大鼠取材方案.docx
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大鼠取材方案
实验大鼠取材方案
［取材内容］
1.取大歸脉血分离血衆血清-80C保存。
2.取大鼠门静脉血分离血清-80C保存。
3.取大鼠甲状腺组织.制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用〃
4.取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化孵标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5.取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本，免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰搽
保存备用。
6.取大鼠肝脏组级制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7.取大鼠觴组级制备康腺组织电镜观察标芯免疫组化观察标本其余组织分装液氮
冰冻保存备用。
8.取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9.取鳩胃部组级制备胃粘膜组织电飙察标本免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10.取大鼠空肠组级制备肠道粘膜组级电镜观察标本■免疫组化观集标本其余组级分装
液氮冰冻保存备用。
11.取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观舉标技免疫组化观察标本其余组织分装
液氮冰冻保存备用。
12.取大關组织制备左肾组级电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰探保
存备用。
13.取大嵐肾上腺组织左侧制备肾上腺组级免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保
存
备用。
14.取大鼠睾丸组级左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存
备有。
［试剂及药品］
戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3应二醛
磷酸
盐缓冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戍二肚肝素撤m器械清洗消毒液
［器材］
备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、
眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml
、冻存氤肝麹真空采血管、微量移液議高速敲杠注射器10ml、5ml、
2ml、无菌手貳冰箱、冰盒、液氮罐
［取材动物］
Wistar大鼠
［取材步骤］
1.取材大鼠前夜禁食自由飮扎
2.腹腔注射戊巴比妥钠（45mg/kg）或10%水合氯醛（300mg/kg）将动物麻醉。
用5ml的注射
器配合5.57号针头。
腹腔注卿右手持注射器左手的小指和无名訓住大餉尾巴釧三个手馴住大鼠的颈部使大鼠粮部向下。
这样腹腔中的器官就会自細向胸部防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
进针的动作轻柔防止刺伤腹部器官勺尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行-小段瞬最好是从腹部-侧进针穿过腹中线后在腹部的另-侧进入腹腔注射完药物后缓缓拔出针头并轻微旋转针头防止漏液。
待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3•修剪去颈部及腹部毛拔75%酒精消毒。
4.沿腹侧正中线自孵上缘由卞而上剪开腹部皮肤直至剑突礪侧钝性剥开皮肤与虾组织暴露腹壁浅肌鼠沿白线钝性分齡壁肌肉剪开腹膜暴露腹腔将肝脏向上翻起显露门并游舗腺将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方丽入门静脉抽取
门静脉血2ml无创血管夹牺门删止血.将抽取门静脉血仙入-次性离心管低温静置过夜4&C离心3000-3500/min10分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
5.把胃与脾之间的薄膜除去可见到在其卞方有胴枝状的肉色组织分为左、右两叶
钝税结台歸取下觴组织及脾脏组织结扎止血胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胰腺体部约1mmX1mmximm组织3块戊二翱鶴媛
冲
液（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二軽固定②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余姐织全部液氮冰冻保存备用。
生理盐水冲洗換作器械。
6.剔除脾周组织放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①从脾脏一端切取5>5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②继续切取脾约1mmX1mmX1mm织3块3戍•二靡磷酸盐媛冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二醛固定③其余组织液氮冰冻保存备用。
7.从剑突继续向上剪开皮肤自颌下陋侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露胸廓及颈浅肌
层。
沿正中剪开胸廓、胸膜避免损崩腺的胸腔脏議暴露心脏找到上下腔静脉后
确认右心层5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
加4ml静脉血入肝
素锂真空采血管摇勻室温静置10井钟4饰心3000-3500/min5分卿吸出上
清液分装-80摄氏度保存备用。
2ml加入普通真空采血管低温静置过夜4C离心
3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
8.展开肠系膜于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织剔取肠系期耙结数枚故
置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福
尔马林菠中固定②其余组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备肌心管5ml、9•上端于贾门上端结扎食管下端于直肠远端结扎直肠末端钝瞬合完整取下胃肠直
10.离断胃放置于无菌培养皿践端结扎。
①沿胃大弯剖开生理盐水洗涤切取约
1mm
X1mmX1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块3戊二醛磁酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LP
pH7.4）
或4戊二匯固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条浸入多聚甲醛或福
尔马林液中固定③其余胃组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
11.①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm距回盲部10cm处切取回肠10cm生理盐水洗涤
切取约1mmX1mmX1mm空肠和回肠黏膜组织各块戊二漲鯛缓冲液
（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二醛固定②剪取宽的0.5-1.0cm包含全层的空肠和回
肠组织各1条做标记浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余空肠和回肠组织
全部販置于无菌冻存管液氮冰赫存备乩
12.结扎剪断肝门管道系统钝税结合完整取出大鼠肝脏故置于无菌培养皿生理盐水冲
洗称重并记录。
①切取肝左叶妁1mmximmximm组织3块3戊二鞫酸盐慶冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二醛固定②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中
固定③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用/
13.于腹膜外腰瞞寻找到肾脏表面光冰背腹略扁呈蚕豆胰在肾脏的前方内侧
和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。
右侧肾上腺呈豆状长轴指向后内删左侧呈卵圆形长轴指向腹外亂賊结合摘取顒肾上胰①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②右叶肾上腺赦置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
14.剪开后腹膜结扎剪断双侧肾门钝税结合取下双侧肾脏剔除肾周筋膜组织放
置
于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①于中间肾门部横行切开左侧肾脏切取
上端肾脏1mmX1mmX1mm组织3块3戊二曜瞒殿盐媛冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）
或
4戊二醛固定②下端脾脏浸入多聚甲匯或福尔马林液中固定③右侧肾脏放置于无
菌冻存管液氮冰冻保存备用。
15.大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。
性成熟的大鼠睾丸和附睾下降
入阴囊使表面凸出并突向后方。
小心剪开贼阴囊可见橢圆形睾丸触结合摘取双侧睾九附睾放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血返
16.颈白线純悦齡分离颈前机群直至气管向上显露甲状巖仔细操作切取包括甲状
软骨在内的甲状腺。
①切取约1mmximmximm组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二輕固定②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。
切取左侧睾丸下端1mmximmximm组织3块戊二醛磷殴盐缀冲液
（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二匯固定②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧睾丸组织；O于无菌冻存管液氮冰冻保存备艮
17.大翩腺由便叶组成似等边三角肢大部分位于胸腔前纵膈顶端近喉部基底部附
着于心包腹面的前上方。
钝悅结合完整取下胸腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中
涮洗去血迹。
①切取胸腺1mmXmmX1mm组织块戊二醛磷殴盐缓冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）或4戊二醛固定②切取胸腺5mmX5mmX5mm组织1块浸入多聚
甲曜或福尔马林液中固定③其余姐织置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
18.整体取下大鼠心肺组织剪开分舰侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血
迹。
①切取左肺1mmX1mmXmm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LPpH7.4）
或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定济存管液氮冰冻保存
备用。
19.各取样标本细致编号登记。
20.大鼠废弃尸体处理。
［注意事项
1.戍巴比妥抽配成1%生理盐水溶液平均每只大鼠用量12.6mg1.2ml左右o
2.大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为
510ml/kg。
3.完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎不易寻找肠系膜淋巴结所以先取淋巴叙取下胃
肠道由专人操作取胃肠道及胃肠道取下后取林的操作器械单用-套勺
4.取材时三人同时操作取一只大鼠结合取材方案多脏器并行取材缩短取材时间。
③右肺组织置于无菌
1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，
特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。
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