4．某酶四种底物的Km如下,与酶亲和力最大的底物是:
（）
A×10-2B×10-1C×10-2D×10-6
5．从世界范围看,酶制剂在哪一行业中的应用占比例最高（）
A淀粉业B乳制品C洗涤剂业D制酒业
三.名词解释（每题3分,共12分）
1.调节酶2.别构效应3.固定化酶
四.判断题（每题1分,共7分）
2.1/Km越大,酶与底物亲和力越大.
3.酶的最适温度是一个固定不变的常数,其数值不受底物的种类.作用时间而改变.
4.盐析法分离蛋白质时,应将溶液PH调至蛋白质等电点附近.
5.酶浓度越高,酶结晶越大.
6.调节酶就是别构酶.
7.大肠杆菌丙酮酸脱氢酶是多酶复合体.
五.说明题（共6分）
1.图示并说明竞争性抑制和非竞争性抑制的区别.（6分）
六.简答题（共21分）
1.简介酶分子中氨基酸残基种类及作用.（8分）
2请比较说明吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析的原理.（8分）
3、固定化酶的制备原则是什么（5分）
酶工程第一章测试参考答案
一填空（每空1分,共18分）
1.库尼=vmax[S]/Km+[S]3.酶是具有生物催化功能的蛋白质.
4.习惯5.国际酶学委员会6.异构酶
7.核糖核苷酸8.传递电子原子和基团的作用.9.反平行
10.立体异构11.解离12.[S]>5Km13.制剂.14淀粉酶15多功能酶16同工酶17酶的比活力.18固定化酶制剂
二.选择题（每题3分,共15分）
.4D
三.名词解释（每题5分,共15分）
1.调节酶:
在代谢途径和物质转化体系中起调节作用的关键酶.
2.别构效应:
一种化合物与酶的活性中心以外的部位结合,引起酶的构象发生变化的现象.
3.固定化酶:
在一定空间内呈闭锁状态存在的酶,能连续地进行反应,反应后酶可以回收重复使用.
四.判断题（每题2分,共14分）
1.正确2.错误3.正确4.错误5.错误6.正确7.正确
五、图示说明题（共12分）
2.图示并说明竞争性抑制和非竞争性抑制的区别.（6分）
竞争性抑制剂结构往往与正常底物非常相似,从而与底物竞争酶分子上同一个结合部位（活性中心）,阻止底物和酶的结合.因而酶不能与抑制剂和底物同时结合.ESI复合物缺乏反应活性基团不能继续分解成产物,形成死端复合物.（图4分,解释2分）
不论底物分子是否与酶结合,非竞争性抑制剂都能与酶分子结合产生死端复合物.非竞争性抑制剂与活性中心以外的基团结合,其结构肯与底物分子毫无相关之处,两者没有竞争作用,但ESI不能进一步分解成产物.（图4分,解释2分）
七.简答题（共26分）
1.请比较说明吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析分离酶的原理.（16分）
层析类型
原理
吸附层析
利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物各组分分离
离子交换层析
利用离子交换剂上的可解离基团对各种离子的亲和力不同而达到分离目的.
凝胶层析
是以各种多孔凝胶位固定相,利用溶液中各组分的相对分子质量不同而进行分离的技术.
亲和层析
利用生物分子与培基之间所具有的专一而又可逆的亲和力使酶等生物大分子分离纯化.
2.固定化酶的制备原则是什么（10分）
（1）维持酶的催化活性和专一性.
（2）应有利于生产自动化.连续化.
（3）与载体牢固结合
（4）载体不与底物.产物和反应物发生化学反应.
（5）成本要低,利于工业使用.
第二、三章酶的生物合成法生产测试题
填空题
1、SOD是_________酶，具有____________________的功效。
2、依据在体外培养时对生长基质依赖性差异，动物细胞可分为两类：
__________、______________。
3、动物细胞培养的PH应控制在______________；温度控制在_______,允许波动_______。
判断题
谷草芽孢杆菌是应用最广泛的产酶微生物。
√
大多数产酶微生物采用淀粉或其水解产物为碳源,植物细胞一般以蔗糖为碳源。
√
植物细胞培养要求的氮源一般为有机氮源。
×
动物细胞培养主要用于各种功能蛋白质的生产。
√
动物细胞传代培养时可以用胃蛋白酶分散细胞。
×
简答题：
1、固定化原生质体产酶有何特点
2、植物细胞培养产酶的工艺流程
3、酶的生物合成有哪几种模式各有何特点P36-38
4、影响酶生物合成的主要因素有哪些结合酶的生物合成模式，分析说明怎样提高产酶效率。
P39
答案：
填空题
1、抗辐射、抗氧化、抗衰老2、贴壁依赖型细胞，非贴壁依赖型细胞3、－微碱性，℃，允许波动范围在＋－℃
简答题
1、
（1）、变胞内产物为胞外产物固定化黑曲霉原生质体生产葡萄糖氧化酶，使细胞内葡萄糖氧化酶的90％以上分泌到细胞外。
（2）、提高产酶率固定化枯草芽孢杆菌原生质体生产碱性磷酸酶，使原来存在于细胞间质中的碱性磷酸酶全部分泌到发酵液中，产酶率提高36％。
（3）、稳定性好
（4）、易于分离纯化
2、外植体诱导愈伤组织细胞培养分离纯化酶
第四章酶的提取与分离纯化测试题
填空题
1、酶在结晶之前，酶液必须经过纯化达到一定的纯度。
通常酶的纯度应当在_______以上，方能进行结晶。
2、酶结晶的主要方法有：
________、________、________、________。
3、酶的剂型有：
_____、______、________和固定化酶制剂；通常用作分析试剂或用作医疗药物的酶制剂要求是___________。
4、注射用的医用酶应设法除去____________。
判断题
1、一般采用稀盐溶液进行酶的提取，盐的浓度一般控制在～mol／L。
√
2、常用硫酸铵盐析沉淀酶蛋白。
√
3、盐析沉淀酶蛋白时，溶液的pH值应调节到远离酶的等电点。
×
4、等电点结晶是通过缓慢改变浓酶液的pH值，使之逐渐远离酶的等电点，而使酶析出结晶的过程。
×
名词解释：
1、选择性变性沉淀法2、酶的提取3、亲和层析
简答题：
1、酶的分离纯化工作的基本原则
2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理。
3、稳定酶的方法有哪些
答案：
填空题1、50％。
2、盐析结晶法、有机溶剂结晶法、透析平衡结晶法、等电点结晶法。
3、固体酶制剂、液体酶制剂、纯酶制剂、固定化酶制剂；纯酶制剂。
4、热源物质
名词解释
1、选择性变性沉淀法：
选择一定的条件使酶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性沉淀，而不影响所需的酶，这种分离方法称为选择性变性沉淀法
2、酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程，也称为酶的抽提。
3、亲和层析是利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使酶等生物分子分离纯化的技术。
简答题
1、
（1）、防止酶变性失效凡用于预防蛋白质变性失效的方法与措施都应考虑用于酶的分离纯化。
A、除少数例外外，所有操作都必须在低温条件下进行，特别是在有机溶剂存在的情况下更应小心。
B、大多数酶在PH<4或PH>10的情况下稳定，应控制整个系统不要过酸、过碱，同时要避免在调整PH时局部过酸或过碱。
C、重金属能使酶失效，有机溶剂能使酶变性，微生物污染以及蛋白酶的存在都能使酶分解破坏，所有这些都应周全考虑。
可以加入蛋白酶抑止剂，杀菌剂，稳定蛋白质构象和酶活性的还原剂。
（2）、酶活性测定贯串纯化过程的始终
也就是说，从原理开始，整个过程的每一步都要进行比活力与总活力的检测与比较，以便知道每一步骤中可采用什么方法与什么条件，分别使酶的纯度提高了多少，回收了多少酶，从而决定其取舍。
（3）、选择有效的纯化方法
凡用于蛋白质纯化的一切方法同样适用于酶。
应根据目的酶的物理、化学性质选取。
（4）、原料来源要方便，成本要低
2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理
方法
举例
原理
酶降解
溶菌酶处理细菌
消化细胞壁
化学破碎
甲苯抽提酵母
化学溶解细胞壁
细胞溶解
红细胞
渗透破碎细胞膜
手动匀浆器
肝组织
迫使细胞通过窄缝撕开细胞膜
超声波
细胞悬浮液
破坏细胞膜
3、稳定酶的某些方法
（1）、添加底物、抑止剂和辅酶
（2）、添加－SH保护剂如谷胱甘肽、二巯基乙醇
（3）、低温（0－4℃）
（4）、添加某些低分子无机离子Ca2＋保护淀粉酶，Mn2+能稳定溶菌酶，CL－能稳定透明质酸酶等
（5）、固体酶制剂稳定性高可保存数月或几年以上；热敏性酶多用冷冻干燥法，例如注射用酶等。
（6）、固定化酶也是提高酶的稳定性的好方法。
第四章酶的提取与分离纯化测试题
填空题
1、酶在结晶之前，酶液必须经过纯化达到一定的纯度。
通常酶的纯度应当在_______以上，方能进行结晶。
2、酶结晶的主要方法有：
________、________、________、________。
3、酶的剂型有：
_____、______、________和固定化酶制剂；通常用作分析试剂或用作医疗药物的酶制剂要求是___________。
4、注射用的医用酶应设法除去____________。
判断题
1、一般采用稀盐溶液进行酶的提取，盐的浓度一般控制在～mol／L。
√
2、常用硫酸铵盐析沉淀酶蛋白。
√
3、盐析沉淀酶蛋白时，溶液的pH值应调节到远离酶的等电点。
×
4、等电点结晶是通过缓慢改变浓酶液的pH值，使之逐渐远离酶的等电点，而使酶析出结晶的过程。
×
名词解释：
1、选择性变性沉淀法2、酶的提取3、亲和层析
简答题：
1、酶的分离纯化工作的基本原则
2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理。
3、稳定酶的方法有哪些
答案：
填空题1、50％。
2、盐析结晶法、有机溶剂结晶法、透析平衡结晶法、等电点结晶法。
3、固体酶制剂、液体酶制剂、纯酶制剂、固定化酶制剂；纯酶制剂。
4、热源物质
名词解释
1、选择性变性沉淀法：
选择一定的条件使酶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性沉淀，而不影响所需的酶，这种分离方法称为选择性变性沉淀法
2、酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程，也称为酶的抽提。
3、亲和层析是利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使酶等生物分子分离纯化的技术。
简答题
1、
（1）、防止酶变性失效凡用于预防蛋白质变性失效的方法与措施都应考虑用于酶的分离纯化。
A、除少数例外外，所有操作都必须在低温条件下进行，特别是在有机溶剂存在的情况下更应小心。
B、大多数酶在PH<4或PH>10的情况下稳定，应控制整个系统不要过酸、过碱，同时要避免在调整PH时局部过酸或过碱。
C、重金属能使酶失效，有机溶剂能使酶变性，微生物污染以及蛋白酶的存在都能使酶分解破坏，所有这些都应周全考虑。
可以加入蛋白酶抑止剂，杀菌剂，稳定蛋白质构象和酶活性的还原剂。
（2）、酶活性测定贯串纯化过程的始终
也就是说，从原理开始，整个过程的每一步都要进行比活力与总活力的检测与比较，以便知道每一步骤中可采用什么方法与什么条件，分别使酶的纯度提高了多少，回收了多少酶，从而决定其取舍。
（3）、选择有效的纯化方法
凡用于蛋白质纯化的一切方法同样适用于酶。
应根据目的酶的物理、化学性质选取。
（4）、原料来源要方便，成本要低
2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理
方法
举例
原理
酶降解
溶菌酶处理细菌
消化细胞壁
化学破碎
甲苯抽提酵母
化学溶解细胞壁
细胞溶解
红细胞
渗透破碎细胞膜
手动匀浆器
肝组织
迫使细胞通过窄缝撕开细胞膜
超声波
细胞悬浮液
破坏细胞膜
3、稳定酶的某些方法
（1）、添加底物、抑止剂和辅酶
（2）、添加－SH保护剂如谷胱甘肽、二巯基乙醇
（3）、低温（0－4℃）
（4）、添加某些低分子无机离子Ca2＋保护淀粉酶，Mn2+能稳定溶菌酶，CL－能稳定透明质酸酶等
（5）、固体酶制剂稳定性高可保存数月或几年以上；热敏性酶多用冷冻干燥法，例如注射用酶等。
（6）、固定化酶也是提高酶的稳定性的好方法。
第五章酶分子的修饰与应用测试题
填空题
1、酶分子修饰的意义是：
_____________,______________,_________。
名词解释
1、酶分子修饰
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程称为酶分子修饰。
2、金属离子置换修饰
3、酶分子的物理修饰
简答题：
1、什么是酶分子的侧链修饰酶分子侧链修饰有何意义
2、请举例说明酶分子修饰的应用
答案
填空题：
1、提高酶的活力；增强酶的稳定性；降低或消除酶的抗原性。
名词解释
1、酶分子修饰：
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的过程称为酶分子修饰。
2、把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的功能和特性发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。
3、通过各种物理方法使酶分子的空间构象发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的方法称为酶分子的物理修饰。
简答题
1、采用一定的方法（一般为化学法）使酶的侧链基团发生改变，从而酶分子的特性和功能的修饰方法称为侧链基团修饰。
意义：
（1）、通过酶分子侧链基团修饰，可以研究各种基团在酶分子中的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响，并可以用于研究酶的活性中心的必须基团。
如果某基团修饰后不引起酶活力的显着变化，则可以认为此基团属于非必须基团。
（2）、通过酶分子侧链基团修饰，可以测定某一种基团在酶分子中的数量，例如，采用三硝基苯磺酸测定氨基的数量；用对汞苯甲酸测定巯基的数量；用碳二亚胺测定羧基的数量；用四唑重氮盐测定咪唑基的数量等。
（3）、酶分子侧链基团修饰，在酶工程方面可以提高酶的活力、增加酶的稳定性、降低酶的抗原性，并且可以引起酶催化特性和催化功能的改变，以提高酶的使用价值。
（4）、酶分子侧链基团修饰，还可以获得自然界原来不存在的新酶种，例如，某些抗体酶和人工改造的核酸类酶。
第六章酶、细胞、原生质体固定化与应用测试题
填空题
1、固定化酶的制备方法主要有：
______、_______、________、_________。
2、交联法常用的双功能试剂是：
_____________。
判断题
1、酶经固定化后，其作用的最适pH值往往会发生一些变化。
√
2、固定化酶的最适作用温度与游离酶相比没有变化。
×
3、一般来说，用带负电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH值比游离酶的最适pH值为高（即向碱性一侧移动）；用带正电荷载体制备的固定化酶的最适pH值比游离酶的最适PH为低（即向酸性一侧移动）√
4、一般说来，催化反应的产物为酸性时，固定化酶的最适pH值要比游高酶的最适PH低一些；产物为碱性时，固定化酶的最适pH值要比游离酶的最适pH值高一些。
×
5、固定化酶的底物特异性变化与底物分子量的大小有一定关系。
√
名词解释
1、交联法
2、载体活化
3、固定化细胞。
简答题
1、什么是固定化酶有何显着优点
2、请举例说明固定化（酶、细胞、原生质体）技术的应用
答案
填空题
1、吸附法、包埋法、结合法、交联法和热处理法等。
名词解释
1、交联法：
借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用，制成网状结构的固定化酶的方法称为交联法。
2、载体活化：
要使载体与酶形成共价键对酶进行固定化，必须首先使载体活化，即借助于某种方法，在载体上引进一活泼基团。
然后此活泼基团再与酶分子上的某一基团反应，形成共价键。
3、固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞称为固定化细胞。
简答题
1、什么是固定化酶有何显着优点
固定化酶是指固定在一定载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。
固定化酶既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，具有增加稳定性、可反复或连续使用以及易于和反应产物分开等显着优点。
2、略
第七章酶非水相催化测试题
判断题
1、有机溶剂往往会使酶变性失活，因此只有在水溶液中酶才有催化活性。
2、在有机介质中，由于酶分子活性中心的结合部位与底物之间的结合状态发生某些变化，致使酶的底物特异性发生改变。
3、许多酶在有机介质中的热稳定性比在水溶液中的热稳定性更好。
4、目前世界上化学合成药物中的40％左右属于手性药物。
在这些手性药物中，大多数仍然以外消旋体形式使用。
5、常用的消炎解热镇痛药萘普生（Neproxen）的两种对映体中，S（+）-萘普生的疗效是R-（－）-萘普生疗效的28倍。
6、镇静剂反应停的S-构型有镇静作用，R-构型也有镇静作用，但疗效甚微。
7、一些消旋体药物可以在有机介质体系中用酶法进行拆分，获得单一对映体。
名词解释
1、酶的对映体选择性
2、手性化合物
第八章酶定向进化复习题
一、填空题：
酶基因随机突变的方法有：
________、____________、_________。
二、名词解释：
酶定向进化
易错PCR技术
三、简答题：
1．酶定向进化的特点
2.酶随机突变的三种方法是什么请解释并比较分析。
3.举例说明酶定向进化技术的应用。
第九章酶反应器复习题
各种酶反应器及其特点
反应器类型
适用的操作方式
适用的酶
特点
搅拌罐式反应器
分批式,
流加分批式
连续式,
游离酶
固定化酶
反应比较完全，反应条件容易调节控制。
填充床式反应器
连续式
固定化酶
密度大，可以提高酶催化反应的速度。
在工业生产中普遍使用。
流化床反应器
分批式
流加分批式
连续式
固定化酶
流化床反应器具有混合均匀，传质和传热效果好，温度和pH值的调节控制比较容易，不易堵塞，对粘度较大反应液也可进行催化反应。
鼓泡式反应器
分批式
流加分批式
连续式
游离酶
固定化酶
鼓泡式反应器的结构简单，操作容易，剪切力小，混合效果好，传质、传热效率高,适合于有气体参与的反应。
膜反应器
连续式
游离酶
固定化酶
清洗比较困难
喷射式反应器
连续式
游离酶
通入高压喷射蒸汽，实现酶与底物的混合，进行高温短时催化反应，适用于某些耐高温酶的反应
简答题：
P240复习题1、2、5
第十章1酶在医药方面的应用测试题
一、填空题
1、指示肝功能异常的常用酶有：
____、______、_______。
2、_________酶可以检测癌细胞。
3、治疗消化不良、食欲不振的酶有：
______、______、________。
4、具有抗癌作用的酶有：
______、______、_______、__________。
5、_________酶可以治疗各种出血。
6、_____________酶可以治疗龋齿。
7、___________酶可以溶血栓。
8、____________酶可以治疗白血病。
9、____________酶用于制造抗肿瘤人参皂苷。
10、___________酶可用于制造人胰岛素。
二、判断题
1、乳酸脱氢酶广泛存在于各种组织以及红细胞中，在正常情况下，血清中乳酸脱氢酶的含量很低，但是在肝癌、急性肝炎、心肌梗塞等疾病的患者血清中，该酶活力显着升高。
√
2、蛋白酶可用于治疗多种疾病，是在临床上使用最早、用途最广的药用酶之一，它可作为消化剂、消炎剂并可用于治疗高血压。
√
三、请写出以下药品的酶法生产反应式
6－氨基青霉烷酸（6-APA）
多巴
四、分析说明题
1、请分析说明尿糖试纸检测尿糖的原理
2、绘图并说明血液透析装置及装置中酶法除去尿素的原理。
3、举两例分析说明酶在药物制造方面的应用价值。
4、请分析说明溶菌酶的应用价值
5、请分析说明SOD的应用价值
答案
填空题
1、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆碱酯酶
2、端粒酶
3、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶
4、L-精氨酸酶、L-组氨酸酶、L－蛋氨酸酶、谷氨酰胺酶
5、凝血酶6、右旋糖酐酶7、溶纤酶8、L-天冬酰胺酶9、β－D－葡萄糖苷酶10、无色杆菌蛋白酶
请写出以下药品的酶法生产反应式
1、6－氨基青霉烷酸（6-APA）
青霉素青霉素酰化酶6－氨基青霉烷酸（6-APA）
2、多巴
酪氨酸β－酪氨酸酶多巴
邻苯二酚＋丙酮酸＋氨β－酪氨酸酶多巴
分析说明题
4、溶菌酶主要从蛋清、植物和微生物中分离得到。
作用机理：
溶菌酶作用于细菌的细胞壁，可使病原菌、腐败性细菌等溶解消灭，对抗生素有耐药性的细菌同样起溶菌作用，具有显着疗效而对人体的副作用很小，是一种较为理想的药用酶。
应用价值：
临床上主要用于治疗各种炎症，溶菌酶与抗生素联合使用，可显着提高抗生素的疗效，常用于难治的感染病症的治疗；还可用于食品保鲜；在护肤品中添加可以消除皮肤表面黏附的细菌，起到杀菌消炎的作用。
5、S
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