实验常用试剂缓冲液的配制方法.docx

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实验常用试剂缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法

1、1MTris-HCl□组份浓度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L

□配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCl□组份浓度1.5MTris-HCl（pH8.8）□配制量1L

□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer□组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L

□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠□组份浓度3M醋酸钠（pH5.2）□配制量100mL

□配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer□组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mM

Na2HPO4，2mMKH2PO4□配制量1L

□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵□组份浓度10M醋酸铵□配制量100mL

□配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚□配置方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，

同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS□组份浓度10％（W/V）SDS□配制量100mL

□配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH□组份浓度2NNaOH□配制量100mL□配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl□组份浓度2.5NHCl□配制量100mL

□配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5MNaCl□组份浓度5MNaCl□配制量1L

□配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose□组份浓度20％（W/V）Glucose□配制量100mL

□配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI□组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0），10mM

EDTA，50mMGlucose

（质粒提取用）□配制量1L

□配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（pH8.0）25mL0.5MEDTA（pH8.0）20mL20％Glucose（1.11M）45mLdH2O910mL2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

15、SolutionII□组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDS（质粒提取用）□配制量500mL

□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10％SDS50mL2NNaOH50mL2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、SolutionIII□组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH（质粒提取用）□配制量500mL

□配置方法1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc147gCH3COOH57.5mL2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5MEDTA□组份浓度0.5MEDTA（pH8.0）□配制量1L

□配置方法1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1MDTT□组份浓度1MDTT□配制量20mL

□配置方法1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

19、10mMATP□组份浓度10mMATP□配制量20mL

□配置方法1.称取121mgNa2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin□组份浓度100mg/mlAmpicillin（100mg/ml）□配制量50mL

□配置方法1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG□组份浓度24mg/mLIPTG（24mg/mL）□配制量50mL

配置方法1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X-Gal□组份浓度20mg/mLX-Gal（20mg/mL）□配制量50mL

□配置方法1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。

3.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，1％（W/V）NaCl□配制量1L

□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract1％（W/V）NaCl0.1mg/mLAmpicillin□配制量1L

□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。

7.4℃保存。

6、TB培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone2.4％（W/V）YeastExtract0.4％（V/V）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO4□配制量1L

□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72M

K2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.4℃保存。

7、TB/Apm培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone2.4％（W/V）YeastExtract0.4％（V/V）Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin□配制量1L□配置方法

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin（100mg/mL）。

6.均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract0.05％（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl2□配制量1L□配置方法

1.配制250mMKCl溶液。

在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。

2.配制2MMgCl2溶液。

在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone20gYeastExtract5gNaCl0.5g4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至1L。

8.高温高压灭菌后，4℃保存。

9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。

9、SOC培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone0.5％（W/V）YeastExtract0.05％（W/V）NaCl2.5mMKCl10mMMgCl220mM葡萄糖□配制量100mL□配置方法

1.配制1M葡萄糖溶液。

将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤除菌。

2.向100mLSOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均匀混合。

3.4℃保存。

10、2×YT培养基□组份浓度1.6％（W/V）Tryptone，1％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）NaCl□配制量1L

□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone16gYeastExtract10gNaCl5g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

11、Φb×broth培养基□组份浓度2％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，0.5％（W/V）MgSO4•7H2O□配制量1L

□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone20gYeastExtract5gMgSO4•7H2O5g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加1NKOH，调节pH值至7.5。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

12、NZCYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract0.1％（W/V）CasaminoAcid1％（W/V）NZ胺0.5％（W/V）NaCl0.2％（W/V）MgSO4•7H2O□配制量1L

□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

YeastExtract5gCasaminoAcid1gNZ胺10gNaCl5gMgSO4•7H2O2g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4..加水离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压后，4℃保存。

13、NZYM培养基□组份浓度0.5％（W/V）YeastExtract1％（W/V）NZ胺0.5％（W/V）NaCl0.2％（W/V）MgSO4•7H2O□配置方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与NZCYM培养基相同。

14、NZM培养基□组份浓度1％（W/V）NZ胺0.5％（W/V）NaCl0.2％（W/V）MgSO4•7H2O□配置方法NZM培养基除不含YeastExtract（酵母提取物）外，其他成份与NZYM培养基相同。

15、一般固体培养基的□配置方法1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。

配制Agar（琼脂：

铺制平板用）15g/LAgar（琼脂：

配制顶层琼脂用）7g/LAgarose（琼脂糖：

铺制平板用）15g/LAgarose（琼脂糖：

配制顶层琼脂用）7g/L2.高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。

3.待培养基冷却至50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素），摇动容器充分混匀。

4..铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养皿）。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度1％（W/V）Tryptone

平板培养基0.5％（W/V）YeastExtract1％（W/V）NaCl0.1mg/mLAmpicillin0.5％（W/V）IPTG0.04mg/mLX-Gal1.5％（W/V）Agar□配制量1L

□配置方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone10gYeastExtract5gNaCl10g2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。

8.4℃保存平板。

17、TB/Amp/X-Gal/IPTG□组份浓度

1.2％（W/V）Tryptone

平板培养基2.4％（W/V）YeastExtract0.4％（W/V）Glycerol17mMKH2PO4

72mMK2HPO40.1mg/mLAmpicillin0.024mg/mLIPTG0.04mg/mLX-Gal1.5％（W/V）Agar□配制量1L

□配置方法1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

Tryptone12gYeastExtract24gGlycerol4mL3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加水离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。

5.高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6.加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mLAmpicillin（100mg/mL）、1mLIPTG（24mg/mL）、2mLX-Gal（20mg/mL）后均匀混合。

7.铺制平板（30～35mL培养基/90mm培养基）。

8.4℃保存平板。

生物化学实验常用试剂的配制方法

1、0.5mol/L氢氧化钠溶液□组份浓度0.5mol/L□配制量2L□配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。

2.用去离子水溶解并稀释至2L。

2、0.5mol/L盐酸溶液□组份浓度0.5mol/L□配制量2L□配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。

2.用去离子水稀释至2L。

4、0.2％葡萄糖标准溶液□组份浓度0.2％□配制量1L

□配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。

2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。

3.准确称取葡萄糖2.000g。

4.用去离子水溶解并定容至1L5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清□组份浓度250μg/mL白蛋白标准液□配制量2L

□配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。

3.4℃保存。

6、Folin试剂甲

□配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中，加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。

2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中，加入0.25g硫酸铜•5水，溶解。

3.将1：

2：

去离子水按20：

4：

1的比例混合即可。

4.4℃保存，可用一周。

7、Folin试剂乙□配置方法

1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g，钼酸钠•2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，浓盐酸25mL，充分混合。

2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL及数滴溴。

3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。

4.于棕色瓶中保存，可使用多年

注意：

上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释18倍，使之浓度为0.1mol/L略高。

这种稀释18倍后的Folin试剂乙就是上文称之为的“应用液”。

Folin试剂乙贮备液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。

用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。

8、DNS试剂

□配置方法1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。

（3，5-二硝基水杨酸试剂）2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。

3.待其完全溶解，用去离子水稀