第九章维生素的分析.ppt

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第九章第九章第九章第九章维生素类药物的维生素类药物的分析分析第第三节三节维生素维生素CL抗坏血酸抗坏血酸1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结构与性质结构与性质一、一、

（一）

（一）溶解性溶解性烯二醇结构烯二醇结构二酮基结构二酮基结构烯二醇结构烯二醇结构

（二）

（二）还原性还原性有活性有活性有活性有活性无活性无活性糖类的显色反应糖类的显色反应50结构与糖类相似结构与糖类相似（三）（三）具糖的性质具糖的性质C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸L（+）抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强手性手性C（C4、C5）（五）（五）光学活性光学活性*与碱反应与碱反应（六）（六）水解性水解性与氧化剂的反应与氧化剂的反应

（一）一）鉴别试验鉴别试验二、二、去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸OVitC1、与、与AgNO3反应反应2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应（ChP2005）氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色还原型还原型蓝色蓝色OH（ChP2005）（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）3.3.其他氧化剂的反应其他氧化剂的反应：

亚甲蓝或高锰酸钾亚甲蓝或高锰酸钾试剂褪色试剂褪色碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜砖红色沉淀砖红色沉淀磷钼酸磷钼酸钼蓝钼蓝糖类的反应糖类的反应

（二）二）或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP（蓝色）（蓝色）（糠醛糠醛）（戊糖）（戊糖）50（吡咯吡咯）UV（三）三）BP0.01mol/LHCl三、杂质检查三、杂质检查1.1.溶液的澄清度与颜色：

有色杂质溶液的澄清度与颜色：

有色杂质分光光度法分光光度法2.2.铁、铜离子：

原子吸收分光光度法铁、铜离子：

原子吸收分光光度法指示剂指示剂淀粉指示液淀粉指示液原理原理1.碘量法碘量法

（一）一）含量测定含量测定四、四、H+取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新精密称定，加新沸过的冷水沸过的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴立即用碘滴定液（定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝滴定，至溶液显蓝色，在色，在30秒内不褪。

每秒内不褪。

每1ml碘滴定液碘滴定液（0.05mol/L）相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2.

（1）酸性环境）酸性环境d醋酸醋酸

（2）新沸冷新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论3.（3）立即滴定）立即滴定赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干扰的干扰（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂滑石粉滑石粉过滤过滤注射剂注射剂抗氧剂抗氧剂丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3NaHSO3Na2S2O3Na2S2O52，6-二氯靛酚钠滴定法二氯靛酚钠滴定法

（二）

（二）USPJP原理原理1.酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，-6622VitCVitC自身指示终点法自身指示终点法方法方法2.

（2）快速滴定）快速滴定2min内内

（1）酸性环境）酸性环境HPO3-HAc稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定）剩余比色测定（定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）讨论讨论3.（4）缺点）缺点需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周不稳定不稳定干扰多干扰多氧化力较强氧化力较强维生素维生素D2甾醇衍生物甾醇衍生物维生素维生素D3维生素维生素D2与与D3结构区别：

结构区别：

维生素维生素D3侧链无双键和少一个甲基侧链无双键和少一个甲基第四节第四节维生素维生素D一、结构与性质一、结构与性质开环的甾体开环的甾体：

具有甾类化合物的显色反：

具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。

应，可用于鉴别。

手性碳原子手性碳原子：

具有旋光性，可用于鉴别。

：

具有旋光性，可用于鉴别。

多烯多烯：

可进行紫外检测。

：

可进行紫外检测。

二、鉴别试验二、鉴别试验1.显色反应显色反应醋酐醋酐-硫酸反应硫酸反应D2黄黄红红紫紫绿绿D3黄黄红红紫、蓝绿紫、蓝绿绿绿三氯化锑反应三氯化锑反应橙红色渐变粉红橙红色渐变粉红三氯化铁反应三氯化铁反应橙黄色橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应二氯丙醇和乙酰氯反应绿色绿色2.比旋度鉴别比旋度鉴别维生素维生素DD22维生素维生素DD33溶溶剂剂浓浓度度比旋度值比旋度值无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇40mg/ml40mg/ml5mg/ml5mg/ml+102.5+102.5+107.5+107.5+105+105+112+112注意事项注意事项：

应于容器开启：

应于容器开启3030分钟内取样，分钟内取样，在溶液配制后在溶液配制后3030分钟内测定。

分钟内测定。

3.3.区别反应：

区别反应：

以以96%96%乙醇为溶剂，加乙醇和乙醇为溶剂，加乙醇和85%85%硫酸，硫酸，DD22显红色，在显红色，在570nm570nm处有最大吸收，处有最大吸收，DD33显黄色，显黄色，在在495nm495nm处有最大吸收。

处有最大吸收。

4.4.其他方法其他方法：

TLCTLC、HPLCHPLC、制备衍生物测熔点制备衍生物测熔点三、杂质检查三、杂质检查维维生生素素DD22中中麦麦角角甾甾醇醇的的检检查查：

加加洋洋地地黄黄皂皂苷苷溶溶液液，混混合合，放放置置18h18h不不得得发发生浑浊或沉淀。

生浑浊或沉淀。

前维生素前维生素DD的光照产物的光照产物四、含量测定方法四、含量测定方法中国药典（中国药典（20002000年版）采用年版）采用正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法测定维生素测定维生素DD的含量，定量方法为内标法，内标物为邻的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法三个方法。

固定相：

硅胶固定相：

硅胶流动相：

正己烷流动相：

正己烷-正戊醇（正戊醇（997997：

33）苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第五节第五节维生素维生素E名名称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯结构与性质结构与性质一、一、苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链1.UV2.乙酰化的酚羟基乙酰化的酚羟基易水解易水解O醌型化合物醌型化合物生育酚生育酚-+orOHHVitE杂质，需检查杂质，需检查O生育红生育红

（一）

（一）硝酸反应硝酸反应橙红色橙红色鉴别鉴别二、二、7515HNO3VitE生育酚生育酚（橙红色）（橙红色）生育红生育红生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应

（二）

（二）生育酚生育酚对对-生育醌生育醌O弱弱氧化氧化剂剂血红色血红色=41.045.5max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）薄层板薄层板硅胶硅胶G展开剂展开剂环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4：

1）显色剂显色剂硫酸（硫酸（1055）VitERf=0.7-生育酚生育酚Rf=0.5-生育醌生育醌Rf=0.9TLC法法（四）（四）2.游离生育酚游离生育酚杂质检查杂质检查三、三、原理原理1.酸度酸度2.以以NaOHNaOH滴定液（滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）体积控体积控制。

制。

（M生育酚生育酚=430.8）例例取取本本品品0.10g，加加无无水水乙乙醇醇5ml溶溶解解后后，加加二二苯苯胺胺试试液液1滴滴，用用硫硫酸酸铈铈液液（0.01mol/L）滴滴定定，消消耗耗硫硫酸酸铈液（铈液（0.01mol/L）不得过不得过1.0ml。

2.15限量限量四、四、含量测定含量测定GC法（法定方法）法（法定方法）

（一）

（一）GC特点特点1.选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不挥发性低、不稳定、极性强稳定、极性强衍生化易受衍生化易受样品蒸气压限样品蒸气压限制制载气载气N2固固定相定相硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器（FID）内标内标正三十二烷正三十二烷n500R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近校正因子：

校正因子：

WWKK%VitE%10012=稀释倍数稀释倍数稀释倍数稀释倍数样样对对实际工作中的计算方法实际工作中的计算方法

（二）二）HPLC法法外标法外标法此外，还有铈量法、比色此外，还有铈量法、比色法和荧光法法和荧光法返回练习与思考练习与思考AA型题型题1.1.维生素维生素BB11的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应B.B.硫色素反应硫色素反应C.C.柯柏反应柯柏反应D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应E.E.双缩脲反应双缩脲反应2.2.维生素维生素EE中国药典中国药典规定的含量规定的含量测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法B.B.旋光法旋光法C.HPLCC.HPLC法法D.D.紫外分光法紫外分光法E.GCE.GC法法BB型题型题A.A.亚硝基铁氰化钠反应亚硝基铁氰化钠反应B.B.硫色素反应硫色素反应C.C.硝酸反应硝酸反应D.D.三氯化锑反应三氯化锑反应E.E.硝酸银试液的反应硝酸银试液的反应1.1.维生素维生素CC2.2.维生素维生素EE3.3.维生素维生素BB114.4.维生素维生素AAECBDXX型题型题1.1.用碘量法测定的药物有用碘量法测定的药物有A.A.醋酸地塞米松醋酸地塞米松B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮C.C.维生素维生素CCD.D.硫酸阿托品硫酸阿托品E.E.维生素维生素CC注射液注射液返回2.2.可用紫外分光光度法测定含量的可用紫外分光光度法测定含量的药物有药物有A.A.维生素维生素AA丸剂丸剂B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮C.C.维生素维生素AAD.D.硫酸阿托品硫酸阿托品E.E.维生素维生素BB11片片