板蓝根抗病毒有效部位中的化学成分.docx
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板蓝根抗病毒有效部位中的化学成分
板蓝根抗病毒有效部位中的化学成分
板蓝根抗病毒有效部位中的化学成分
5
10
15
摘要目的研究板蓝根抗病毒有效部位中化学成分的结构和体外抗病毒活性方法板蓝
根水提物经大孔树脂吸附1050乙醇洗脱得抗病毒有效部位经硅胶柱色谱反相
硅胶色谱及SephadexLH-20反复分离纯化得到单体测定所得化合物的理化常数和波谱数
据鉴定其化学结构MTT法检测所得单体化合物体外对HSV病毒的抑制作用结果从
板蓝根水提抗病毒有效部位中分离得到10个化合物分别鉴定为丁香苷14-12
3-三羟基丙基-26-二甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷2异落叶松脂醇3异落叶
松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷4落叶松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷5落叶松脂素-44
-二-O-β-D-二葡萄糖苷62-羟基-14-苯二甲酸7D-甘露醇8吲哚-3-乙腈
-6-O-β-D-葡萄糖苷93-[2-5-羟甲基呋喃基]-12H-异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷
10结论其中1个为新化合物7个化合物为首次从板蓝根药材中分离得到化合物
10新化合物具有明显的抗HSV-2型病毒作用药物浓度为0125mlgmL时病毒抑制率
为5731半数有效量为IC50为0093mgmL治疗指数TI为7114
关键词中药化学板蓝根新化合物分离抗病毒
中图分类号R2842
20
ChemicalCompositionfromAntivirusActivePartsofRadix
Isatidis
25
HELiweiLIXiang
SchoolofPharmacyNanJingUniversityofChineseMedicineNanjing210023
AbstractTencompoundswereisolatedfromtheactivepartofwaterextracttheywere
respectivelyidentifiedassyringin14-123-trihydroxypropyl-26-dimethoxyphenyl-1-O-β-D-
glucopyranoside2isolariciresino3isolariciresinol4-O-β-D-glucopyranoside4lariciresinol
-4-O-β-D-glucopyranoside5
lariciresinol-44-bis-O-β-D-glucopyranoside6
30
2-hydroxy-14-benzenedicarboxylicacid7D-mannitol8Indole-3-acetonitrile6-O-β-D-
glucopyranoside9
3-[2-5-hydroxymethylfuryl]-12H-isoquinoline-7-O-β-D-
glucopyranoside10TheirstructureswereelucidatedfromspectralandchemicaldataOneof
thesecompoundswasanewcompoundandsevenwereisolatedfromRadixIsatidisatthefirst
timeThenewcompound10hadobviouseffectsagainstHSV-2byMTTmethod
35
40
KeywordsTCMChemistryRadixIsatidisNewcompoundIsolationAntivirus
0引言
临床研究和对板蓝根抗病毒活性部位的药理筛选结果表明板蓝根抗病毒成分集中在水
提取液等极性较大部位由于水提液化学成分的研究具有一定复杂性和困难性所以对其进
行化学成分系统研究的报道还未曾见到这可能是板蓝抗病毒化学成分一直没有得到阐明的
直接原因我们此前对板蓝根各化学部位的药理筛选研究结果表明水提取物经大孔树脂吸
附后1050乙醇洗脱部位有显著抗病毒活性是抗病毒的有效部位在这二个有效部
位中共分离得到10个化合物它们的化学类别相对比较集中主要以苯丙素类物质为主
-1-
现将各化合物报道如下
1化合物的结构解析
45
1
化合物1无色针状晶体氯仿-甲醇mp191-192℃Molish反应呈阳性
H-NMRCD3ODδ6712HsH-356531Hd159HzH-16481HmH-23752HmH-3
3756Hs26-OMe3301Hd116HzH-1317-3415HmH2-613C-NMRCD3ODδ1
359C-11544C-21055C-31353C-41055C-51544C-61301C-11313C-2626
C-31054C-1758C-2783C-3714C-4779C-5636C-657126-OMe
50
1
HNMR谱中有δ6712Hsδ6481HmJ159Hzδ6531HdJ159Hz的
吸收峰表明结构中可能有苯环和反式取代的烯基结构片断根据苯环上有两个磁等同质子
可推断苯环为对称的四取代此外δ3756Hs的吸收表明有两个磁等同的-OCH3基团
13
的信号可以推测该化合物有β-D吡喃葡萄糖基即葡萄糖苷综合13C-NMR1H-NMR的位
55
60
65
70
移数据及C-HCOSY谱中各质子的相连情况并与文献[1]对照波谱数据基本一致该化合物
为丁香苷syringin是首次从板蓝根中分离的已知化合物
化合物2白色粉末MeOHmp184～1851H-NMRDMSO-d6δ6661HsH-3
6671HsH-54661HdJ37H-13091HmH-24201HmH-3α3831Hm3β
3766Hs26-OMe4871HdJ669H-13023595HmH2-613C-NMRDMSO-d6δ
1528C-11339C-21044C-31373C-41044C-51339C-6853C-1538C-2
715C-3566C-26OMe1028C-1743C-2767C-3701C-4774C-5
611C-6
13
13
13
13
1
[2]
丙基-26-二甲氧基苯-1-O-β-D-葡萄糖苷4-123-trihydroxypropyl-2
6-dimethoxyphenyl-1-O-β-D-glucopyranoside该化合物为首次在板蓝根药材中分离
化合物3白色针晶mp137-138氯仿-甲醇FeCI3试剂显色阳性1H-NMRCD3OD
δ6571HsH-26181HsH-52751HmH-7α2781HmH-7β1971HmH-8
3381HmH-9α3691HmH-9β6611HsH-26671HdJ82HzH-56591Hd
75
J82HzH-63731HdJ106HzH-7175
1HmH-83281HmH-9α340
1HmH-9β
3733Hs-OMe3713Hs-OMe13C-NMRCD3OD1290C-1
1124C-21472C-31452C-41174C-51341C-6336C-7400C-8659C-9
1386C-11138C-21490C-31459C-41159C-51232C-6481C-7
481C-8632C-9564-OCH3563-OCH3
80
以上波谱数据与文献
[3]
中报道的-isolariciresinol相一致故鉴定为-异落叶
松树脂醇
化合物4白色粉末甲醇mp210212℃三氯化铁-铁氰化钾反应阳性示含酚
-2-
羟基IR3430br16071516ESI-MSmz545[MNa]HR-MS给出[MNa]分子量为
85
5452107计算值为5451993结合核磁共振波谱确定该化合物分子式为C26H34O11δ
6681HsH-26681HsH-52732HbrsH-71851HmH-83571HbrddH-9α343
1HmH-9β6681HbrsH-26681HdJ73H-56511HbrdJ82H-6380
1HdJ99H-71701HmH-83431HbrdH-9α3171HbrdH-9β3713Hs
-OMe3693Hs-OMe4551HdJ73H-1343-3135HmH-2-68741Hs
90
4-OH4441Ht9-OH
4301Ht9-OH
13
C-NMRDMSO-d6δ1303C-11123C-2
1469C-31443C-41167C-5
1328C-6324C-7382C-8637C-9
1366C-11134C-21474C-31449C-41154C-51216C-6461C-7
455C-8595C-9559558OCH31003C-1732C-2771C-3687C-4
768C-5601C-6
95
1
H-NMR谱中显示1个糖端基质子δ4551HdJ73信号和两个甲氧基质子信号
δ3713Hs3693Hs另外还有1个活泼氢信号δ8741Hs13C-NMR谱中则有
对应的甲氧基δ559δ558和包括糖端基碳δ1003在内的6个糖基碳信号13C-NMR
中低场区有δ112147的12个不饱和碳信号结合不饱和度计算推测应有两个芳环结构的
100
105
存在高场区除去6个糖碳信号和2个甲氧基碳信号外还有4个脂碳δ324382461
455和2个连氧碳δ595601HMBC谱中显示此2个连氧碳分别与醇羟基信号
δ4301Htδ4441Ht远程相关综合以上分析该化合物应为木脂素糖苷结构与文
献[4]对照波谱数据完全一致由此可判定该化合物为异落叶松树脂醇4-O-β-D葡萄糖苷
isolariciresinol4-O-β-Dglucopyranoside该化合物为首次从板蓝根植物中分得
化合物5白色结晶性粉末MeOHmp174～176℃1H-NMRDMSO-d6δ
6891HdJ15H-27031HdJ86H-56791HddJ8615H-6
4721Hd
J65H-72201HmH-83471HdJ80H-9α3651HdJ80H-9β6791Hd
J15H-27031HddJ8615H-56581HddJ65H-62451HdJ110H-α
2821HddJ11038H-7β2571HmH-83571HtJ70H-9α
110
3891HtJ70H-9β3716Hs-MeOH×24871HdJ50H-1
344-3165-HmH2-68714-OH13C-NMRDMSO-d6δ1379C-11318C-1
1102C-21132C-21490C-31476C-31457C-41447C-41152C-5
1156C-51180C-61208C-6818C-7323C-7527C-8
422C-8588C-9
721C-9558557-MeOH×21003C-1734C-2772C-3699C-4772C-5
115
609C-6
NMR数据与化合物6相似但其1H-NMR谱中仅有δ4871Hd一个糖端基质子
信号且13C-NMR谱中也只有δ1003一个糖端基碳信号推测结构与为与化合物6母核
一致的单糖苷对照文献
[56]
波谱数据一致鉴定为-落叶松树脂醇-4-O-β-D-吡喃葡
萄糖苷-lariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside
120
125
化合物6白色粉末MeOHmp136138℃FeCl3反应阴性示不含酚氢基酸水解
后薄层检识Rf值与葡萄糖一致证明含有葡萄糖1H-NMRDMSO-d6δ688
1HdJ15H-27021HdJ86H-56771HddJ8615H-54721HdJ65H-7
2201HmH-83471HdJ80H-9α3651HdJ80H-9β6821HdJ15H-2
6971HddJ8615H-56681HddJ65H-62461HdJ110H-α
2841HddJ11038H-7β2611HmH-83561HtJ70H-9α
-3-
3901HtJ70H-9β3746Hs-MeOH×24841HdJ50H-14861Hd
J55H-1344-31610HmH2-6H2-613C-NMRDMSO-d6δ1378C-1
1348C-11102C-21132C-21490C-331457C-41450C-41152C-5
1155C-51180C-61205C-6818C-7324C-7527C-8
420C-8588C-9
130
721C-9558-MeOH×21004C-11003C-1734C-22771C-33
699C-44772C-55609C-66
1
H-NMR谱中有δ4841Hdδ4861Hd两个糖端基质子信号13C-NMR谱中
δ10041003为糖端基碳信号结合δ734772771699609推测结构中含有
135
140
145
双葡萄糖基1H-NMR谱中还显示了两组ABX偶合系统的特征信号δ6881Hd
J16Hz7021HdJ86Hz6771HddJ8616Hzδ6821HdJ16Hz
6971HdJ100Hz6681HddJ10016Hz表明有134取代芳香
13
甲氧基信号以外余下的6个碳信号δ324420721818527588中有3
个连氧碳信号3个脂碳信号由C-Hcosy谱中可知与除糖基和芳环外的其余质子相连
[6]
8R8R--落叶松树脂醇-44-bis-O-β-D-吡喃葡萄糖苷7S8R
8R--lariciresinol-44-二-O-β-D-glucopyranoside
化合物7白色粉末MeOHmp320～322℃1H-NMRCD3ODδ8541HdJ21
8101HddJ86216981HdJ2113C-NMRCD3ODδ173016891669
13761341122811841139
1
H-NMRCD3ODδ8541Hd8101Hdd6981Hd为ABX偶合系统
提示苯环上124取代13C-NMRCD3ODδ173********9137613411228
150
155
[7]
4苯二甲酸2-bydroxy-14benzenedicarboxylicacid
13
1[8]
与甘露醇标准品Rf值相同故鉴定为甘露醇mannitol
化合物9棕黄色针状晶体氯仿-甲醇mp240-242Molish反应呈阳性
1
H-NMRCD3ODδ7121HsH-27021HdJ66H-4
6761HddJ2166H-5
7031HdJ21H-74172HsH-3-CH25061HdJ75H-139-335HmH-2-6
160
1239C-21214C-31236C-41049C-5C-615311074C-7
1400C-8
1053C-91025C-1752C-2782C-3713C-4783C-5626C-61184-C≡N
161-CH2
1
HNMR中δ6761HddJ6621δ7021HdJ66δ7031HdJ21
165
13
显示在化学位移1049和1531之间有8个烯碳和1个腈基碳在161处有一仲碳在1025
和625之间的6个碳为六碳糖上的碳信号推测该化合物的结构大致含有腈基的吲哚糖苷
-4-
131[9]
乙腈-6-O-β-D-葡萄糖苷indole-3-acetonitrile6-O-β-D-glucopyranoside此化合物
170
175
180
185
为首次在板蓝根中发现
化合物10橙红色片状结晶甲醇mp232233碘化铋钾反应阳性提示为含
氮化合物三氯化铁-铁氰化钾反应阴性示不含酚羟基酸水解2mg溶于05ml2MTFA
中密封在100水浴上加热4h水解液经抽干后残留物经TLC鉴定邻苯二甲酸-苯胺
溶液显色Rf与葡萄糖标准品一致
UV549361277215IR1682COESI-MSmz420[MH]442[MNa]
443[MHNa]458[MK]HR-MS给出[MH]分子量为4201296计算值为4201289
结合核磁共振波谱确定该化合物分子式为C20H21NO9
结合1H-NMRδ4891Hd7713C-NMRδ1022771765737699
609可知结构中含有β-D-葡萄糖取代基13C-NMRδ1695IR1682示为羰基1H-NMR
谱中有δ1043的活泼氢信号因结构中不含酚羟基推测活泼氢应与氮原子相连以上分
析提示可能存在酰氨基团1H-NMRδ4652Hd5613C-NMRδ564HMBC谱
中与δ5551Ht远程相关提示为羟甲基δ7231Hd326641Hd32
在HSQC谱中与δ12211107直接相关在HMBC谱中与连氧碳δ15001605都有远程
1
dd84218091Hd21AMX偶合系HSQC谱HMBC
谱中确定了它们的归属及糖的连接位置在确定以上结构后还剩余-NH-CO基团和
两个烯碳通过HMBC谱确定了它们和苯环连位置和连接顺序各组碳氢信号的HMBC的远程
相关情况如图1所示此化合物为自然界首次发现系统命名为3-[2-5-羟甲基呋
喃基]-12H-异喹啉酮-7-O-β-D-葡萄糖苷
190
Tab1
表1化合物10的NMR数据
NMRdataforcompound10DMSO-d6
No
1
δC
1695
HSQC
δH
HMBC
24-H
2
10431Hs
3
1220
24-H
4
5
6
7
8
9
10
2
3
4
5
6
6-OH
1
2
3
4
1198
1098
1192
1527
1146
1221
1378
1500
1221
1107
1605
564
1022
737
765
699
7291Hs
6771Hd85
6981Hdd8421
8091Hd21
7231Hd32
6641Hd32
4652Hd56
5551Ht
4891Hd77
3221Hm
3291Hm
3161Ht
83-H
8-H
6851-H
6-H
8245-H
865-H
434-H
4-H
36-H
346-H6-OH
6-OH
-5-
5
6
771
609
3271Hm
3641Hd3451Hm
H
809J21
O
7231HdJ32
6641HdJ32
O
1146
H
H
O
1527
1696
1221
1043
NH
1107
H
4891HdJ77
H
698J8421
1192
1098
1378
1198
1220
1500
1221
O
1
1605
CH2OH
564
H
677J85
H
729
O
6
OH
O
O
7
8
9
1
NH
2
3
4
4OH
OH
OH
1
6
5
10
4
3
2
O
1
5
CH2OH
6
195
200
205
210
215
图1化合物10的HMBC相关及化学结构
Fig1chemcialconstitutionofcompound10
2仪器与材料
核磁共振仪AC-300瑞士BRUKER公司生产显微熔点测定仪X-4型由河南
豫华仪器有限公司生产D101大孔吸附树脂为天津农药树脂有限公司产品柱层析硅胶
200-300目青岛海洋化工分厂生产Sephadex-LH20上海达瑞精细化学品有限公司ODS
反相硅胶日本YMC公司生产
板蓝根药材产地为江苏连云港经南京中医药大学鉴定教研室陈建伟教授鉴定为十字花
科植物菘蓝IsatisindigoticaFort的干燥根
3提取分离
板蓝根干燥饮片
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