13 LabAlliace高效液相色谱仪验证方案.docx

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13LabAlliace高效液相色谱仪验证方案

类别：

验证方案编号：

部门：

质量管理部页码：

共页，第页

LabAlliace高效液相色谱仪再确认方案

版次：

□新订□替代：

起草人

部门

日期

年月日

审阅会签

（验证领导小组成员）

部门

日期

年月日

年月日

年月日

年月日

年月日

批准人

部门

日期

年月日

实施日期：

年月日

授权：

现授权下列部门拥有并执行本方案（复印数：

）

复印序列号：

目录

1、验证概述

1、仪器概述

2、验证目的

二、验证范围

三、验证时间及进度安排

四、验证小组成员及职责

五、确认内容

1、验证人员培训

2、验证文件准备

3、验证用仪器仪表校准的确认

4、运行确认

5、性能确认

六、确认过程中的变更与偏差处理

七、再确认周期

八、评价与建议

九、验证合格证

一、概述

1、仪器概述

1.1仪器简介：

LabAlliace高效液相色谱仪是我公司于2004年自美国科学系统公司购入的，主要用于原料和制剂药品的鉴别、检查和含量测定的仪器。

为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行确认。

本方案规定了LabAlliace高效液相色谱仪确认方案及接受标准。

1.2仪器组成：

本设备主要由由LaballianceSerialIII高压二元泵、Model500紫外检测器、7725i手动进样器、Laballiance色谱工作站组成。

1.3仪器原理:

本仪器利用采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱中进行分离测定，注入的供试品由流动相带入柱内。

各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。

1.4主要参数有要规格和技术参数：

名称

技术参数及规格

名称

技术参数及规格

泵类型

双柱塞串联式恒流泵

光路系统

双光路凹面全息光栅单色仪

流量范围

0.01~20ml/min

波长范围

190-800nm

流量准确度

≤±5％

波长精确度

±1.0nm

流量精确度

RSD≤0.5％

噪音：

1×10-5AU

漂移：

3×10-4AU/h

泵工作压力

0~6000Psi

1.3设备安装地点：

液相室

1.4设备型号：

Laballiance，设备编码：

032560100

2、验证目的

通过对设备运行和性能方面等一系列确认，提供足够的数据和文件依据证明按照操作规程对高效液相色谱仪实施使用后，以证明LabAlliace高效液相色谱仪运行的可靠性、主要运行参数的稳定性及结果的重现性等各项性能指标符合设计要求，其设备性能依旧能达到日常测试工作的需要。

二．验证范围

本方案适用于LabAlliace高效液相色谱仪的再确认。

三.验证时间及验证进度安排

验证小组提出完整的验证计划，经批准后实施，整个验证活动分四个阶段完成。

验证时间为2014年2月1日至2014年5月10日，具体安排如下：

2014年02月01-28日

验证方案起草、验证准备阶段

2013年03月01-31日

验证方案会签、批准阶段

2012年04月01-30日

验证实施阶段

2012年05月01-10日

总结、出报告阶段

四、验证小组成员及职责：

1验证领导小组职责

1.1负责验证管理的日常工作及公司内验证工作总的调度、协调及总结工作；

1.2负责验证任务的下达及验证小组的确定；

1.3负责验证计划和验证方案审核和批准工作；

1.4负责验证报告的评价工作；

1.5负责验证周期的确定工作；

1.6负责发放验证证书；

1.7验证领导小组成员

质量负责人、QC主管、QA主管；

2、化验室职责

2.1QC主管负责验证方案起草，并对批准后的验证方案组织实施；参加验证方案的会审、会签；

2.2QC负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐；

2.3QC负责总结、写出验证报告；

2.4QC负责验证实施过程中的检测，并出具检测报告；

3验证小组职责

3.1负责验证方案起草，并对批准后的验证方案组织实施；

3.2负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐；

3.3负责总结、写出验证报告；

3.4验证小组成员

小组职务

姓名

所在部门

职务

组长

质量管理部

质量负责人

组员

质量管理部

QA主管

组员

化验室

QC主管

组员

化验室

精密仪器检验员

组员

化验室

精密仪器检验员

组员

化验室

精密仪器检验员

5、确认内容：

1.人员的确认

1.1.目的：

确定所有在执行本方案的人员的资格。

1.2.程序：

列出和确定所有在执行本方案的人员（姓名、签名和部门）。

1.3.可接受标准：

所有在执行本方案的人员（姓名、签名和部门）已标识。

1.4.确认报告：

填写“表1”人员的确认。

2.验证所需文件的确认

2.1.目的：

核实用于该项验证的所有文件及操作规程是可用的。

2.2.程序：

核实在所有文件是可用的，并记录标题。

2.3.可接受标准：

所有必需的文件必须是可用的和经过批准的。

2.4.确认报告：

填写“表2”文件的确认。

3.验证用仪器仪表校准的确认

3.1目的：

确认验证所需仪器、仪表，且经过校准。

3.2程序：

列出仪器、仪表清单（生产厂家、型号和任何可用的信息）。

收集所有的仪表技术表并附在仪表清单中。

确认仪表已经得到校准，并在它们的校准有效期内，且已经贴上了有关校准信息的标签（标识号、校准日期、预计校准日期）。

3.3可接受标准：

仪器仪表清单与实际相一致。

所有的仪表技术表是可用的并附在仪表清单中。

所有仪表已经得到校准，并在它们的校准有效期内，且已经贴上了有关校准信息的标签（标识号、校准日期、预计校准日期）。

在相关数据表中已指明仪表的精度、正确度和量程。

所有参考文件已附在本方案中。

3.4确认报告：

填写“表3”仪表清单的检查和校准核实。

4、运行确认

4.1目的：

确认LabAlliace高效液相色谱仪各部分功能运行正常。

4.2.程序：

按LabAlliace高效液相色谱仪使用、维护保养、清洁标准操作规程进行操作，对下列项目进行检查。

4.2.1.检查仪器自检过程正常并能够正常进入开机界面。

4.2.2.进入操作界面后检查仪器各按键功能正常，各种转换功能是否正常。

4.2.3.检查系统设置功能，操作人员通过界面操作对仪器的工作参数进行设定，确认其功能正常。

4.2.4.检查仪器的正常退出功能，操作人员通过界面操作，退出仪器操作系统对仪器正常退出关机功能进行确认。

4.3.可接受标准：

4.3.1.仪器开机后自检功能正常，并能够正常进入工作界面，符合设计要求。

4.3.2.进入操作界面后检查仪器各按键功能正常，功能正常，符合设计要求。

4.3.3.操作人员通过界面操作能够对仪器的工作参数进行正常设定。

4.3.4.操作人员通过界面操作，能够正常退出仪器操作系统，并正常关机。

4.4.确认报告：

填写“表4”运行检查的确认。

5、性能确认

5.1、泵的耐压测试

5.1.1.目的：

确认泵管路耐压符合设计要求。

5.1.2程序

将仪器各部分连接好，以甲醇为流动相，流量为1ml/min，设定过压保护为5400Psi，启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。

卸下色谱柱，堵住泵的出口端，设置5400Psi，压力超过设定保护值自动停止工作，保持5min无泄漏。

连续测定三次。

5.1.3可接受标准

流路无泄漏；超过设定压力后，仪器应能立即自动停止工作。

5.1.4确认报告：

填写“表5”泵耐压测试检查的确认。

5.2泵流量设定值误差Ss，流量稳定性误差SR的测试

5.2.1目的

确认液相泵的流量误差和稳定性符合设计要求

5.2.2程序

5.2.2.1以纯化水为流动相，按下表参数进行设定，照高效液相色谱仪使用、维护保养、清洁操作规程进行启动，待压力稳定后，在流动相的出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时并称重。

流量设定值ml/min

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

3

3

流动相收集时间/min

10

5

5

允许误差

Ss

5%

3%

2%

SR

3%

2%

2%

5.2.2.2计算公式

Ss=（Fm平均-Fs）/Fs×100%

SR=（Fmax-Fmin）/Fm平均×100%

式中：

Fm----Fm=（W2-W1）/ρt×t，测量实测值，ml/min

W2----容量瓶＋流动相的质量，g

W1----容量瓶的质量，g

Ρt----实验温度下流动相的密度，g/cm3

t-----流动相收集的时间，min

Fm平均-----同一组测量的算数平方值，ml/min

Fs------流量设定值，ml/min

Fmax------同一组测量中流量最大值，ml/min

Fmin------同一组测量中流量最小值，ml/min

5.2.2.3可接受标准

可接受标准按上表规定

5.2.2.4确认报告：

填写“表5”液相泵的流量误差和稳定性的确认。

5.2.3梯度误差的测试

5.2.3.1目的

确认液相泵的流量误差和稳定性符合设计要求

5.2.3.2程序

5.2.3.2.1由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，C溶剂为甲醇，C经由5个阶梯从0变到100%，如下图所示，将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线，求出A、C溶剂不同比例时的记录仪读数，重复测量2次，计算平均值。

从C溶剂的含量及对应的记录仪读数，按公式计算梯度误差Gci。

5.2.3.2.2计算公式如下：

Gci=（

-

）/

×100%

式中：

Gci——第i段梯度误差（%）；

——第i段记录仪读数平均值；

——各段记录仪读数平均值的平均值。

5.2.3.3可接受标准：

取Gci最大者作为仪器梯度误差，应不超过±3%

5.2.3.4确认报告：

填写“表6”液相泵的梯度流量误差的确认

5.2.4柱温箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的测试

5.2.4.1目的

确认液相柱温箱的性能符合设计要求

5.2.4.2程序

将温度计（已校验，分度值为0.1℃）放置在柱温箱内，选择25℃和40℃进行测试，按操作规程进行操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值，平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。

5.2.4.3可接受标准：

柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃；

5.2.4.4确认报告：

填写“表7”柱温箱的性能确认

5.2.5紫外检测器检定的确认

5.2.5.1波长检测误差和示值误差的确认

5.2.5.1.1.目的：

确认波长检测误差和示值误差在规定范围之内，能够满足日常检测的要求

5.2.5.1.2程序：

用一段空白管线替代色谱柱连接泵与检测器，以水为流动相，流速为1.0ml/min,按下表设定波长，每次进样20ul重铬酸钾硫酸溶液（取120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L的硫酸溶液溶解并稀释至1000ml），将得到一组不同波长的色谱峰，最高（最低）色谱峰对应的波长与标准波长之差即为波长示值误差。

每个波长重复测定三次，对应的最高（最低）色谱峰对应的波长的最大值与最小值的差即为波长重复性误差。

标准波长

测定波长

235nm

231nm

232nm

233nm

234nm

235nm

236nm

237nm

238nm

239nm

257nm

253nm

254nm

255nm

256nm

257nm

258nm

259nm

260nm

261nm

313nm

309nm

310nm

311nm

312nm

313nm

314nm

315nm

316nm

317nm

350nm

346nm

347nm

348nm

349nm

350nm

351nm

352nm

353nm

354nm

5.2.5.1.3可接受标准

波长示值误差不超过±2nm；波长重复性由优于2nm。

5.2.5.1.4确认报告

填写“表8”波长检测误差和示值误差的确认

5.2.5.2.检测器基线噪声和基线漂移的确认

5.2.5.2.1.目的：

确认检测器基线噪声和基线漂移在规定范围内

5.2.5.2.2.程序：

取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为320nm,开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。

连续测试三次。

5.2.5.2.3.可接受标准：

基线噪声不超过1×10-5AU；基线漂移不超过3×10-4AU/h。

5.2.5.2.4.确认报告：

填写“表9”检测器基线噪声和基线漂移的确认。

5.2.5.3.检测器最小检测浓度的确认

5.2.5.3.1.目的：

确认检测器最小检测浓度

5.2.5.3.2程序：

取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后取1×10-7g/ml的萘甲醇溶液进样20μl，连续进样3次，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度CL。

公式如下：

CL=（2×Nd×C）/H

式中：

CL—最小检测浓度，g/ml；

Nd—基线噪声峰峰高，mm；

C—标准溶液浓度，g/ml；

H—标准溶液峰峰高，mm。

5.2.5.3.3.可接受标准：

最小检测浓度不超过1×10-7g/ml奈/甲醇溶液；

5.2.5.3.4.确认报告

填写“表10”最小检测浓度的确认。

5.2.5.4线性范围的确认

5.2.5.4.1目的

确认紫外检测器的线性范围符合设计要求。

5.2.5.4.2测定方法：

将检测波长设定为254nm，通电稳定后，直接用注射器向检测池中注入2%异丙醇冲洗检测池至色谱图数据不变，依据上法分别注入丙酮／2％异丙醇系列水溶液（丙酮含量为0.1％，0.2％，…，1.0％）10μl注入色谱仪中，记录色谱图中峰面积基进行计算。

以5个丙酮含量（0.1％一0.5％5个点）和对应的峰面积做标准曲线，在曲线上找出丙酮含量大于0.5％各点的读数，与对应含量的测量值做比较，测量值低于读数5％时，认为曲线弯曲，此点的浓度作为检测上限CH。

按照5.2.5.2中的公式计算出丙酮的最低检测限CL值，检测器的检测范围=CH/CL。

5.2.5.4.3可接受标准

0.1-0.5%的相关系数R2应大0.999，线性范围应大于103

5.2.5.4.4.确认报告：

填写“表11”线性范围的确认

5.2.6定性重复性、定量重复性的确认

5.2.6.1目的：

考核仪器整体稳定性能。

5.2.6.2程序：

5.2.6.2.1将仪器各部分连接好，按照LabAlliace高效液相色谱仪标准使用、清洁、维护保养操作规程进行操作，以100%甲醇为流动相，色谱柱为C18柱，流速为1.0ml/min,检测波长为254nm，待基线稳定后注入1×10-4g/ml萘/甲醇标准溶液，连续测定6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD。

计算公式

M=（A1+A2+……An）/n

RSD=

式中：

当M：

峰面积平均数；A：

峰面积；n：

测量次数时。

计算出的是定量重复性

当M：

保留时间平均数；A：

保留时间；n：

测量次数时，计算出的是定性重复性。

5.2.6.3可接受标准：

定性测量重复性误差RSD≤2.0%；定量测量重复性误差RSD≤2.0%。

5.2.6.3.4.确认报告：

填写“表12”定性重复性、定量重复性的确认

六.变更与偏差处理：

整理所有确认过程中发现的偏差、变更，按照本公司的偏差变更程序执行，记录附验证记录后。

七、验证周期

1、下列情况之一，均须对该设备进行再验证

1.1设备停用半年以上。

1.2设备损坏经过大修以后

1.3无以上情况，从上次验证后使用1年时。

验证应参考上次验证资料制定方案并执行，结果进行详细记录、分析和存档。

并经批准后投入使用。

八、验证结果评定与结论

验证小组负责收集各项验证，试验结果、记录，根据验证结果起草验证报告，报验证领导小组。

验证领导小组负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认设备的再验证周期。

对验证结果的评审应包括：

（1）验证试验是否有遗漏？

（2）验证实施过程中对验证方案有无修改？

修改原因、依据以及是否经过批准？

（3）验证记录是否完整？

（4）验证试验结果是否符合标准要求？

偏差及对偏差的说明是否合理？

是否需要进一步补充试验？

九、验证合格证书

附表1人员确认

岗位

姓名

签名

是否经过培训

日期

质量负责人

是□否□

QA主管

是□否□

QC主管

是□否□

精密仪器检验员

是□否□

精密仪器检验员

是□否□

精密仪器检验员

是□否□

备注：

执行人

日期

复核人

日期

附表2验证所需文件的确认

文件名称

存放地点

LabAlliace高效液相色谱仪使用、维护保养、清洁标准操作规程

质量管理部

LabAlliace高效液相色谱仪说明书

工程部

液相色谱法标准操作规程

质量管理部

执行人

日期

复核人

日期

附表3、仪器仪表校准的确认

仪表

校准

名称

编号

厂家

型号

量程

是否已校准？

（是/否）

有效期至

分析天平

天平室

梅特勒托利多集团

AB135-S

50g

是□否□

温度计

——

0-50

是□否□

备注

执行人

日期

复核人

日期

附表4、运行确认报告

设备型号

LabAlliace

设备编码

032560100

确认项目

可接受标准

是或否

开机功能

仪器开机后自检功能正常，并能够正常进入工作界面，符合设计要求。

是□否□

按键功能正常

进入操作界面后检查仪器各按键功能正常，

是□否□

参数设定功能

操作人员通过界面操作能够对仪器的工作参数进行正常设定（可对流速、波长、柱温、压力保护上限进行参数设定）；

是□否□

退出及关机功能

操作人员通过界面操作，能够正常退出仪器操作系统，并正常关机。

是□否□

是否可接受（）

执行人

日期

复核人

日期

附表5泵耐压测试

项目

标准

第一次

第二次

第三次

结果

A泵

管路连接

是否漏液

是□否□

是□否□

是□否□

5400Psi耐压测试和压力保护测试

是否漏液

是□否□

是□否□

是□否□

超压泵停止

是□否□

是□否□

是□否□

B泵

管路连接

是否漏液

是□否□

是□否□

是□否□

5400Psi耐压测试和压力保护测试

是否漏液

是□否□

是□否□

是□否□

超压泵停止

是□否□

是□否□

是□否□

是否可接受（）

执行人

日期

复核人

日期

附表6、液相泵的流量误差和稳定性的确认

FS流量设定值（ml/min）

0.5

1.0

2.0

测量次数

3

3

3

t流动相收集时间/min

10

5

5

温度

℃

Ρt

标准规定

Ss

5%

3%

2%

SR

3%

2%

2%

A泵测量数据

测量次数

1

2

3

1

2

3

1

2

3

W1

W2

W1-W2

Fm

Ss

SR

B泵测量数据

测量次数

1

2

3

1

2

3

1

2

3

W1

W2

W1-W2

Fm

Ss

SR

是否可接受（）

执行人

日期

复核人

日期

附表7、泵梯度误差

设备型号

LabAlliace

设备编码

032560100

（标准规定：

Gci应不超过±3%）

次数

第一阶段读数

第二阶段读数

第三阶段读数

第四阶段读数

第五阶段读数

1

2

Gci

是否可接受（）

执行人

日期

复核人

日期

附表8、柱温箱温度确认

设备型号

LabAlliace

设备编码

032560100

测量仪器名称

留点温度计

测量仪器编号

标准规定

柱温箱温度设定值误差ΔTS≤±3℃，TC≤±1℃

设定温度

实测温度

平均值

ΔTS

TC

结果

20℃

1

2

3

4

5

6

7

40℃

1

2

3

4

5

6

7

是否可接受（）

执行人

日期

复核人

日期

附表9波长准确度和重复性确认

测试条件

流动相：

纯化水；流速1.0ml/min;色谱柱：

空白管；进样量：

20ul。

重铬酸钾硫酸溶液

配制浓度

60ug/ml的重铬酸钾硫酸溶液0.005mol/L的硫酸溶液

配制人

配制日期

235nm

标准规定：

波长示值误差不超过±2nm；波长重复性由优于2nm。

波长

峰面积

231nm

232nm

233nm

234nm

235nm

236nm

237nm

238nm

239nm

每次最小吸收