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DNA电化学传感器的研究进展图文

第２０卷第ｚ期

２００７年６月聊城大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＬｉａｃｃｈｅｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．）Ｖｏｌ２０Ｎｏ．２Ｊｕｎ．２００７

ＤＮＡ电化学传感器的研究进展

王桂香”李衍飞＂王文鑫¨马升勇”贾文丽２’王怀生２’

（”泰山学院材料与化学工程系，泰安，２７１０２１；”聊城大学化学化工学院，分析化学研究所，聊城２５２０５９）

摘要介绍了脱氧棱糖核酸（ＤＮＡ）电化学传感嚣的原理并重点评速了ＤＮＡ在不同材料电极

表面的固定化技术，对比了吸附法、共价键合法、自组装法、亲和素一生物素反应系统固定法以厦组

合法固定ＤＮＡ在构建ＤＮＡ电化学传感嚣中的特点．参考文献６４篇．

关键词ＤＮＡ电化学传感器，固定，电极，综述

中图分类号０６４６文献标识码Ａ文章编号１６７２—６６３４（２００７）０２—００４８—０６

ＤＮＡ是一类重要的生命物质，是太多数生物体遗传信息的载体，对ＤＮＡ的研究是生命科学研究领域中极为重要的内容．随着人类基因组计划的顺利实施，基于ＤＮＡ探针的基因传感器、基因芯片的研究正成为基因组研究的一个热点．ＤＮＡ电化学传感器是用电化学手段选择性检测ＤＮＡ的生物传感器ｔ由已知的ＤＮＡ片断和电活性指示剂构成．利用电活性分子（杂交指示剂）来指示杂交前后信号变化，选择性地识别靶序列．电化学ＤＮＡ传感器与通常的标记（放射性同位素标记、荧光标记等）探针技术相比，不仅选择性好、灵敏度高、响应快、操作简便及价格低廉，而且有无可比拟的分离纯化基因的功能．故可望用于ｌ临床快速检测基因疾病，探讨各种因素引起的ＤＮＡ损伤程度和可能的突变机理以及以ＤＮＡ为作用靶的药物研究“Ｊ．１蹦脯样雠绷

∞业（）警ｆ鼹ＤＮＡ电化学传感器是由一个支持ＤＮＡ片ＶＶ

ｋ．／。

‘单≥Ｎ＾片断剂饰到电极表面，构成ＤＮＡ修饰电极，由于电极图１ＤＮＡ电化学传寤嚣原理示意图上的探针ＤＮＡ与溶液中的互补链（即靶序列）杂交的高度序列选择性，使得ＤＮＡ修饰电极具有极强的分子识别能力．ＤＮＡ探针分子与靶序列杂交，在电极表面形成ｄｓ—ＤＮＡ，从而导致杂交前后电极表面ＤＮＡ结构的改变，这种杂交前后的差异可用杂交指示剂来识别，从而达到检测的目的．ＤＮＡ电化学传感器具有快速、灵敏和价廉等优点，是目前ＤＮＡ传感器中最成熟的一种．其工作原理如图１．

２ＤＮＡ在电极表面的固定化方法及其特点

ＤＮＡ修饰电极是ＤＮＡ电化学传感器的一个重要部分．将ＤＮＡ修饰到电极上的方法，文献报道主要集中在以下几种方法，即吸附、共价键合、自组装、亲和素一生物素反应系统固定法和组合法等．

基金项目：

泰山学院引进人才项目（Ｎｏ．Ｙ０５—２—０３）

收稿日期：

２００７－０１．１５

纛（－

ｖ双慝瞄圃厂＼一化一慷圆一～～一一一一～一一一一～一一㈣篓喜训一一

第２期王桂香等：

ＤＮＡ电化学传感器的研究进展４９２．１吸附法

Ｐｓｌｅ｛ｅｋ是最早从事核酸电化学的研究者．他利用核酸能在汞电极和高秩热解石墨电极（ＨＯＰＧＥ）表面产生强烈的吸附，发展了一种简便制备核酸修饰汞电极的方法［２］．该方法只需要５～１０ｖＬ的核酸溶液，便得到稳定的核酸修饰汞电极．但是，由于是液态电极，用作传感器很不方便；吴金添口３等以银基汞膜电极（ｓＢＭＦＥ）来代替一般的悬汞电极（ＨＭＤＥ）和滴汞电极（ＤＭＥ），研究了ＤＮＡ在该电极上的吸附，发现由于ＳＢＭＦＥ的刚性，ＤＮＡ较难在ＳＢＭＦＥ上吸附．随表１基于吸附方式固定ＤＮＡ的骼悼电撮着研究的发展，现在的吸附法可通过物理吸附、化学吸

附和恒电位吸附来实现．Ｐａｎｇｍ等将ｓｓＤＮＡ或ｄｓＤ－

ＮＡ溶液直接滴至新抛光的玻碳电极表面，涂匀，空气

中自然晾干，无菌二次水冲洗，充分浸泡，即得到几乎

为单分子层的ＤＮＡ修饰电极．Ｗａｎｇ口３等利用恒电位

富集方法将ＤＮＡ探针修饰到碳糊电极上，他们先将

电极在＋１．７Ｖ下活化ｌｒａｉｎ，然后将电极浸入含有

ＤＮＡ的电解质溶液中在＋０．５Ｖ吸附富集２ｍｉｎ即

可．Ｂｒｅｔｔ【６３等在较正电位１．３Ｖ下，利用恒电位富集方

法将变性的ＤＮＡ修饰到玻碳电极上．其他通过这三

种方式的吸附法举例见表１．

除了以上所述之外，吸附法还可通过静电吸附和ＬＢ膜技术来实现ｏ“．Ｌｉｃ”］、Ｆａｎｇ口“、周家宏Ｄ”等分别利用带正电荷的聚毗咯、阳离子聚合物壳聚糖和聚赖氨酸将单链ＤＮＡ固定在电极上，大大提高了ＤＮＡ的固定效率．Ｌａｎｇｍｕｉｒ—Ｂｌｏｄｅｇｅｔｔ（ＬＢ）膜是指水和空气界面形成的有序排列的单分子膜．一般由两亲分子构成，浸入水中时，亲油一端伸向空气，构成排列有序的单分子层，完整转移至固体介质表面，即成ＬＢ膜．ＬＢ膜技术可在固体表面形成单分子层的生物膜，并根据需要实现分子层的可控积累，即对膜厚的精确控制．在电极表面，一般通过ＬＢ膜拉膜设备得到ＬＢ膜．由于ＤＮＡ的水溶性，必须应用一些特殊的铺展方法．如Ｓａｓｔｒｙ口＂和ＮｉｃｏｌｉｎｉＥＺ３］等使用ＬＢ膜技术将十八烷基胺单分子层转移至固体基质，利用其静电吸附作用固定了ＤＮＡ．吸附法的优点是方法简单，操作条件温和；不足之处是ＤＮＡ与固体表面结合力弱，在表面上进行任意取向的不规则分布，故使制得的修饰电极容易发生ＤＮＡ解脱，灵敏度低，选择性差．该法得到的ｓｓＤＮＡ修饰电极不利于分子杂交．

２．２自组装（ｓｅｌｆ—ａｓｓｅｍｂｌｙ，ＳＡ）法

自组装法就是基于分子的自组作用，在固体表面自然形成高度有序的单分子层的方法．在核酸技术中，一般是利用一端带琉基的ＤＮＡ片段，在金电极表面上形成自组装单分子膜来固定核酸．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ等［２“首次在含２０个碱基ｓｓＤＮＡ的５’端修饰ＨＳ（ＣＨｚ）：

一，将预处理过的金电极浸入连有琉乙基的ＤＮＡ探针溶液中，４℃持续搅拌１２ｈ，将探针ＤＮＡ固定到金电极表面，用此ＤＮＡ电极对ＰＶＭ６３２的ＰａｔＩ片段上的致癌基因Ｖ—ｍｙｃ进行检测，对目标ＤＮＡ的检出限高达１０－１６ｇ／Ｌ．ＯｋａｈａｔａＤ”等通过５７末端连有巯丙基的１０个碱基的ＤＮＡ探针固定到金电极表面．Ｍａｅｄａｏ订等利用ｄｓ—ＤＮＡ的５１末端的磷酸基与２一羟乙基二硫化物（ＨＥＤＳ）的羟基反应生成磷酸酯键，将反应混合物通过凝胶柱分离，得到纯的５’末端修饰的ｄｓＤＮＡ，再通过一ＳＨ将修饰ｄｓＤＮＡ固定于金电极表面，得到ＤＮＡ修饰电极．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ等ｏ”在ｓｓＤ—ＮＡ５’末端修饰巯乙基，通过巯基将ｓｓＤＮＡ固定在金电极上．ＩｔｏⅡ”等先合成带琉基基团ＤＮＡ探针，然后将其组装到金电极上．Ｎａｋａｎｏ啪１等用”硫代己基修饰２０链节的低聚核苷酸５’端后，通过自组装法修饰到金电极上．Ｔｏｎｙａ［５０３等利用巯基衍生物将单链ＤＮＡ（５，．ＨＳ一（ＣＨ：

）６－ｓｓＤＮＡ一３’）固定到金电极表面来研究ＤＮＡ探针的特性，发现该种ＤＮＡ探针修饰的表面稳定，杂交反应完全可逆，并有特异性．Ｂａｒｄ等的修饰方法ｏ”虽然也是通过一ＳＨ在金表面的自组装，但与以上几种相比有显著的区别．他们先将４一巯基丁基磷酸（ＭＢＰＡ）在纯乙醇中固定到硅晶片的金膜上，然后再与Ａ１３＋反应ｔ形成一层包含Ａｌ”的膜，再通过ＡＩ”与ＤＮＡ之间的作用将ｓｓＤＮＡ固定到电极上．自组装膜法得到的ｓｓＤＮＡ／ＣＭＥ表面高度有序，稳定

聊城大学学报（自然科学版）第２０卷

性好，在适当的固定密度下，对互补ＤＮＡ有很好的杂交效率；但它对巯基修饰的ＤＮＡ纯度要求较高，分离提纯操作繁琐，由于大的亲水性核酸基团，也较难产生一个紧密堆积表面，并且有一定非特异性吸附结合．

２．３共价键合法

共价键合法是通过形成共价键（如：

酰胺键、酯键、醚键等）使

ＤＮＡ固定到支持电极表面．首先

活化预处理支持电极表面，引人

所需活性基团（如：

一ＮＨｚ，一

ＣＯＯＨ，一ＯＨ等），或衍生核苷

酸，使其带上合适的功能团，随后

用双官能团试剂或偶联活化剂联

结支持电极与衍生ＤＮＡ．目前通

过巯基（一ＳＨ）在Ａｕ表面自组装

制备ＤＮＡ修饰电极的方法被广

泛采用，但该修饰方法存在着一

些问题，诸如一ＳＨ修饰的ＤＮＡ

难以合成，且需要分离提纯，操作

表２基于共价键合方式同定ＤＮＡ的悔体电撮

繁琐；巯基化合物结合ＤＮＡ后，篓；三；妻；嘉瑟羞！

ｉ嚣ｉ篙Ｅ盐Ｓ酸，７幽－氨萎筹萎：

！

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亚２，胺２－：

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笺醇－ｚ；，其体积大幅度增加，故在Ａｕ表ＳＰＥ：

屏椐印９４电楹。

ＣＮＴ：

碳纳米警

面自组装比较困难．基于以上问题，陆琪等０３采用先进行一ＳＨ化合物自组装，得到自组装单分子层（ＳＡＭ）．再在ＳＡＭ上共价键合固定ＤＮＡ的方法制备ＤＮＡ修饰电极．刘盛辉等［ｓ２－３４Ｊ用５％（Ｖ／Ｖ）３一氨基丙基三氧基硅烷（ＰｒＮＨｚ，硅烷ＩＩ）在石墨电极表面硅烷化以导人氨基（一ＮＨｚ），在ｐＨ一６，０的咪唑缓冲溶液中，用ＥＤＣ作为偶联活化剂，ｓｓＤＮＡ的５’端磷酸基与电极表面活化的一ＮＨ：

形成磷酸氨基酯键，从而将ｓｓＤＮＡ共价固定在电极表面．其他共价固定法见表２．共价键合法制备ＤＮＡ修饰电极，能得到稳定的修饰层，易进行分子杂交，但由于电极表面反应活性位点少，表面合成又是异相反应，故固定的ＤＮＡ量少，响应信号小．

２ｔ４亲和素一生物素反应系统固定法・～

生物索（Ｂｉｏｔｉｎ）是生物体内分布广泛的一种羧化酶的辅酶，一端的・・羧基通过单一、温和的生化反应能与酶、蛋白质、抗体、ＤＮＡ等通过化学Ｉ：

鑫—ｋ

合物．亲和常数为１０１５Ｌ／ｍｏｌ，这种极强的专一性亲和力，在生物分子的图２亲和紊一生物索反应诸固定固定化中意义重大．一般是将亲和素共价偶联［（６－４９］或通过静电作用［４９，５０］ＤＮＡ原理示意图

吸附到支持物上，随后将生物素连接的ＤＮＡ通过生物素与亲和素之间的亲和作用而固定（见图２）．Ｍａｒ．ｒａｚｚａ””和隋森芳““分别直接用电极吸附和先在电极表面移上生物素化的二棕榈酸酯酰乙醇胺单分子层吸附亲和素，再固定生物紊一ＤＮＡ．用共价偶联的方法固定亲和素比直接吸附亲和素有更好的稳定性及重现性““．Ｐａｎｔａｎｏ口“、牟颖”“、Ｘｉ【ｓ”等已分别利用活性有机基团作用在氨基化和羧基化的电极上共价结合生物素，再通过生物素一亲和素作为生物分子桥固定ＤＮＡ．Ｃｏｓｎｉｅｒ等““在铂电极上，用衍生了吡咯功能团的生物素电聚合成聚（ｐｙｒｒｏｌｅ一生物素）膜，以亲和作用固定生物素一ｓｓＤＮＡ．基于亲和素一生物索反应系统固定生物分子的方法凭借简便、温和、高效的特点，在生物传感器领域中越来越受到重视．

第２期王桂香等：

ＤＮＡ电化学传感器的研究进展５１２．５组合法

组合法就是将化学修饰剂与电极材料混合以制备组合修饰电极．由于碳糊电极的可塑性，适用于组合法修饰．Ｍｉｌｌａｎ［『５７１等将１８一烷基胺或１８烷基酸混入碳糊中，得到化学修饰的碳糊电极，然后在ＥＤＣ的存在下，通过１８一烷基胺的氨基与８５一ＤＮＡ的５’末端的磷酸基形成磷酰氨键．将ＤＮＡ固定到电极上；或者在ＥＤＣ和ＮＨＳ存在下，通过１８烷基酸与ＳＳ—ＤＮＡ的ｄＧ残基结合，从而将ＤＮＡ修饰到电极上．周剑章“０１等和Ｂａｒｄ［ｓｖｓｏ］分别通过巯丁基磷酸和阳离子聚电解质一聚二烯丙基二甲基胺氯化物在金电极上有序自组装，静电固定ＤＮＡ探针．姜雄平等“”用Ｎ一乙酰半胱胺酸在金表面的自组装，把亲和素共价结合于金表面，再固定生物紊标记ＤＮＡ．Ｇａｊｏｖｉｃ—Ｅｊｃｈｅｌｍａｎｎ等“２３先在香豆素聚合过程中搀杂亲和素，然后固定了生物素标记的ＤＮＡ．林琳“”将铂电扳表面，再利用十八烷基胺的自组作用形成正电荷中心，以静电方式固定ｓｓＤＮＡ．方禹之等““先在金电聚合一层聚吡咯极表面电沉积一层ＺｒＯ：

修饰层，利用ＺｒＯ。

的亲氧性，成功固定了５＇－ＰＯ．一ＤＮＡ．

３ＤＮＡ固定化研究趋势

ＤＮＡ在电极表面的固定化不仅是构建电化学ＤＮＡ传感器的基础，也是未来ＤＮＡ生物传感器芯片制作的核心技术，所以对ＤＮＡ的固定化的深入研究依然是一项迫切的任务．今后的研究将会在以下几个方面有所发展：

（１）电板结构的优化，寻求ＤＮＡ在电极表面固定的新方法及固定ＤＮＡ的新材料；（２）电分析化学技术与其他技术相结合，发展响应更灵敏、迅捷，操作简便的ＤＮＡ传感器；（３）进一步拓展ＤＮＡ电化学传感器的应用范围，使之渗透到各个方面；（４）致力于ＤＮＡ电化学传感器的人工智能化的研究，实现ＤＮＡ电化学传感器的微型化、自动化、智能化．

！

参考文献

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ｔｒｏｄｅｓｃＪ］．Ｊ．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．．１９９４。

３６６：

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ａｇｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｍｏｄｉｆｉｅｄｗｉｔｈＤＮＡｐｒｏｂｅｓａｎｄＩｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｄｙｅＥｌｌ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．．１９９４，６６（２１）１３８３０～３

８３３．［９］陆或．庞代文．胡探．等．ＤＮＡ修饰电极的研究一Ｖｌｌ其竹健台和吸附ＤＮＡ．ＳＡＭ／Ａｕ隹饰电极的制备足表征［Ｊ］．中国科学（Ｂ

辑）ｔ１９９９．２９（４）ｔ“ｌ～３４７．

［１０３周剑章．是玲玲．董萄晕，等长髓ＤＮＡ在盘基庇上的固定化和电化学标记Ｄ］．电化学．２００１，７（３）。

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［１１］ＷＡＮＧＨＳ．ＷＡＮＧＧｘ－ＰＡＮＱｘ．Ｓｔｕｄｙ

ｏｎｔｈｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｏｉｌｔｈｅｓｏｌ－ｇｅｌｄｅｒｉｖｅｄｎｓｎｏｐｏｒｏｕｓｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ－ｐｏｌｙｖｉｎｙｌａｌｃｏｈｏｌｈｙｂｒｉｄｍａｔｅｒｉａｌｃｏａｔｅｄｏｎｇｌａｓｓｙｃａｒｂｏｎｅｌｅｃｔｒｏｄｅ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａｌｙｓｉｓ．２００５．１７（２０）：

Ｉ

８５４－Ｉ９６０，［１２３ＸＵＣ．ＣＡｌＨ．ＨＥＰ－ｅｔａ１．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡ

ｕｓｉｎｇｄＤＮＡｐｒｏｂｅｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈａｍｔｎｏｆｅｒｒｏｃｅｎｅ．ｎｄｅｈｌｔｏｓａｎｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｗｉｔｈｓｓＤＮＡＣＪ］．Ａｎａｌｙｓｔ．２００１．１２６（１）ｌ６２～６５．

［１３］ＥＲＤＥＭＡ，ＫＥＲＭＡＮＫ．ＭＥＲＩＣＢ．ｅｔａ１．ＤＮＡｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｈｌｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔＤＮＡ

ｓｅｑｕｅＢｅｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏａｎａ［ｙｓｌｓ．１９９９．１１（８）ｔ５８６～５８７．

［１４］ＬＯＡＮＮＯＵＡＫ．ＰＡＮＴＡＺＡＫ［ＡＡ．ＧＩＲＯＵＳＩＳＴＨ．ｅｔａ１．ＤＮＡｈｉｏｓｅｍｏｒｂａｓｅｄｏｒｌｃｊｒｂｏｎｐａｓｔｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓｍｏｄｉｆｉｅｄｈｙｐｏｌｙｍｅｒ

ｍｕｈｉｐｌｓｙｅｒ［Ｊ］．Ｅｌｅｚｔｒｏａｎａ］ｙｓｉｓｒ２００５．１８（８）：

４５６～４６４．

［１５３ＨＡＳＨＩＭＯＴＯＫ，ＩＴＯＫ．ＩＳＨＩＭＯＲＩＹ．ＮｏｖｅｌＤＮＡ”ｎ￥ｏｒｆｏｒｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ

ｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｓｉ．ＣｈｉｍＡｅｔａ．．１９９４．２８６（２）Ｉ

２１９～２２４．［１６］ＸＵｃ．ＣＡＩＨ．ＸＵＱ．ｅｔａ１．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｉｎｇｌｅｉｔｒａｎｄｎｄＤＮＡｏｎｃｈｉｔｏｓａｎ—ｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅａｎｄｉｔｓａｐｐｌｌｃａｔｉｏｎｔｏｔｈｅ，ｅ－

５２聊城大学学报（自然科学版）第２０卷

ｑｎⅢ．ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ［Ｊ］．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．．Ｚ００１，３６９（５）：

４２８４４３２．［１７］ＬＩＵＪＦ，ＲＯＵＳＳＥＬＣ－ＬＡＧＧＥＲＧ・ｅｔａ１．ＡｎｔｉｏｘｌｄａｎｔｓｅｎｓｏｒｓｂａｓｅｄｏｎＤＮＡ—ｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓＥｊ］．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．．２００５．７７：

７６８７—７

８９４．［１８］蔡宏，棘颍．何品刚・等脱氧柱糖核睦在电极表面的固定化研究进展口］．分析化学．２００４，３２（９）：

８１５～８２０．

［１９］ＬＩｚ・ＷＡＮＧＨＤ，ＤＯＮＧＳＪ・ｅｔｎｌＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ

ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＤＮＡａｄｓｏｒｂｅｄｏｎｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇｐｏｌｙｍｅｒｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅ［Ｊ］．ＡｍｌＳｅｉ．，１９９７．１３：

３０５～３１０．

［２０］ｘｕｃ・ＣＡＩＨ・ＨＥＰＧ・ｅｔａ１．Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅ＼ｌｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡ

ｕｓｉｎｇａＤＮＡｐｒｏｂｅｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈａｍｉｎｏｆｅｒｒｏｃｅｎｃａｎｄｃｈｉｔｏｓａｎｍｏｄｉｆｉｅｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｗｉｔｈｓｓＤＮＡ［Ｊ］Ａｎａｌｙｓｔ．２００１．１２６（Ｉ）１６２～６５．

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ｂｙｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｉｍｍｏｂｉＩｉｚａｔｌｏｎｏｆｏｌｌｇｏｎｕｃｌ∞ｔｌｄｅｓａｔｔｈｅａｉｒ—ｗａｔｅｒｉｎｔｅｒｆａｃｅ［Ｊ］．Ｌａｎｇｍｕｉｒ．２０００．１８（２４）：

９１４２～９

１４６．［２３］ＮＩＣＯＬＩＮＩＣ．ＥＲＯＫＨＩＮＶ．ＦＡＣＣＩＰ，ｔｔａ１．ＱｕａｒｔｚｂａｌａｎｃｅＤＮＡ，ｅｎｓｏｒＵ］．Ｂｉｏｓｅｎｓ．Ｂｉｏ￡ｌｅｃｔｒｏｎ．．１９９７，１２（７）；６１３～６１８，

［ｚ４］ＨＡＳＨＩＭＯＴＯＫ・ＩＴＯＫ・ＩＳＨＩＭＯＲＩＹＳｅｑｕｅｎｃｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈ

１ｇｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｍｏｄｉｆｉｅｄｗｉｔｈＤＮＡｐｒｏｂｅｓａｎｄ＾ｎｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｄｙｅ［Ｊ］．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．．１９９４．６６（２１）ｔ９８３０～３

８３３．［２５］０ＫＡＨＡＴＡ

Ｙ－ＭＡＴＳＵＮＯＢＵＹ—ＩＪＩＲＯＫ，ｅｔａ１．Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏｎ５ｑｕａｒｔｚｃｒｙｓｔａｌｍｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ［Ｊ］．Ｊ．Ａｍ．ＣｈｅｍＳｏｃ．．１９９２．１１４（２１）：

８２９９～８３００［２６］ＭＡＥＤＡＭ，ＮＡＫＡＮＯＫ．ＵＣＨＩＤＡｓ．ｅｔａｌＭｇ“－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｏｄｅｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇｄｏｕｂｌｅ－ｈｅｌｉｃａｌＤＮＡＢｓｒｅｃｅｐｔｉｖｅｅｎｔｈｙ［Ｊ］．ｃｈ‰

Ｌｅｔｔ，１９９４，】Ｏ｛】８０５～１８０８．

［２７］ＨＡＳＨＩＭＯＴＯＫ－ＩＴＯＫ．ＩＳＨｌＭＯＲＩＹ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈ３ｇｏｌｄｅｌｅｃｔｒｏｄｅｍｏｄｉｆｉｅｄｗｉｔｈＤＮＡｐｒｏｂｅｓａｎｄ∞ｅＩｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａＩＩｙａｃｔｉｖｅｄｙｅ［Ｊ］．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９４．６６（８１）１３８３０～３

８３３．［２８］ＩＴＯＫ．ＨＡＳＨＩＭＯＴＯＫ．ＩｓＨｌＭＯＲｌＹ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｆｏｒｓｏｌｉｄ—ｐｈａｓｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ

ｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｄｉⅡｚｒｅａｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｂｉｎｄｅｒｔｏｈｙｂｒｉｄｓｕｓｉｎｇａｑｕａｒｔｚｃｒｙｓｔａｌｍｉｃｒｏｂａｌａｎｅｅ［Ｊ］．Ａｎａｌ．Ｃｈ［ｍ．Ａｃｔｓ．，１９９６．３２７

１９９～３５．［２９］ＮＡＫＡＮＯＫ．ＭＡＥＤＡＭ．Ｂｉｏａｆｆｌｎｉｔｙｓａｖｏｒ

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４５５～

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８

９１６＾＿８９ＺＯ［４１］［４２］［４３］［４４］ｘｕｘＨ，ＢＡＲＤＡＪ．Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｈｙｂｒｉｄｉ盈ｔｉｏｎｏｆＤＮＡｏｉｌａｎａｌｕｍｉｎｕｍ（ＩＩＩ）Ⅱｌｋａｎｅｂｉ５ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｔｈｉｎｆｉｌｍｗｉｔｈｅｌｅｅｔｒｏｇｅｎｅｒ．ａｔｅｄｅｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［ｊ］．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｅ．．１９９５，１１７（９）１２６２７～２９３１．

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ＹＡＭＡＧＵＣＨＩＳ．ＳＨＩＭＯＭＵＲＡＴ，ＴＡＴＳＵＭＡＴ．ｅｔａ１．Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ．ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ．ｓｏｄｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅ

ｕ，ｅｏｆｑｕａｒｔｚｃｒｙｓｔａｌｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｓ［Ｊ］Ａｎａｌ．Ｃｈｅｒａ．，１９９３．６５（１４）１１９２５～ｉ

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