①对的所需成份有良好的溶解性；②可使成份间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间,定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中,黏度较小；⑥展开后组分黑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制.一般来说,弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成,再根据需要加入甲醇、乙醇,乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性,以到达好的分离效果,适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于蒽醌、香豆素,以及一些极性较年夜的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂,由正丁醇和水组成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于极性很年夜的生物碱类化合物的分离.很多时候,展开剂的选择要靠自己不竭变换展开剂的组成来到达最佳效果.我们在实验中,为了实现一个配体与其他杂质有效分离,曾检验考试了很多种的溶剂组合,最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：
3.5：
0.1）混合溶剂.一般把两种溶剂混合时,采纳高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,到达最佳效果；如果没有分开的迹象（黑点较“拖”）,最好是换溶剂.对在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺,氨水,吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性.（选择所添加的碱性物质,还必需考虑容易从产物中除去,氨水无疑是较好的选择.）分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：
分歧厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细水平,酸性强弱分歧,从而招致产物在某个厂家的硅胶中分离效果很好,但在另一个厂家的就不成.溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响.温度,湿度对分离效果影响也很明显,在实验中我们发现有时同一展开条件,上下午的Rf截然分歧.
展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑,在进行薄层层析时,首先应该知道未知化学成份的类型,其极性的年夜致归属,从提取液或从色谱柱的流动相极性可知,另外某样品里含多种化学成份先按极性分歧年夜致分,然后细分,对分离未知的化学物质,展开剂的选择也是一个摸索的过程,不应该仅仅从展开剂考虑,多因素综合衡量！
溶剂：
层析过程中溶剂的选择,对组分分离关系极年夜.在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂,用于薄层或纸层析时常称展开剂.洗脱剂的选择,须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时,当被分离物质为弱极性物质,一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成份,则须选用极性溶剂为洗脱剂.如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉取代硅胶）,则洗脱剂的极性亦须相应降低.在柱层把持时,被分离样品在加样时可采纳于法,亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入.溶解样品的溶剂应选择极性较小的,以便被分离的成份可以被吸附.然后渐增年夜溶剂的极性.这种极性的增年夜是一个十分缓慢的过程,称为“梯度洗脱”,使吸附在层析柱上的各个成份逐个被洗脱.如果极性增年夜过诀（梯度太年夜）,就不能获得满意的分离.溶剂的洗脱能力,有时可以用溶剂的介电常数（ε）来暗示.介电常数高,洗脱能力就年夜.以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂,如硅胶、氧化铝.对非极性吸附剂,如活性炭,则正好与上述顺序相反,在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用,较在脂溶性溶剂中为强.
被分离物质的性质
被分离的物质与吸附剂,洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素,彼此紧密相连.在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下,各个成份的分离情况,直接与被分离物质的结构与性质有关.对极性吸附剂而言,成份的极性年夜,吸附住强.固然,中草药成份的整体分子观是重要的,例如极性基团的数目愈多,被吸附的住能就会更年夜些,在同系物中碳原子数目少些,被吸附也会强些.总之,只要两个成份在结构上存在分歧,就有可能分离,关键在于条件的选择.要根据被分离物质的性质,吸附剂的吸附强度,与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑.首先要考虑被分离物质的极性.如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯,或虽含氧但非极性基团,则需选用吸附性较强的吸附剂,并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱.但大都中药成份的极性较年夜,则需要选择吸附性能较弱的吸附剂（一般Ⅲ～Ⅳ级）.采纳的洗脱剂极性应由小到年夜按某一梯度递增,或可应用薄层层析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况.另外,能否获得满意的分离,还与选择的溶剂梯度有很年夜关系.现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系.如有多组分的混合物,象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份.如对C-27甾体皂甙元类成份,能因其分字中羟基数目的几多而获得分离：
将混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中,加于氧化铝的吸附柱上,采纳以下的溶剂进行梯度洗脱.如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝,由于硅酸镁的吸附性较弱,洗脱剂的极牲需相应降低,亦即采纳苯或含5％氯仿的苯,即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来.这一例子说明,同样的中草药成份在分歧的吸附剂中层析时,需用分歧的溶剂才华到达相同的分离效果,从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成份三者的相互关系.
（二）簿层层析：
薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法.一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上,形成一薄层进行层析时一即称薄层层析.其原理与柱层析基秘闻似.
1．薄层层析的特点：
薄层层析在应用与把持方面的特点与柱层析的比力.
2．吸附剂的选择：
薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同.主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细,一般应小于250目,并要求粒度均匀.用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高,以Ⅱ～Ⅲ级为宜.而展开距离则随薄层的粒度粗细而定,薄层粒度越细,展开距离相应缩短,一般不超越10厘米,否则可引起色谱扩散影响分离效果.
3．展开剂的选择：
薄层层析,当吸附剂活度为一定值时（如Ⅱ或Ⅲ级）,对多组分的样品能否获得满意的分离,决定于展开剂的选择.中草药化学成份在脂溶性成份中,年夜致可按其极性分歧而分为无极性、弱极性、中极性与强极性.但在实际工作中,经常需要利用溶剂的极性年夜小,对展开剂的极性予以调整.
实例谈薄层色谱展开剂选择
2007/12/0812:
18P.M.
实例谈薄层色谱展开剂选择
根据自己的几年薄层层析经验,参考药典等国家药品标准和有关文献,将2000版药典一部里部份有代表性的对比品的薄层层实例按展开剂极性排序,并对其规律做一些分析.以下的分析和介绍是总体描述性的,目的是快速、简便地选择展开剂.如果想了解展开剂选择的各种理论,请参考其他专著.#TfaMVME
选择展开剂,要依据溶剂极性和他们的混溶性,溶剂对被分析物的溶解性,以及被分析物的结构.这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相薄层,也不考虑板的活性.
列出溶剂极性参数表,方便以下比力展开剂.环已烷:
-0.2、石油醚（Ⅰ类,30~60℃）、石油醚（Ⅱ类,60~90℃）、正已烷:
0.0、甲苯:
2.4、二甲苯:
2.5、苯:
2.7、二氯甲烷:
3.1、异丙醇:
3.9、正丁醇:
3.9、四氢呋喃:
4.0、氯仿:
4.1、乙醇:
4.3、乙酸乙酯:
4.4、甲醇:
5.1、丙酮:
5.1、乙腈:
5.8、乙酸:
6.0、水:
10.2[1].
关于溶剂混溶性,一般根据相似相溶原则,需要注意,极性相差年夜的不混溶,比如正己烷与甲醇.多元展开剂,主体的两种溶剂不能混溶,就需要通过第三种溶剂来调和.比如：
石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的.
一般正相色谱,固定相为极性,被分析物质的极性越年夜,需要极性更年夜的展开剂.
了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得,很难获得它的极性指数.物质分子化学结构中,通常由较极性部份和非极性部份两部份.例如下面以苯丙烷为极性小部份,随着极性基团部份的增加,总体的极性就增加,展开剂极性也增加了.
,依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸.
相应展开剂分别为：
正己烷—乙醚—冰醋酸（5:
5:
0.1）、苯－冰醋酸－甲醇（30:
1:
3）、氯仿－甲醇－甲酸（9:
1:
0.5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:
6:
1）、醋酸丁酯－甲酸－水（7:
2.5:
2.5）.（由于薄层板、比移值分歧的原因,展开剂极性比力是相对的,其实不是绝对的后者年夜于前者）.
现在最重要的问题是,分歧化合物,怎么定它的极性,又用什么标准来定它对应的展开剂呢？
以下分开讨论分歧化合物极性情况及其对应的展开剂.
首先是极性较小的挥发性物质.比如：
龙脑：
石油醚（30～60℃）—醋酸乙酯（17:
3）、厚朴酚：
苯－醋酸乙酯（9:
1.5）、α-香附酮：
苯－醋酯乙酯－冰醋酸（92:
5:
5）、丹皮酚：
环己烷－醋酸乙酯（3:
1）,这类化合物,以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比力年夜的溶剂,通常起溶解和分离化合物的作用,而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂.为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响,适当加入添加剂,如有机酸或者有机碱.
极性较小的不挥发性物质.比如：
β-谷甾醇：
环己烷－醋酸乙酯－甲醇（6:
2.5:
1）或者环己烷－丙酮（5:
2）、熊果酸：
甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸（12:
4:
0.5）、齐墩果酸：
氯仿－甲醇（40:
1）、猪去氧胆酸：
氯仿－乙醚－冰醋酸（2:
2:
1）、年夜黄素：
苯—醋酸乙酯—甲醇（15:
2:
0.2）或者苯—乙醇（8:
1）、丹参酮ⅡA：
苯-醋酸乙酯-甲酸（40:
25:
4）、穿心莲内酯：
氯仿-无水乙醇（9:
1）、靛玉红、靛蓝氯仿－乙醇（9:
1）或者苯－氯仿－丙酮（5:
4:
1）.这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些,因为这类物质极性小的母核年夜,而极性年夜的基团通常可以形成氢键,比如羧酸、羟基.以上物质,母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加（尤其是呈现苯环）,极性基团的增加,都使极性增加,展开剂极性也增年夜.这个范围内的物质很多,一般展开剂年夜百分数的溶剂可以从环己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的顺序,依照极性要求选择.这里注意,异丙醇、正丁醇极性指数也比力小,在这范围的化合物很少用,因为粘性年夜、展开慢,造成黑点扩散；另外,羟基的氢键作用力也有晦气.调节Rf值的溶剂,从醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇.挥发性物质也有很多带羰基、羟基的,但从它的挥发性就可以明白,分子间作用力不强,另外,母核与石油醚、正构烷和苯的结构不同小,估计更容易脱离硅胶吸附,更快进入溶剂中,而不需要通过提高展开剂的极性.
皂苷类.人参皂苷：
氯仿－甲醇－水（65:
35:
10）10℃以下放置的下层溶液或正丁醇－醋酸乙酯－水（4:
1:
5）的上层溶液或氯仿－醋酸乙酯－甲醇－水（15:
40:
22:
10）10℃以下放置的下层溶液、芍药苷：
氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸（40:
5:
10:
0.2）、黄芩苷：
醋酸乙酯－丁酮－醋酸－水（10:
7:
5:
3）、橙皮苷：
苯—醋酸乙酯—甲酸—水（1:
12:
2.5:
3）的上层溶液、葛根素：
氯仿－甲
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