医学微生物学实验报告答案.docx
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医学微生物学实验报告答案
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医学微生物学实验报告答案
篇一：
南医大医学微生物学实验报告总结优化版
脓汁和粪便标本中病原菌的检测
20xx级xx专业（x）班学号xx姓名xx
第x室第x组组员：
xx指导老师：
xx
[摘要]脓汁和粪便标本中有不同的病原菌。
本实验主要探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。
在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。
从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。
[引言]常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。
浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。
粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如ss、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。
本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌——金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。
1实验材料
1.1器材
打火机油性笔酒精灯接种环接种针污物盘普通冰柜隔水式电热恒温培养箱奥林巴斯cx21型生物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸硫酸纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子bo片吸水纸拭镜纸
1.2试剂药品
普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水
结晶紫卢戈碘液95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片血浆福氏志贺菌诊断血清
2实验方法与步骤
实验的总流程
细菌的分离培养
细菌纯培养
细菌的形态学检查细菌的生化试验细菌的血清学试验、结果分析
2.1培养基制备
干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→
1）平板培养基：
倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放
→4℃冰箱保存备用。
2）斜面培养基：
培养基趁热斜放→琼脂凝固以后，4℃冰箱保
存备用。
贴上标签后灭菌使用。
2.2空气与人体体表细菌学检查
2.2.1空气的细菌学检查
2.2.1.1实验方法
自然沉降法:
根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位
（colonyformingunit，cFu），可了解空气的污染情况。
2.2.1．1实验步骤：
每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点）→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
2.2.2人体体表的细菌学检查
甲乙常规洗手，丙丁标准洗手。
甲和乙、丙和丁共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细菌。
第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。
图1
2.3细菌的分离培养
2.3.1实验方法
平板划线法：
借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。
培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。
2.3.2实验步骤
接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红
美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果。
图2
2.4细菌的群体生长特性观察和纯化培养
2.4.1实验方法
斜面接种法：
是一种从已经生长好的菌种中挑取少量菌种移植到另一个斜面培养基的饭方法。
该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。
用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端。
2.4.2实验步骤
接种环烧灼灭菌→挑选平板上典型的四种单菌落（白色、黄色、紫黑色、粉红色）进行斜面接种纯培养→做好标记→接种环烧灼灭菌→斜面培养基置于37℃培养过夜→保存备用
2.5细菌的个体形态特征的观察
2.5.1实验方法:
革兰氏染色,肉汤接种法
2.5.2实验步骤
革兰氏染色：
取洁净载玻片→用灭菌操作后的接种环取（:
医学微生物学实验报告答案）生理盐水1-2环于玻片上→挑取细菌培养物少许与盐水轻轻抹匀→待涂片干燥后在酒精灯火焰外侧快速来回2-3回合→
结晶紫→初染1分钟→水洗→
卢戈碘液→媒染
1分钟→水洗→
95％乙醇→脱色约20秒钟→水洗→
稀释品红→复染1分钟→水洗→
吸干,镜检。
2.5.3肉汤接种法:
接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6小时
2.6药敏试验
2.6.1实验方法
纸片扩散法:
将含有定量抗菌素的纸片，平贴在已经接种了试验细菌的平板上。
纸片中的抗菌素吸收培养基的水分，溶解后不断向周
篇二：
医学微生物学》实验报告
《医学微生物学》实验报告一
1、紫外线杀菌试验：
描述实验结果，包括暴露在紫外线灯下的细菌生长情况和
被平皿盖遮盖处细菌生长的情况；分析并解释其原因。
暴露在紫外线灯下的细菌基本不生长，而被平皿盖遮盖处细菌正常生长。
紫外线具有杀菌作用，主要作用于DnA，使一条DnA链上的两个相邻的胸腺嘧啶以共价键结合，形成二聚体，干扰DnA的复制与转录，导致细菌的变异与死亡所以暴露在紫外线灯下的细菌死亡。
但是紫外线的穿透力较弱，可被普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸汽等阻挡，且紫外线只能沿直线传播，辐照能量低，穿透力弱，仅能杀灭直接照射到的细菌，因此被平皿盖遮盖处细菌正常生长。
2、药敏试验结果：
测试抑菌圈直径的大小，单位是mm。
0mm
对大肠杆菌最敏感的是（卡那霉素）；
对金黄色葡萄球菌最敏感的是（青霉素）。
篇三：
微生物实验报告思考题参考答案
实验一、微生物的简单染色思考题
1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？
应特别注意些什么？
答：
油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。
油镜使用过程中要注意两点：
（1）、使用后镜头的清洁：
镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度，用完油镜必须进行“三擦”（观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯（或者乙醇乙醚溶液）擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原）。
（2）、.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。
当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
2、使用油镜时，为什么必须用镜头油？
答：
在使用普通显微镜时，当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。
3、镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
答：
低倍镜视野比较大，能看到的范围大，容易找到观察的目标，然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。
实验二、革兰氏染色
（1）为什么必须用培养24h以内的菌体进行革兰氏染色？
答：
24h以内的菌体处于活跃生长期，菌体细胞壁具有典型特征，而处于老龄的革兰氏阳性细菌壁结构开始发生变化，染色时会被染成红色而造成假阴性
（2）要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？
哪一步是关键步骤？
为什么？
答：
应注意如下几点：
其一，选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性；其二，涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；
其三，脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性
（3）当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？
答：
当要确证未知菌的革兰氏反应时，可用已知菌进行混合涂片，使二者染色条件保持一致，如果已知菌的结果与预期相符，则证明操作操作正确，结果可靠。
实验三、微生物的显微镜直接计数法
1、在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？
答：
1）优点：
直观、快速、操作简单。
2）缺点：
不能区分死菌与活菌；
不适于对运动细菌的计数；
需要相对高的细菌浓度；
个体小的细菌在显微镜下难以观察；
实验四、微生物大小的测定
1、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？
为什么？
答：
相同；目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确等分的刻度，有把5毫米刻成为50等分或把10毫米长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，物象的放大倍数与每小格目镜测微尺所代表的长度在变化比例上是同步的，故而测定结果相同。
实验五、培养基的配置与高压蒸汽灭菌
1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌?
如何检查灭菌后的培养基是否无菌？
为什么要倒置培养？
答：
由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长系列而消耗养分和改变培养基的酸碱度所带来的不利影响。
将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可证明灭菌后的培养基无菌。
倒置培养的主要目的：
?
?
1）由于重力的作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需的营养物质，利于微生物生长；?
?
2）防止空气中微生物的污染培养基及培养物：
倒置时平板内的空气是不流动的,杂菌不会沉降到培养基表面,如果不倒置,很快平板周边会长起杂菌。
?
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3）倒置培养使琼脂里水分不易蒸发出去，而充分的保持琼脂的弹性与细菌容易繁殖和生存的环境。
如果不倒置，大概3天左右培养基就会出现龟裂等水分散失的情况。
而一些落菌等试验，需验证培养基无菌，就要先倒置培养48小时才可作为模板做落菌，水分散失是很重要的。
?
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2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？
为什么？
答：
一般而言，培养基的配置要注意如下几点原则：
1）、营养成分的配比：
碳源和氮源的比例（c/n）要适当；
2）、适宜的酸碱度（ph值）：
配制培养基时ph的调节；
3）、渗透压：
营养物质要有适合的浓度；
4）、培养基不能反复高温灭菌。
5）、称不溶性固形物时，应单独称，若量少的可以与无机盐一起称，但一定要混匀再分装；
6）、一般情况下培养基用自来水配制。
操作细节上则要注意：
1）、称药品用的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖
2）、调ph值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度
3）、分装时注意不要污染棉塞、试管口，以免染菌。
4）、及时灭菌，以免培养基及容器里的微生物生长繁殖消耗养分、改变酸碱度。
3、高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？
灭菌完毕后，为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀，开盖取物。
答：
1）在使用高压蒸汽灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
2）压力未降至“0”便开盖取物的可能后果：
压力锅内压力骤然降低，引起容器中的溶液喷出容器口导致污染或导致人员的烫伤。
实验：
化学因素对微生物的影响
1、利用滤纸片法测定化学消毒剂对微生物生长的影响时，影响抑菌圈大小的因素有哪些？
答：
微生物的种类；
化学消毒剂的含量；
培养的条件；
滤纸片的大小、厚度；
接种量的大小等。
实验：
霉菌的形态观察
1、你主要根据哪些形态特征来区分四种霉菌？
答：
1）菌丝特征：
青菌与曲霉菌丝与膈；毛霉与根霉则无；
2）菌丝的特化结构：
曲霉有足细胞，其它霉菌无；根霉有假根与匍匐枝，其它霉菌无；
3）孢子头特征：
青霉的孢子头为扫帚状；根霉与毛霉的孢子头为囊状；曲霉为菊花状孢子头。
实验：
四大类微生物菌落形态观察
1、请你从六个方面描述四大类微生物菌落形态的特征。
２、答：
总体可从各类微生物菌落的形状、大小、色泽、透明度、致密度、边缘着手描述它们的特征。
实验：
细菌特殊结构的染色
1、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因?
答：
1）营养缺乏，培养条件不适宜，芽孢杆菌群体形成抗逆体
2）培养时间太长，营养体已大部分形成芽孢且芽孢囊破裂游离出来。
2．组成荚膜的成分是什么?
涂片一般用什么固定方法，为什么?
答：
荚膜为粘液状或胶状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽；因为含水量高，遇热易失水变形，故而固定时采用自然晾干的方法固定。
实验：
酸奶
1、如果你利用生牛乳通过细菌自然发酵制造能饮用的酸牛乳，应控制在哪一时期？
答：
从牛乳酸败过程中细菌的生态演变过程来看，生牛乳的状态经历了几个阶段的变化：
1、牛乳ＰＨ中性，含丰富的乳糖——>乳酸ＰＨ下降；
2、引起蛋白质结块———>抑制了乳链球菌的繁殖
3、乳杆菌能耐受低ＰＨ，发酵乳糖————>ＰＨ更低
4、酵母菌在这低ＰＨ环境下利用乳酸生长———>乳糖、乳酸消失，ＰＨ上升；
5、假单胞菌、芽胞杆菌能产生蛋白酶，分解凝结的牛乳蛋白，当蛋白质被利用完毕，牛乳的分解也就完成了。
在第三阶段，也是生牛乳中乳糖被天然微生物充分发酵生成易被人体消化吸收的乳酸的时期，故而应控制在第三阶段。
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