爬山虎叶中黄酮类化合物提取条件初探及含量测定毕业论文.docx
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爬山虎叶中黄酮类化合物提取条件初探及含量测定毕业论文
本科生毕业论文
题目：
爬山虎叶中黄酮类化合物提取条件初探及含量测定
目录
摘要I
关键词I
AbstractII
KeywordsII
前言1
1实验部分2
1.1原料、试剂与仪器2
1.1.1原料2
1.1.2试剂2
1.1.3仪器2
1.2实验部分2
1.2.1原料处理2
1.2.2黄酮类化合物的提取2
1.2.3定性鉴定2
1.2.40.2mg/mL芦丁标准溶液的配制2
1.2.5最大吸收波长的选择2
1.2.6标准曲线的绘制3
1.2.7黄酮含量的测定3
1.3单因素实验3
1.3.1乙醇浓度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响3
1.3.2回流时间对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响3
1.3.3物料比对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响3
1.3.4提取温度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响3
1.4正交实验3
2结果与分析3
2.1定性检验结果4
2.2最大吸收波长的选择结果4
2.3标准曲线的绘制结果与分析及黄酮含量计算公式4
2.3.1标准曲线的绘制结果与分析4
2.3.2黄酮含量计算公式5
2.4单因素实验结果与分析5
2.4.1乙醇浓度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响5
2.4.2回流时间对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响5
2.4.3料液比对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响6
2.4.4提取温度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响6
2.5正交实验结果与分析6
3结论7
参考文献8
致谢9
爬山虎叶中黄酮类化合物提取条件初探及含量测定
摘要：
采用乙醇作为溶剂，用回流法从爬山虎叶中提取黄酮类化合物，初步探究了乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比四个因素对爬山虎叶中黄酮类化合物提取的影响，并进行了正交实验。
采用显色法进行定性检验，芦丁为标准对照品进行含量测定。
结果显示，提取液中含黄酮类化合物，最优提取条件为：
提取温度为80℃、料液比为1:
20、乙醇浓度为75%、提取时间为3.0h，此时，测得黄酮含量为1.766%。
关键词：
回流法；爬山虎叶；黄酮类化合物；定性检验；提取条件；含量测定。
Thetotalflavonoidwithdrawsconditionpreliminarystudyandcontentmeasurementinthetigerleaf
Abstract:
Usingethanolassolvent,Fromivyleafwithrefluxmethodextractingflavonoidscompounds,Preliminaryexploredethanolconcentration,extractingtemperature,extractiontime,materialthanfourfactorsontheivyleafextractintheinfluenceofflavonoidcompounds,andtheorthogonalexperiment.Usingqualitativecolour-displaymethod,rutinstandardproductinspectiononethanol-watercontentdetermination.Theresultsshow,extractcontainsflavonoids,whenextractiontemperaturefor80℃,thanformaterialliquid1:
20,ethanolconcentrationof75%,extractingtimefor3.0h,flavonoidscontentis1.766%.
Keywords:
Refluxmethod;Climbamountainatigerleaf;Flavonoidcompound;Qualitativeanalysisofcontent;Qualitativeinspection;Extractionconditions;Determinationoftotalflavonoids.
朗读
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爬山虎叶中黄酮类化合物提取条件初探及含量测定
前言
黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物中，是许多中草药的有效成分。
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛等作用[1]。
从中草药中提取分离黄酮类化合物的工作开展得较为广泛，国内主要是从银杏叶和大豆中提取黄酮类化合物，而国外对黄酮的提取原料范围较大，除了银杏叶和大豆外，还可以从山楂叶、荷叶、芹菜叶等材料中提取黄酮类化合物。
近年来，国内也开展了这方面的工作，有不少科研人员做了这方面的研究和报道。
将大量的废弃物作为再生资源，在减少资源浪费的同时，降低了黄酮的生产成本，对于黄酮的资源开发有着十分重要的意义[2]。
爬山虎又名小红藤、爬树龙、大血藤，为葡萄科、爬山虎属植物，具有通经活络，祛风除湿，解毒的作用[3]。
据文献报道，爬山虎中含有大量的黄酮类化合物，其中叶的含量最高[4]。
因此，探讨研究爬山虎叶中总黄酮的提取条件，提高这一植物资源的利用率，为其开发提供科学依据和指导，具有重要意义。
据所查资料，对爬山虎中黄酮类化合物提取条件的研究未有报道。
所以，本课题以爬山虎叶为原料，乙醇作为溶剂，采用回流法[5]提取爬山虎叶中的黄酮类化合物，对其进行定性检验[6]，从料液比、提取液乙醇的体积分数、回流时间、回流温度四个方面探究了提取条件，并以芦丁为标准对照品，用分光光度计测定提取液的吸光度，进而计算黄酮类化合物的含量。
1实验部分
1.1原料、试剂与仪器
1.1.1原料：
三叶爬山虎（采于楚雄师范学院）
1.1.2试剂：
无水乙醇（AR）浓盐酸（AR）浓氨水（AR）芦丁（标准品）亚硝酸钠（AR）氢氧化钠（AR）硝酸铝（AR）三氯化铝（AR）镁粉（AR）
1.1.3仪器：
722型光栅分光光度计（上海青华科技仪器有限公司）恒温水浴锅（金坛市大地自动化仪器厂）电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司）索氏提取器
1.2实验部分
1.2.1原料处理
将爬山虎叶洗净后，置于阴凉处晾干，粉碎备用。
1.2.2黄酮类化合物的提取
称取3.0g粉碎后的爬山虎叶粉末，用滤纸包好，置于索氏提取器中，用一定体积、一定浓度的乙醇溶液，在一定温度下，回流提取一定时间，提取液用乙醚脱色后，蒸发浓缩，待冷却后，移入100mL容量瓶中，洗涤液一并移入，用相应浓度的乙醇稀释至100mL，摇匀，得黄酮提取液。
每个因素下平行试验三次。
1.2.3定性鉴定
铝盐反应：
取提取液1mL于试管中，加几滴硝酸铝溶液，振荡。
若溶液呈黄色，说明含有黄酮。
氢氧化钠反应：
取提取液1mL于试管，加氢氧化钠溶液，振荡。
若溶液呈亮黄色，说明含黄酮。
铁离子反应：
取提取液1mL于试管中，加铁离子溶液，振荡。
若溶液呈墨绿色，说明含黄酮。
浓氨水反应：
取提取液1mL于试管中，加几滴浓氨水溶液，振荡。
若溶液呈黄色，说明含黄酮。
盐酸-锌反应：
取提取液1mL于试管中，先加少量锌粉，再加几滴浓盐酸溶液，微热。
若溶液呈橙黄色，说明含有黄酮。
1.2.40.2mg/mL芦丁标准溶液的配制
将芦丁置于干燥洁净的烧杯，于干燥箱中，在120℃下恒重1.5h，取出置于干燥器中冷却，冷却后准确称取0.0200g芦丁置于烧杯中，用90%的乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，定容，摇匀备用。
1.2.5最大吸收波长的选择
准确移取1.00mL提取液于10mL比色管中，加入0.30mL5%亚硝酸钠溶液，放置6分钟后，加入0.30mL10%硝酸铝溶液，放置6分钟后，加入4.0mL4%氢氧化钠溶液，用95%乙醇溶液稀释至刻度，再放置10分钟，以试剂为参比，在430～550nm波长范围测定吸光度。
1.2.6标准曲线的绘制
分别精密移取0.2mg/mL芦丁对照液0.20，0.40，0.60，0.80mL于10mL比色管中，加入0.30mL5%亚硝酸钠溶液，放置6分钟，加入0.30mL10%硝酸铝溶液，放置6分钟，加入4.0mL4%氢氧化钠溶液，用95%乙醇溶液稀释至刻度，再放置10分钟，以试剂为参比，在一定波长下分别测吸光度。
1.2.7黄酮含量的测定
准确移取1.00mL稀释后的提取液于10mL比色管中，加入0.30mL5%亚硝酸钠溶液，放置6分钟后，加入0.30mL10%硝酸铝溶液，放置6分钟后，加入4mL4%氢氧化钠溶液，用相应浓度的乙醇溶液稀释至刻度，再放置10分钟，以试剂为参比，在一定波长下测定吸光度，平行测定三次，结果取平均值，并计算含量。
1.3单因素实验
1.3.1乙醇浓度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
按照1.2.2所述实验方法，分别用95%，85%，80%，75%，70%的乙醇为提取剂，回流提取爬山虎叶中的黄酮类化合物，测定黄酮含量，以确定较适宜的乙醇浓度。
1.3.2回流时间对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
按照1.2.2所述试验方法，用1.3.1的所得体积分数的乙醇，分别回流提取1.0h，1.5h，2.0h，2.5h，3.0h，3.5h，测定黄酮含量，以确定较适宜的回流时间。
1.3.3物料比对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
按照1.2.2所述试验方法，用1.3.1和1.3.2所得的乙醇体积分数和回流时间，分别按料液比（g/mL）1:
10，1:
15，1:
20，1:
25，1:
30，在80℃下，回流提取爬山虎叶中的黄酮类化合物，测定黄酮含量，以确定较适宜的料液比。
1.3.4提取温度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
按照1.2.2所述试验方法，用1.3.1、1.3.2和1.3.3所得实验结果分别在70℃，75℃，80℃，85℃，90℃下，回流提取爬山虎叶中的黄酮类化合物，测定黄酮含量，以确定较适宜的提取温度。
1.4正交实验
根据单因素实验，设计正交实验，找出最佳提取条件。
2结果与分析
2.1定性检验结果
提取液定性检验结果如下：
表2-1黄酮类化合物的定性鉴定
试剂
Al（NO3）3
NaOH
Fe3+
浓氨水
HCl-Zn
现象
黄色
亮黄色
墨绿色
黄色
橙红色
通过5种显色反应，提取液显色均与黄酮类化合物显色相同，说明提取液中的提取物含黄酮类化合物。
2.2最大吸收波长的选择结果
按实验1.2.5所得芦丁标准溶液，在420～550nm范围内的吸光度如图2-1所示：
图2-1芦丁标准溶液的吸光度与波长关系图
由图2-1可知，芦丁标准溶液在500nm处有最大吸收峰，故选择500nm为最大吸收波长。
2.3标准曲线的绘制结果与分析及黄酮含量计算公式
2.3.1标准曲线的绘制结果与分析
以芦丁标准溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果见图2-2。
实验结果表明芦丁含量在0～0.05mg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系，其回归方程为y=-0.00676+11.07714x，R2=0.99977。
2.3.2黄酮含量计算公式
C×V1
总黄酮含量=×100×10-3×100%
V2
V1=10mLV2=1mLC—测量液中黄酮的浓度
图2-2吸光度与芦丁标准液浓度的关系
2.4单因素实验结果与分析
2.4.1乙醇浓度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
据1.3.1，改变乙醇浓度，所得提取液的吸光度及黄酮含量如下：
表2-2乙醇浓度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
乙醇浓度（%）
70
75
80
85
90
吸光度
黄酮含量（%）
0.493
1.505
0.508
1.766
0.627
1.907
0.619
1.833
0.591
1.799
由表2-2可知，随着乙醇浓度的增大，吸光度不断增大，当乙醇浓度为80%时吸光度达到最大，随后依次减小，故较适宜乙醇浓度为80%。
2.4.2回流时间对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
据1.3.2，在不同回流时间下，所得提取液的吸光度和黄酮含量见表2-3。
由表2-3可知，在1.0～3.0h范围，黄酮含量随着回流时间的增加不断的增大；在3.0～3.5h范围内，黄酮含量随回流时间的增加而逐渐减小；回流时间为3.0h时，黄酮含量最高。
因此，3.0h为较适宜回流时间。
表2-3回流时间对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
回流时间（h）
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
吸光度
黄酮含量（%）
0.491
1.498
0.568
1.730
0.597
1.817
0.622
1.895
0.627
1.907
0.625
1.901
2.4.3料液比对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
据1.3.3，在不同乙醇体积下提取爬山虎叶中黄酮类化合物，并计算其含量，所得结果如下：
表2-4料液比对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
料液比（g/mL）
1:
10
1:
15
1:
20
1:
25
1:
30
吸光度
黄酮含量（%）
0.395
1.213
0.472
1.440
0.627
1.907
0.615
1.872
0.592
1.802
由表2-4可知，随着料液比的增大，黄酮含量增大，到1:
20时达到最大，1:
20以后随着料液比的增大，黄酮含量逐渐减小，故较适宜的物料比为1:
20。
2.4.4提取温度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
据1.3.4，固定其它条件，改变温度，所得实验结果见表2-5。
表2-5提取温度对提取爬山虎叶中黄酮类化合物的影响
温度（℃）
70
75
80
85
90
吸光度
黄酮含量（%）
0.452
1.381
0.587
1.787
0.627
1.907
0.615
1.871
0.603
1.835
由表2-5可知，在70～80℃之间，黄酮含量随着温度的升高而增加，而在80～90℃之间，黄酮含量随着温度的升高而降低，因此温度宜控制在80℃。
2.5正交实验结果与分析
根据2.4单因素的试验结果，以提取的黄酮类化合物含量为考察指标，选定四因素三水平进行正交试验。
因素水平见表2-6，正交试验结果见表2-7。
从表2-7可以看出，本实验中A、B、C、D四个因素的主次关系是C>A/D>B，即C（提取温度）为最重要的因素，其次是A（提取液浓度）或D（料液比），B（提取时间）影响最小。
由正交表可以看出，以黄酮类化合物含量为目标，最优试验条件的组合是A1B2C2D2，即提取浓度为提75%，提取时间为3h，提取温度为80℃，料液比为1:
20，此条件下测得爬山虎叶中黄酮类化合物的含量为1.766%。
表2-6因素水平表
水平
A
提取液浓度（%）
B
回流时间（h）
C
回流温度（℃）
D
料液比
1
75
2.5
75
1:
15
2
80
3.0
80
1:
20
3
85
3.5
85
1:
25
表2-7正交实验结果
试验序号
因素
黄酮类化合物的含量（%）
A提取液浓度
B提取时间
C提取温度
D料液比
1
1
1
1
1
1.524
2
1
2
2
2
1.766
3
1
3
3
3
1.735
4
2
1
2
3
1.748
5
2
2
3
1
1.763
6
2
3
1
2
1.754
7
3
1
3
2
1.732
8
3
2
1
3
1.698
9
3
3
2
1
1.725
K1
5.025
5.004
4.976
5.012
K2
5.265
5.227
5.239
5.252
K3
5.155
5.214
5.230
5.181
极差R
主次顺序
优水平
优组合
0.240
A1
0.223
B2
0.263
C﹥A/D>B
C2
A1B2C2D2
0.240
D2
3结论
通过实验得出，四个因素对爬山虎叶中黄酮类化合物提取均有影响，影响程度为：
提取温度＞料液比/提取液浓度＞提取时间。
提取条件优组合为：
提取温度为80℃、料液比为1:
20、乙醇浓度为75%、提取时间为3.0h，此条件下测得爬山虎叶中黄酮含量为1.766%。
参考文献
[1]沈保安，薛建梅，刘荣禄等.中国常用中草药[M].合肥：
安徽科学技术出版社，1992.166～168.
[2]王健慧，段静雨．从废弃物中提取黄酮类化合物的研究进展．中国资源综合利用．2009，Vol，
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[3]朱兆云，高丽，王京昆等．云南天然药物图鉴[M]．昆明：
云南科技出版社，2007.Vol.2[M].昆明：
云南科技出版社，2007.59.
[4]周国海，杨美霞，于华忠等．不同方法对爬山虎中总黄酮含量测定的影响．中国林副特产．2004，第3期.
[5]王玉春，杨洁．芹菜叶总黄酮提取工艺的优选．农产品加工学刊．1671-9646（2009）06-0069-03.
[6]黄锁义，覃成箭，姚小敏，等.洋葱总黄酮的提取及鉴别[J].李时珍国医国药,2006,17
（2）:
224.
致谢
本文的完成始终得到了指导老师宋建梅老师的精心指导，导师渊博的专业知识，严谨的治学态度，精益求精的工作作风，对我影响深远。
本论文从选题到完成，都是在导师的精心帮助下完成的。
在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢。
同时感谢化学与生命科学系为我提供了良好的实验条件和实验设备；感谢在实验过程中给予我帮助所有老师和各位同学；感谢我亲爱的母校--楚雄师范学院四年来对我的大力栽培。
毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明
原创性声明
本人郑重承诺：
所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。
尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。
对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。
作者签名：
日 期：
指导教师签名：
日 期：
使用授权说明
本人完全了解大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：
按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。
作者签名：
日 期：
学位论文原创性声明
本人郑重声明：
所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。
除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。
对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。
本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。
作者签名：
日期：
年月日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。
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涉密论文按学校规定处理。
作者签名：
日期：
年月日
导师签名：
日期：
年月日
指导教师评阅书
指导教师评价：
一、撰写（设计）过程
1、学生在论文（设计）过程中的治学态度、工作精神
□优□良□中□及格□不及格
2、学生掌握专业知识、技能的扎实程度
□优□良□中□及格□不及格
3、学生综合运用所学知识和专业技能分析和解决问题的能力
□优□良□中□及格□不及格
4、研究方法的科学性；技术线路的可行性；设计方案的合理性
□优□良□中□及格□不及格
5、完成毕业论文（设计）期间的出勤情况
□优□良□中□及格□不及格
二、论文（设计）质量
1、论文（设计）的整体结构是否符合撰写规范？
□优□良□中□及格□不及格
2、是否完成指定的论文（设计）任务（包括装订及附件）？
□优□良□中□及格□不及格
三、论文（设计）水平
1、论文（设计）的理论意义或对解决实际问题的指导意义
□优□良□中□及格□不及格
2、论文的观念是否有新意？
设计是否有创意？
□优□良□中□及格□不及格
3、论文（设计说明书）所体现的整体水平
□优□良□中□及格□不及格
建议成绩：
□优□良□中□及格□不及格
（在所选等级前的□内画“√”）
指导教师：
（签名）单位：
（盖章）
年月日
评阅教师评阅书
评阅教师评价：
一、论文（设计）质量
1、论文（设计）的整体结构是否符合撰写规范？
□优□良□中□及格□不及格
2、是否完成指定的论文（设计）任务（包括装订及附件）？
□优□良□中□及格□不及格
二、论文（设计）水平
1、论文（设计）的理论意义或对解决实际问题的指导意义
□优□良□中□及格□不及格
2、论文的观念是否有新意？
设计是否有创意？
□优□良□中□及格□不及格
3、论文（设计说明书）所体现的整体水平
□优□良□中□及格□不及格
建议成绩：
□优□良□中□及格□不及格
（在所选等级前的□内画“√”）
评阅教师：
（签名）单位：
（盖章）
年月日
教研室（或答辩小组）及教学系意见
教研室（或答辩小组）评价：
一、答辩过程
1、毕业论文（设计）的基本要点和见解的叙述情况
□优□良□中□及格□不及格
2、对答辩问题的反应、理解、表达情况
□优□良□中□及格□不及格
3、学生答辩过程中的精神状态
□优□良□中□及格□不及格
二、论文（设计）质量
1、论文（设计）的整体结构是否符合撰写规范？
□优□良□中□及格□不及格
2、是否完成指定的论文（设计）任务（包括装订及附件）？
□优□良□中□及格□不及格
三、论文（设计）水平
1、论文（设计）的理论意义或对解决实际问题的指导意义
□优□
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