按临床需要选用抗菌药物的种类•同类抗菌药物仅选一个作为代表
•根据测定细菌的种属和感染部位进行选药
1.青霉素类：
青霉素与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制细菌细胞壁合成。
3-内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌
作用于不产青霉素酶的革兰阳性球菌、革兰阴性球菌、庆氧菌；产青霉素酶的葡萄球菌；大部分大肠
埃希菌、奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等革兰阴性杆菌；产
2.头抱菌素类：
头抱菌素与青霉素结合蛋白结合，发挥抑菌和杀菌效果。
随看代次增加对于革兰阳性球菌的抗菌效果减弱，对革兰阴性杆菌的作用增强。
第四代头抱菌素对阳
性球菌与阴性杆菌作用几乎相同，并具有抗假单胞菌的作用。
3.其他3-内酰胺类
（1）单环类：
氨曲南等。
对G—菌作用强，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌。
对G十和庆氧菌无作用。
（2）拉氧头抱类：
对G+菌有较好的抗菌活性，对庆氧菌有高度抗菌活性，但对非发酵菌无效。
3）碳青霉素类：
除了嗜麦芽窄食单胞菌、耐甲氧西林葡萄球菌、尿肠球菌和某些脆弱类杆菌耐药外，
对几乎所用的由质粒或染色体介导的3内酰胺稳定。
4）3-内酰胺酶抑制剂的复合制剂：
与3-内酰胺类抗菌药物联用能增强后者的抗菌活性，如克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦。
4.氨基苷类：
吸附作用造成膜的损伤；核糖体30S小亚基。
氨基苷类抗菌药物对需氧革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，对阳性球菌有一定的活性。
5.喹诺酮类：
通过外膜空蛋白和磷脂渗透进入细菌细胞；作用于DNA
旋转酶，干扰细菌DNA合成。
第二代喹诺酮类对革兰阴性和阳性细菌均有作用；
第三代喹诺酮类对革兰阳性菌作用高于第二代的4〜8倍，对庆氧菌亦有作用。
6.大环内酯类：
细菌核糖体50S大亚基；肺部浓度较血清浓度高；新一代具有免疫调节功能。
对流感嗜血杆菌、军团菌、支原体、衣原体等具有强大的抗菌作用。
+
-+
—
G球菌青霉素头抱菌素
G球菌G杆菌青霉素
G杆菌^
青霉素
头抱菌素
厌氧菌青霉素
四体
真菌
两性霉素
B
碳青霉素
拉氧头抱
拉氧头抱
拉氧头抱
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5—氟胞嘧啶
吡咯类
细菌对药物的敏感试验
细菌对抗菌药物的敏感试验（药敏试验）是指在体夕卜测定药物抑制或杀死纟田菌能丿J的试验。
要用于：
1选择效果最佳的药物治疗；
2了解耐药性变迁；
3某些细菌的鉴定；
4流行耐药菌的防治。
扩散法（K-B法）
纸片琼脂扩散法：
半定量；标准方法。
•原理
将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部—位，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）
呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
•方法
1.培养基：
水解酪蛋白（Mueller-Hinton,M-H）琼脂；链球菌
—属等细菌须在M-H琼脂中加入5%的脱
纤维羊血。
嗜血杆菌属细菌需补充1%血红蛋白（含V因子）和1%X因子复合物。
2.抗菌药物纸片：
专用药敏纸片；纸片应贴得均匀，各纸片中心距离不小于24mm,纸片距平板
内缘应
M-H琼脂
大于15mm。
3.菌液：
以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液，并在管壁上拧压一次，均匀涂布接种于表面，涂
布三次。
4.培养平板室温放置15min再倒放于35C培养16〜18h后阅读
结果。
•结果判读：
肉汤
琼脂稀
稀释法：
定量
•原理
根据稀释培养基的不同，分为肉汤稀释法和琼脂稀释法。
释法是细菌药敏试验苗金标准。
稀释法是以水解酪蛋白（M-H）液体培养基将抗菌药作不同浓度的稀释，然后接种待测菌。
稀释法所测得的某抗菌药物抑制待测菌生长的最低浓度为最低（或最小）
抑菌浓度（MIC），稀释法也
可测定最小杀菌浓度（MBC）。
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•方法
1.抗菌药物原液的配制：
配制各种抗菌药物原液的溶剂。
2.培养基：
一般细菌采用M-H液体培养基。
3.排列试管10〜15支，除第一支外，每管加入M-H液体培养基1ml;再加入浓度梯度的抗菌药物。
另设培养液对照，检测菌生长对照和质控菌生长对照管各一支。
4.将已校正浓度的待测菌悬液依次加入含药管内，置35C培养后观察结果。
•结果判读：
凡无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度即为该待测菌最低抑菌浓度（MIC）。
MIC测定法的实验结果
从左起第四管为药物最低浓度而无细菌生长，即待检菌的MIC。
杀菌试验
定量评价抗菌药物杀菌效力的试验，主要包括最低杀菌浓度（MBC）试验和杀菌曲线法。
1.最低杀菌浓度：
某抗菌药物能杀灭99.9%
以上的测试菌量的最低药物浓度。
测定方法就是稀释法MIC
测定的基础上通过再转种、再孵育，最终测得某种抗菌药物对被测菌的MBC。
2.时间-杀菌曲线：
评价一种抗菌药物对测试菌的杀菌速率，以及两种或两种以上抗菌药物对测试菌的
联合杀菌活性。
测定MIC的肉汤稀释法相同，设定0h、4h、8h、24h
等不同培养时间的试验管，将各时间
药
和B药对被测菌的
MIC
菌曲
方法又分直接
和
间接
点测得的平均菌落计数在半对数坐标纸上绘制杀菌曲线。
iai
SIS
释法和琼脂纸片洗脱法
琼脂纸片
性与浓度
（2）高压液相层析法。
3）均相免疫测定法。
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（4）放射免疫测定法。
MIC，以及MBC的
•活性测定：
有血清抑菌力和杀菌力测定，其原理与肉汤稀释法测
原理类同。
细菌耐药性和产生机制
细菌耐药的机制•产炉内酰胺酶
•产生钝化酶
•青霉素结合蛋白的改变
•药敏作用靶位的改变
•抗菌药物渗透障碍
（1）外膜蛋白减少
（2）药物外排作用细菌耐药性表型的检测•超广谱3-内酰胺酶（ESBLs）
常见于肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌。
可以水解青霉素一、代头
抱菌素和氨曲南，但头霉菌素和碳青霉烯类不受影响。
K-B法筛查
所有产ESBLs的菌株应当报告为耐所有青霉素类、头抱菌素类及氨曲南。
•葡萄球菌属
MRS对甲氧西林的耐药是异常PBPs所致。
呈现多重耐药性。
琼脂稀释法：
含4%NaCl,6^g/ml苯唑西林的MH琼脂。
头抱西丁纸片法或稀释法。
体外显示活性但临床无效，因此不应报告敏感。
MRS对头抱菌素和复合性3
•肠球菌属Utl
5?
药性的肠球菌（HLAR）谄测定：
用高浓度庆大霉素或链霉素进行耐
对氨基糖苷类呈
药筛选（纸片扩散法、稀释法）
耐万古霉素的肠球菌（
V*B，获然耐药为VanC型。
（琼脂筛选
法：
脑心浸液琼
对于肠球菌属，
示活
性，但临床无效，不应报告敏感。
•肺炎链球菌
对〕
I口
VRE）获得性耐药分两种表型，VanA和
艮琼脂+万古霉素6^g/ml）。
''一，头抱菌素、氨基糖苷类
由于PBP的改变
内酰胺类的汁坐西林的纸片筛选法。
寸药除外）、克林霉素和磺胺类可在体外显
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下列哪项是预防耐药菌株产生和扩散的主要措施
A.大剂量使用抗生素
B.少量多次使用抗生素
C.使用广谱抗生素
D.多种抗生素长期联合使用
E.根据药敏试验合理使用抗生素『正确答案』E
『答案解析』根据药敏试验合理使用抗生素是预防耐药菌株产生和扩散的主要措施。
MIC是指
A.最低抑菌浓度
B.最低杀菌浓度
C.敏感
D.抑菌圈直径
E.最大抑菌浓度
『正确答案』A
『答案解析』稀释法所测得的某抗菌药物抑制待测菌生长的最低浓度为最低（或最小）抑菌浓
度（MIC），
稀释法也可测定最小杀菌浓度（MBC）。
患者男，因尿路刺激症状到门诊就诊。
尿常规：
WBC（+++）。
尿培养分离到一株大肠
埃希菌。
进行手工法药敏试验，通过测量抑菌环直径进行判断结果，此方法称为
A.琼脂稀释法
B.肉汤稀释法
C.纸片扩散法
D.微量肉汤稀释法
E.E-test法
『正确答案』C
『答案解析』纸片扩散法通过测量抑菌环直径进行判断结果。
患者男，73岁，在加强医疗科（ICU）住院时发生肺炎，临床微生物学检查痰标本有大量肺炎克雷伯菌，超广谱3-内酰胺酶阳性，可选择的治疗药物为
A.头孢他啶
B.头抱曲松
C.头抱噻圬
D.哌拉西林
E.亚胺培南
『正确答案』E
『答案解析』肺炎克雷伯菌对青霉素、舒普深、三代头抱及氨曲南耐药，对亚胺培南及四代头抱菌素敏感。
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