6第2章 第1节 第1课时 植物细胞工程的基本技术 讲义.docx

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6第2章第1节第1课时植物细胞工程的基本技术讲义

第二章细胞工程

第1节　植物细胞工程

第1课时　植物细胞工程的基本技术

一、植物细胞的全能性

1．概念：

细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。

2．生长发育过程中细胞没有表现全能性的原因

在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达。

二、植物组织培养技术

1．概念：

将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。

2．全能性表达过程

（1）脱分化：

让已经分化的细胞经过诱导后，失去其特有的结构和功能，转变成未分化细胞的过程。

（2）再分化：

脱分化产生的愈伤组织，在一定的培养条件下，再分化出芽、根等器官，进而形成完整的小植株。

（3）激素的作用：

植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。

3．操作流程

外植体的消毒：

将流水冲洗后的外植体用酒精消毒30s，

用无菌水清洗2～3次后，再用次氯酸钠溶液处理30min，用无

菌水清洗2～3次。

↓

外植体的分割：

用无菌滤纸吸去表面的水分，用解剖刀将外植

体切成0.5～1cm长的小段。

↓

接种：

在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3～1/2插入诱导愈伤组

织的培养基中。

↓

培养：

将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18～22

℃的培养箱中培养。

定期观察和记录愈伤组织的生长情况。

↓

转移培养：

将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上。

长出芽后，再将其转接到诱导生根的培养基上，进一步诱导形

成试管苗。

↓

移栽：

将试管苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩上，壮苗后再移

栽入土。

三、植物体细胞杂交技术

1．概念

将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。

2．过程

（1）去壁：

用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁，获得原生质体。

（2）诱导原生质体融合的方法

①物理法：

电融合法、离心法等。

②化学法：

聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2＋－高pH融合法等。

3．意义

克服不同种生物远缘杂交的不亲和性。

判断对错（正确的打“√”，错误的打“×”）

1．植物的每个细胞在植物体内和体外都能表现出细胞的全能性。

（）

2．在植物组织培养过程中，细胞的遗传物质一般都发生改变。

（）

3．脱分化和再分化是植物组织培养的重要过程。

（）

4．在植物组织培养过程中需要给予光照，以诱导脱分化过程。

（）

5．植物体细胞杂交要先去除细胞壁的原因是细胞壁阻碍了原生质体的融合。

（）

6．植物体细胞杂交过程中，细胞融合成功的标志是产生新的细胞壁。

知识点一　植物细胞的全能性

1．细胞具有全能性的原因

一般生物体的每一个细胞都包含该物种所特有的全套遗传物质，都具有发育成为完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。

2．细胞全能性大小的比较

（1）植物细胞>动物细胞（动物细胞只有细胞核具有全能性）。

（2）受精卵>生殖细胞（精子、卵细胞）>体细胞。

（3）体细胞：

分化程度低的>分化程度高的，细胞分裂能力强的>细胞分裂能力弱的，幼嫩的细胞>衰老的细胞。

3．植物细胞表现全能性的条件

（1）离体状态。

（2）营养物质：

种类齐全、比例合适。

（3）植物激素：

生长素、细胞分裂素。

（4）外界条件：

适宜的温度、pH和光照（愈伤组织的形成和生长需要避光培养，分化培养需照光）等。

（5）无菌操作。

合作探究：

与体细胞相比，生殖细胞如花粉的遗传物质减少了一半，为什么生殖细胞仍具有全能性？

提示：

在生物的体细胞中染色体是成对存在的，基因也是成对存在的，生殖细胞中遗传物质虽然减少了一半，但基因的种类没有少，仍具有控制生长发育的全套的遗传信息和全部的基因，因此生殖细胞仍具有全能性。

练习

1．在植物体内，茎的顶端分生组织的细胞具有细胞周期，但不能表现出全能性，是因为（　　）

A．细胞核失去了全能性

B．不同的细胞基因是不同的

C．细胞中基因的表达有选择性

D．细胞核中的基因发生了不同的变异

2．植物细胞表现出全能性的必要条件和增殖方式分别是（　　）

A．脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件；减数分裂

B．导入其他植物细胞的基因；有丝分裂

C．将成熟筛管的细胞核移植到去核的卵细胞内；减数分裂

D．脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件；有丝分裂

知识点二　植物组织培养

1．植物组织培养的过程

（1）外植体：

用于植物组织培养的离体的植物器官、组织或细胞。

（2）脱分化：

已经分化的细胞，经过诱导，失去其特有的结构和功能，转变成未分化细胞的过程。

（3）愈伤组织：

细胞排列疏松且无规则、高度液泡化、呈无定形状态的薄壁细胞团。

（4）再分化：

脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化出根或芽等器官的过程。

2．植物组织培养技术的注意事项

（1）外植体的选择与制备

①外植体的选择：

外植体脱分化的难易因植物种类、器官来源及生理状况的不同而不同。

一般来说，植物的花和幼嫩的组织脱分化相对比较容易，而植物的茎、叶和成熟的组织较难。

②制备外植体首先要消毒，其次要选取有形成层的部分，因为形成层细胞易脱分化。

（2）无菌操作

植物组织培养成功的关键是避免微生物的污染，所有实验用具要严格灭菌，接种过程要进行严格的无菌操作。

（3）光照的控制

对于植物组织培养来说，光照条件非常重要。

在愈伤组织的诱导阶段往往要避光培养，有利于细胞脱分化产生愈伤组织（如果是在光照条件下，容易分化产生维管等组织，不利于产生大量的愈伤组织）。

当愈伤组织分化出芽和叶时，一定要有光照，有利于叶片内叶绿素的合成。

（4）植物激素的使用

生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，两类激素的浓度及用量的比例等都会影响实验结果。

合作探究：

1.在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？

2．在组织培养过程中，诱导愈伤组织的培养基、诱导生芽的培养基和诱导生根的培养基的成分有什么不同？

3．诱导愈伤组织期间一般不需要光，后续培养过程中，为什么每日要给予适当时间和强度的光照？

4．若培养物取自植物的幼茎、叶片等含有叶绿体的部位，愈伤组织中是否会含有叶绿体？

练习

1．下面是植物组织培养过程示意图，相关说法正确的是（　　）

外植体

愈伤组织

长出丛芽

生根

移栽成活

A．上述植物组织培养的过程依据的生物学原理是植物细胞具有全能性

B．需要对外植体进行严格的灭菌处理，以防止杂菌污染

C．外植体若是月季的花药，则图中的①过程需要光照

D．外植体若是菊花的根尖组织，因细胞中没有叶绿体，故培养成的新植株叶片无色

2．为探究矮牵牛原生质体的培养条件和植株再生能力，某研究小组的实验过程如下图。

下列叙述正确的是（　　）

A．过程①获得的原生质体需悬浮在30%蔗糖溶液中

B．过程②需提高生长素的比例以促进芽的分化

C．过程③需用秋水仙素处理诱导细胞壁再生

D．原生质体虽无细胞壁，但仍保持细胞的全能性

拓展

（1）由愈伤组织进行细胞分化时，一般要先诱导其生芽，然后诱导其生根，可通过控制培养基中生长素和细胞分裂素的比例来实现。

（2）生长素和细胞分裂素用量的比例影响植物细胞的发育方向。

生长素用量/细胞分裂素用量

结果

比值高

有利于根的分化，抑制芽的形成

比值低

有利于芽的分化，抑制根的形成

比值适中

促进愈伤组织的形成

知识点三　植物体细胞杂交

1．植物体细胞杂交的原理

原生质体融合的过程利用了细胞膜的流动性，杂种细胞发育成杂种植株利用了植物细胞的全能性。

2．植物组织培养和植物体细胞杂交的比较

名称

植物组织培养

植物体细胞杂交

原理

植物细胞的全能性

细胞膜具有一定的流动性和植物细胞的全能性

过程

选材

选取根尖、茎尖、形成层部位最容易诱导脱分化

不同植物细胞融合后形成的杂种细胞

技术操作

脱分化、再分化等

除脱分化、再分化外，还要用酶解法去除细胞壁，用一定的方法诱导细胞融合

关系

植物组织培养是植物体细胞杂交的基础，植物体细胞杂交所用的技术更复杂

3.植物体细胞杂交过程中杂种细胞类型及检测方法

（1）诱导产物（假设用于杂交的两种植物细胞分别为A、B）

①未融合的细胞：

A和B。

②两两融合的细胞：

AA、BB和AB。

③多细胞融合体。

（2）检测方法：

对诱导产物中的细胞进行植物组织培养，然后根据得到的植物性状进行判断。

植物性状

结论

若只表现出一种植物的性状

未融合细胞

若得到的是具有两种亲本性状的植物

杂种植株

若得到的是两种亲本性状的植物，且一种植物的性状得到加强

多细胞融合体

若得到的是一种植物的性状，但是效果得到加强

同种细胞融合

合作探究：

（1）从结果上看杂种植株在遗传上有何特点？

从杂种植株的染色体组成上看属于何种变异？

（2）从新品种培育的角度分析，植物体细胞杂交技术最大的优点是什么？

（3）科学家采用体细胞杂交的方法得到了“番茄—马铃薯”杂种植物，但这种植物并没有地上结番茄，地下长马铃薯。

你如何解释这一现象？

练习

1．下面为“番茄—马铃薯”的培育过程示意图，有关叙述正确的是（　　）

A．获得a、b细胞需要胰蛋白酶和果胶酶

B．诱导a、b细胞融合的化学试剂一般用秋水仙素

C．a、b细胞融合为c细胞的原理是细胞膜具有流动性

D．d、e、f过程表示植物的组织培养过程，e、f分别为脱分化和再分化

2．下图是植物体细胞杂交过程示意图，如果A、B植物均为二倍体，据图分析回答：

（1）图中所示过程的原理有________________________________________。

（2）图中的①过程是______________________________________________。

（3）植物体细胞融合成功的标志是____________________，其产生与细胞内________（细胞器）有关。

（4）③和④过程分别是________和________过程。

则该杂种植株有________个染色体组。

（5）该技术最显著的优势是________________________________________。

技巧；体细胞杂交后细胞内染色体数目、染色体组数目及基因型的判断

体细胞杂交即两个细胞融合成一个细胞，不管染色体、基因型还是染色体组都是两亲本之和。

若一植物细胞含有2x条染色体，2个染色体组，基因型为Aabb，另一植物细胞含有2y条染色体，2个染色体组，基因型为ccDd，则新植株应为异源四倍体，其体细胞中染色体为（2x＋2y）条，4个染色体组，基因型为AabbccDd。

课堂练习

1．细胞的全能性是指（　　）

A．细胞具有各项生理功能

B．已分化的细胞能恢复到分化前的状态

C．已分化的细胞全部能再进一步分化

D．细胞仍具有发育成完整个体的潜能

2．植物组织培养过程中的脱分化是指（　　）

A．植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞的过程

B．未成熟的种子经过长期培养，长出幼苗的过程

C．植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程

D．取植物的枝芽培育成一株新植物的过程

3．在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的（　　）

A．消毒灭菌　　　B．适宜的温度

C．充足的光照D．适宜的养料和激素

4．（不定项）下列有关植物体细胞杂交的叙述，正确的是（　　）

A．有可能把两个植物体的优良性状集中在杂种植株上

B．需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁

C．利用聚乙二醇可以促进原生质体融合

D．植物体细胞杂交就是将不同的植物体细胞融合成杂种细胞

5．培养胡萝卜根组织可获得试管苗，获得试管苗的过程如图所示。

回答下列问题：

（1）利用胡萝卜根段进行组织培养可以形成试管苗。

用分化的植物细胞可以培养成完整的植株，这是因为植物细胞具有__________。

（2）步骤③切取的组织块中要带有形成层，原因是__________。

（3）从步骤⑤到步骤⑥需要更换新的培养基，其原因是________。

在新的培养基上愈伤组织通过细胞的________过程，最终可形成试管苗。

（4）步骤⑥要进行照光培养，其作用是__________________。

（5）经组织培养得到的植株，一般可保持原品种的__________，这种繁殖方式属于________繁殖。