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工作报告之生物化学实验报告书

生物化学实验报告书

【篇一：

2014生物化学实验报告册模板】

生物化学实验报告

姓名：

学号：

专业年级：

组别：

第六实验室

生物化学和分子生物学实验教学中心

实验名称

实验日期2014-03-01

合作者

评分folin-酚试剂法测定蛋白质含量实验地点指导老师教师签名第二实验室批改日期格式要求：

正文请统一用：

小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用timesnewroman；标题用：

四号，黑体，加粗。

需强调的地方请用蓝颜色标出。

不得出现多行、多页空白现象。

一、实验目的

二、实验原理

三、材料和方法：

以流程图示意

四、结果和讨论：

①结果：

实验数据、现象、图谱；②讨论：

以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。

【篇二：

生物化学实验报告】

实验一糖类的性质实验

（一）糖类的颜色反应

一、实验目的

1、了解糖类某些颜色反应的原理。

2、学习使用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。

二、颜色反应

2、器材

试管及试管架，滴管

3、试剂

1％葡萄糖溶液100ml

1％果糖溶液100ml

1％蔗糖溶液100ml

1％淀粉溶液100ml

0.1％糠醛溶液100ml

浓硫酸500ml

4、实验操作

取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶

液、0.1％糠醛溶液各1ml。

再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。

倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1ml，慢慢立起试管，切勿摇动。

观察记录各管颜色。

（二）间苯二酚反应

1、原理

在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再和间苯二酚作用生成红色物质。

此反应是酮醣的特异反应。

醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。

实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。

2、器材

试管及试管架，滴管

3、试剂

塞氏试剂：

0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000ml，称取间苯二酚0.05g溶于30ml浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000ml。

1％葡萄糖溶液100ml

1％果糖溶液100ml

1％蔗糖溶液100ml

4、实验操作

取3试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5ml。

再向3支试管中各加入塞氏试剂5ml，充分混合。

将试管同时放入沸水浴中，。

观察记录各管颜色。

（二）糖类的还原作用

一、实验目的

1、理解并掌握糖类的还原性质；

2、学习常用的鉴定糖类还原性的方法。

3、了解斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理。

二、实验原理

还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。

在碱性溶液中，还原糖能将cu2+、hg2+、fe3+、ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。

糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。

三、器材

试管及试管架，水浴锅电炉

四、试剂

1斐林试剂

甲液氢氧化钠的质量分数为0.1g/ml的溶液。

乙液硫酸铜的质量分数为0.05g/ml的溶液。

2本尼迪克特试剂

31％葡萄糖溶液100ml

41％果糖溶液100ml

5、1％蔗糖溶液100ml

五实验操作

六思考题

1、斐林氏、本尼迪克特试法检验糖的原理是什么？

2、试比较斐林氏、本尼迪克特试法的方法。

实验二总糖的测定---蒽酮比色法

一、实验目的

掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

二、实验原理

强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛和蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。

在10-100ug范围内其颜色的深浅和可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。

一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器、试剂和材料

1.仪器

（1）分光光度计

（2）电子顶载天平

（3）三角瓶：

50m1x1

（4）大试管：

9支

（5）试管架，试管夹

（6）漏斗，漏斗架

（7）容量瓶：

50m1x2

（8）刻度吸管：

1m1x3，2m1x1，5mlx1

（9）水浴锅

2.试剂

（1）葡萄糖标准液：

l00ug/ml

（2）浓硫酸

（3）蒽酮试剂:

0.2g蒽酮溶于100ml浓h2so4中当日配制使用。

3.材料

小麦分蘖节（或者其它材料）。

四、操作步骤

1.葡萄糖标准曲线的制作

后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。

自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。

以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。

2.植物样品中可溶性糖的提取

将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取1g,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，

定容至刻度。

吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。

3.测定

吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入4.oml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。

比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。

五、结果处理

六、注意事项

1该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。

2h2so4要用高纯度的。

3不同糖类和蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。

加热、比色时间应严格掌握。

七、思考题

1蒽酮比色测定糖的原理是什么？

2用水提取的糖类有哪些？

3制作葡萄糖标准曲线应注意哪些事项？

4分光光度计的原理是什么？

使用时需要注意哪些？

实验三粗脂肪的提取和定量测定

一实验目的

1.学习和掌握粗脂肪提取的原理和测定方法。

2.熟悉和掌握重量分析的基本操作，包括样品的处理、定量转移、烘干、恒重等。

二实验原理

本法为重量法，用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量。

该法适用于固体和液体样品，通常将样品浸于脂肪溶剂，如乙醚或沸点为30-60度的石油醚，借助于索氏提取管进行循环抽提。

本法提取的脂溶性物质为脂肪类似物的混合物，其中含有脂肪，游离脂肪酸，磷脂，酯，固醇，芳香油，某些色素及有机酸等，因此，称为粗脂肪。

用该法测定样品含油量时，通常采用沸点低于60度的有机溶剂，此时，样品中结合状态的脂类（脂蛋白）不能直接提取出来，所以该法又称为游离脂类定量测定法。

三仪器、试剂和材料

1.仪器

索式提取器，分析天平，烧杯，烘箱，干燥器，恒温水浴，脱脂棉，脱脂滤纸，镊子

2试剂和材料

石油醚芝麻或者花生等油料种子。

四、实验步骤

1.样品的准备

将花生在80度烘箱内烘去水分，烘干时需避免过热，冷却后准确地称取1克左右放入研钵中研碎，再用滤纸将样品包裹好放入索氏提取管内。

注意勿使纸包内样品高于提取管的虹吸部分，研磨后的研钵使用滤纸擦净并将滤纸放入提取管内，用少量溶剂洗涤研钵，将溶剂倒入提取管中

2.抽提

2.1洗净提取瓶于105度烘干至恒重，记下其重量。

装入石油醚达提取瓶容积的一半，连接提取器各部分，不能漏气（不能用凡士林或真空脂）。

2.2加热提取：

使石油醚每小时循环10-20次，约2-2.5小时，用滤纸粗略判断脂肪是否提取完全。

2.3蒸去石油醚，烘干至恒重。

3.称量计算

思考题

1、索式提取法提取的为什么是粗脂肪？

2、做好本试验应注意哪些事项？

3、本实验装置磨口处为什么不能涂抹凡士林或真空脂？

【篇三：

生物化学实验报告】

2012年生物化学实验b

姓名：

学号：

实验时间：

实验分组：

组内成员：

任课教师：

实验报告

xxxx2012年11月17日

摘要

本实验通过从小牛肠中通过刮去，离心，析出等方式提取小牛肠碱性磷酸酶，再通过sds-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量，利用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量及测定酶的活性。

1.实验部分

1.1试剂和仪器

1.试剂：

（1）正丁醇、丙酮。

（2）1mol/l醋酸，1mol/lnaoh，硫酸铵。

（3）平衡缓冲液：

0.01mol/ltris-hcl，ph8.0。

（4）底物缓冲液：

1mol/l二乙醇胺-盐酸缓冲液。

（7）分离胶缓冲液：

1.5mol/ltris-hcl缓冲液，ph8.8，已加入10%sds。

（8）浓缩胶缓冲液：

0.5mol/ltris-hcl缓冲液，ph6.8，已加入10%sds。

（9）10%过硫酸铵。

（10）temed（四甲基乙二胺）。

（11）上样缓冲液：

称100mgsds、2mg溴酚蓝、2g甘油，加0.1ml巯基乙醇、2ml0.05mol/lph8.0tris-hcl，加超纯水定容至10ml。

（12）染色液：

配置含0.1%考马斯亮蓝r250，40%甲醇和10%冰醋酸的染色液500ml，过滤后备用。

（13）脱色液：

500ml10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000ml。

（14）电泳缓冲液。

2.仪器

匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy—2型恒温水浴、uv762型紫外可见分光光度计。

离心管，剪刀，载玻片，不锈钢盘，搪瓷盘，滤布，漏斗，分液漏斗，量筒，烧杯，移液抢，比色皿，dyy—11型电泳仪，24d型电泳槽，制胶板，揺床，移液枪。

1.2小牛肠碱性磷酸酶提取方法

1）取新鲜小牛肠，用剪刀剖开，用载玻片刮取小肠内粘膜，放到盘子一角。

2）将小肠粘膜液集中倒入匀浆机中，加冰冷蒸馏水，高速匀浆，重复多次。

3）缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。

在4℃，10000rpm条件下离心。

4）用滤布过滤去除杂质，倒入分液漏斗中，静止分层，取下层水相，用hac溶液调ph到4.9。

4℃，10000rpm，离心。

5）得到上清后放入离心管中，用naoh溶液调ph至6.5，称取硫酸铵加到离心管中溶解；再加冰冷丙酮，混匀，4℃静置30min以上。

4℃，10000rpm，离心。

6）上清液中加入冰冷丙酮，4℃放置30min以上。

4℃，10000rpm，离心。

7）取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。

8）底物处理：

底物37℃水浴5min。

1.3小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法

1）将酶稀释10倍。

2）紫外分光光度计检测条件为405nm波长，测定时间60s，取值2s，记录范围0.0-1.5。

3）取2个2ml比色皿，加入上述

（2）加热的底物缓冲液，校对归零。

4）将稀释10倍的酶液加到其中1个比色皿中（仪器外侧），用手堵住皿口。

快速

上下倒2次，放回分光光度计中，测定酶动力学曲线

1.4聚丙烯凝胶制备

1）装板：

将垂直板型电泳的玻璃片洗净、晾干；放好胶条，用夹子夹好玻璃板，上面插上梳子，垂直放置在水平台面上备用。

2）制备分离胶：

在小烧杯中按下表配制所需浓度的分离胶。

分离胶制备（浓度10%，制备量10ml）

试剂用量h2o

30%丙烯酰胺

1.5mol/ltris-hcl缓冲液ph8.8

10%过硫酸铵

temed

3）制备浓缩胶：

在小烧杯中按下表配制所需浓度的浓缩胶。

浓缩胶制备（浓度5%，制备量6ml）试剂h2o

30%丙烯酰胺

0.5mol/ltris-hcl缓冲液ph6.8

10%过硫酸铵

temed

4）蛋白样品处理：

在1.5ml离心管中按1：

1体积比例，加样品和上样缓冲液，100?

c加热使蛋白变性。

5）浓缩胶完全聚合后，去掉夹子和胶条，拔去梳子，将凝胶玻璃板固定于电泳装置内槽上，加入电泳缓冲液，缓冲液高过玻璃板凹面。

1.5考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

1）玻璃试管中加入考马斯亮蓝。

2）在1.5ml离心管中，取酶液分别稀释50、100、200倍。

5）取2个比色皿，加入考马斯亮蓝，分光光度计中校对归零。

6）将样品放入外侧比色皿中，读吸光值。

7）根据蛋白浓度标准曲线，计算酶蛋白浓度。

1.6sds-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量

1）用移液枪依次在泳道加样。

2）电泳：

连接正、负极，待溴酚兰指示剂迁移至下沿处，停止电泳。

3）剥胶染色：

电泳结束后，取出凝胶玻璃板，用水冲洗，将剥离下来的凝胶用水漂洗，转入染色缸中，加染色液，置摇床染色。

4）脱色：

染色完毕，回收染色液，用水漂洗，加入脱色液，置摇床脱色，脱色至背景清晰。

5）观察测定蛋白的迁移率及条带，对照标准样品，分析蛋白样品的分子量及纯度。

6）拍照电泳结果，用于完成实验报告。

2.结果和讨论

2.1小牛肠碱性磷酸酶酶活检测

根据酶动力计算公式：

?

a/min?

vr?

d

比活力（u/mg）＝

e405?

ve?

c?

l

根据上图，?

a/min=3.5/min；vr=1.50002ml；d=10；

e405=18.3l/（mol*cm）；ve=0.00002ml；c=19.35mg/ml.l=0.5cm；

所以比活力（u/mg）=1.48*10u/mg；

4