江西安义中学高二生物课件《微生物的培养与应用微生物的实验室培养》新人教版选修.ppt

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高中生物课件（人教课标版）高中生物课件（人教课标版）专题专题2:

2:

微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题2：

微生物的实验室培养微生物的实验室培养特点：

特点：

结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光不能进行光合作用合作用.微生物包括哪五类：

微生物包括哪五类：

病毒病毒病毒病毒细菌细菌细菌细菌放线菌放线菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基础知识：

（一）微生物：

是一切肉眼看不见或看不清：

是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称楚的微小生物的总称病毒的结构病毒的结构病毒病毒SARS冠状病毒、冠状病毒、禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖：

病毒的增殖：

细菌的外形与大小图图1-1常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌B.杆菌杆菌C.弧菌弧菌有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做形的休眠体，叫做芽孢芽孢。

芽孢的壁很厚，对干旱、低温、。

芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。

例如，有的细菌的高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。

例如，有的细菌的芽孢，煮沸芽孢，煮沸33小时以后才死亡。

芽孢又小又轻，可以随小时以后才死亡。

芽孢又小又轻，可以随风飘散。

当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽风飘散。

当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌孢又可以萌发，形成一个细菌.菌落：

单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。

菌落是鉴定菌种的重要依据。

菌落是鉴定菌种的重要依据。

细菌的营养类型根据细菌所利用的根据细菌所利用的能源和碳源能源和碳源的不同，的不同，将细菌分为两大营养类型。

将细菌分为两大营养类型。

自养菌自养菌:

分类分类,举例举例?

异养菌异养菌:

腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌大部分病原菌大部分病原菌光合自养型光合自养型:

光合细菌光合细菌化能自养型化能自养型:

硝化细菌硝化细菌,铁细菌铁细菌,硫细菌硫细菌菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异放线菌放线菌11、结构：

、结构：

单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的应用应用:

真菌真菌如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生殖生殖直立菌丝直立菌丝营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖

（二）培养基

（二）培养基培养基（培养液）是由人工方法配培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。

混合营养液。

（11）按物理状态分：

）按物理状态分：

固体培养基固体培养基和和液体培养液体培养基、半固体培养基基、半固体培养基。

（22）按功能分：

）按功能分：

选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基。

（33）按成分分：

）按成分分：

天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。

1.1.培养基的类型培养基的类型固体培养基：

菌落固体培养基：

菌落液体培养基：

液体培养基：

表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：

半固体培养基：

无动力无动力有动力有动力（弥散弥散）2.2.不同的微生物往往需要采用不同的不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方培养基配方3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳碳源源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，另营养物质，另外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营特殊营养物质以及氧气的要求养物质以及氧气的要求4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：

增菌、工业生产液体培养基：

增菌、工业生产固体培养基：

纯化（分离），鉴定、活固体培养基：

纯化（分离），鉴定、活菌计数、保藏菌种菌计数、保藏菌种半固体培养基：

动力检测半固体培养基：

动力检测（三）无菌技术（三）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

所有防止杂菌污染的方法。

成功地培养微生物的关键。

成功地培养微生物的关键。

（）（）消毒定义：

消毒定义：

2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（22）灭菌的定义：

）灭菌的定义：

3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法11、灼烧灭菌、灼烧灭菌灭菌的方法：

灭菌的方法：

22、干热灭菌：

、干热灭菌：

160-170160-170下加热下加热1-2h1-2h。

33、高压蒸气灭菌：

、高压蒸气灭菌：

100kPa100kPa、121121下下维持维持15-30min.15-30min.1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？

外来微生物污染外，还有什么目的？

2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。

请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。

如果需要，请选择合适的方法。

如果需要，请选择合适的方法。

（11）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（22）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（33）实验操作者的双手实验操作者的双手答：

无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

答：

无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

答：

（答：

（1）、（）、

（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒。

）需要消毒。

微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序11、器具的灭菌、器具的灭菌22、培养基的配制、培养基的配制33、培养基的灭菌、培养基的灭菌44、倒平板、倒平板55、微生物接种、微生物接种66、恒温箱中培养、恒温箱中培养77、菌种的保存、菌种的保存三、实验操作三、实验操作

（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基

（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）11计算、称量计算、称量22溶化溶化33调调pHpH：

pH7pH76644过滤：

这一步可以省去。

过滤：

这一步可以省去。

55分装：

分装过程中注意不要使培养分装：

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。

分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

三角烧瓶容积的一半为宜。

66加塞加塞77包扎包扎操作步骤操作步骤88灭菌灭菌:

将将50ml50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100kPa100kPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。

将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在菌箱内，在160160170170下灭菌下灭菌2h2h。

99倒平板倒平板:

待培养基冷却到待培养基冷却到5050左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板。

（倒平板操作见课本）近倒平板。

（倒平板操作见课本）2d2d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种.1010无菌检查：

无菌检查：

将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24244848小时，以检查灭菌是否彻底。

小时，以检查灭菌是否彻底。

（二）纯化大肠杆菌

（二）纯化大肠杆菌接种方法有：

接种方法有：

平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：

微生物的接种技术：

平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法平板划线的操作平板划线的操作一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。

处生长，会形成一个条状的菌落。

1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？

在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？

在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？

为什么？

要灼烧接种环吗？

为什么？

答：

操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：

操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。

目逐渐减少，以便得到菌落。

划线结束后灼烧划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

免细菌污染环境和感染操作者。

2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

再进行划线？

答：

以免接种环温度太高，杀死菌种。

答：

以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

什么总是从上一次划线的末端开始划线？

答：

答：

划线后，线条末端细菌的数目比线条起划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

稀释涂布平板法稀释涂布平板法涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。

涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。

结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第一想，第22步应如何进行无菌操作？

步应如何进行无菌操作？

应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。

例如，。

例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。

等。

微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养菌种的保存菌种的保存11、临时保藏：

、临时保藏：

接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。

冰箱保存。

22、长期保存：

、长期保存：

甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法本课题知识小结本课题知识小结:

四、课题成果评价四、课题成果评价

（一）培养基的制作是否合格

（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温112d2d后无后无菌落生长，说明培养基的制