组织胚胎学研究内容和方法.ppt
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组织胚胎学组织胚胎学-人体发育和功能组织学人体发育和功能组织学组胚教研室王海涛王海涛欢迎大家学习组织学与胚胎学的早期研究和发展现代组织学与胚胎学的研究和发展我国组织学和胚胎学的研究和发展组织学与胚胎学的研究方法内容提要内容提要组织学组织学（histology）：
研究机体微细结构及其相关功能的科学胚胎学胚胎学（embryology）：
研究个体发生发育及其有关机制的科学基础：
细胞学研究方法：
显微镜观察研究水平：
细胞、亚细胞在发展历程中，二者的研究内容相互交叉和推进组织胚胎学组织胚胎学（histo-embryology）：
人体发育和功能组织学个体发生起始于受精卵。
受精卵经分裂增殖和细胞分化，形成多种不同类型的细胞细胞（cell）。
机体的一种或几种细胞聚集形成一定构型的组织组织（tissue）。
组织由细胞和细胞间质（细胞外基质）组成。
组织有多种类型，每种具有一定的形态结构特征和相关的功能。
基本组织有四种：
上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织。
几种组织相互结合，组成器官和系统器官和系统一、组织学与胚胎学的一、组织学与胚胎学的早期研究和发展早期研究和发展古代古代-15世纪解剖学组织学胚胎学的发展世纪解剖学组织学胚胎学的发展古代古代中医书中即有解剖、脏腑的记载。
中医书中即有解剖、脏腑的记载。
古希腊对胚胎学作出了重大贡献（古希腊对胚胎学作出了重大贡献（HippocratesHippocrates和和AristotleAristotle）。
）。
前前22世纪，古罗马医生世纪，古罗马医生GalenGalen著作中记录了胃肠、著作中记录了胃肠、子宫等器官的分层结构，关于胎儿的形成描子宫等器官的分层结构，关于胎儿的形成描述了羊膜、尿囊和胎盘结构。
述了羊膜、尿囊和胎盘结构。
中世纪（中世纪（6-14世纪）世纪）发展缓慢。
发展缓慢。
有些医书中可见解剖资料叙述。
有些医书中可见解剖资料叙述。
近代解剖学组织学胚胎学的发展近代解剖学组织学胚胎学的发展16世纪世纪意大利意大利dadaVinciVinci绘制绘制700700多幅解剖图，大多数相当多幅解剖图，大多数相当准确。
准确。
比利时医生比利时医生VesaliusVesalius是现代解剖学的奠基者，是现代解剖学的奠基者，15431543年发表人体的构造。
年发表人体的构造。
英国英国HarveyHarvey发现血液循环，观察鸡胚和哺乳动物发现血液循环，观察鸡胚和哺乳动物胚胎发生，发表心血管运动论胚胎发生论胚胎发生，发表心血管运动论胚胎发生论，强调，强调“一切动物皆起源于卵一切动物皆起源于卵”，认为胚胎由，认为胚胎由子宫分泌子宫分泌17世纪世纪显微镜发明，打开了新的观察领域。
显微镜发明，打开了新的观察领域。
细胞发现。
细胞发现。
脾、肺、肾、皮肤等一些器官结构被揭示。
脾、肺、肾、皮肤等一些器官结构被揭示。
卵泡发现。
卵泡发现。
两栖类卵子人工受精实验，提出两性配子的结合两栖类卵子人工受精实验，提出两性配子的结合是个体发生的前提是个体发生的前提胚胎学流行胚胎学流行“先成论先成论”，认为胚胎是在生殖细胞，认为胚胎是在生殖细胞中预先存在的，发育不过是继续长大。
中预先存在的，发育不过是继续长大。
18世纪世纪德国人德国人WolffWolff用显微镜直接观察胚的发育，认为卵用显微镜直接观察胚的发育，认为卵中没有预先形成的物质，也没有组织和器官，否中没有预先形成的物质，也没有组织和器官，否定定“先成论先成论”，主张胚胎是逐渐分化演变而成的，主张胚胎是逐渐分化演变而成的“渐成论渐成论”。
清朝王清任清朝王清任17961796年写成医林改错。
年写成医林改错。
19世纪世纪法国人法国人BichatBichat发现组织发现组织（tissue）tissue），18011801年发表膜年发表膜的研究，将其分为的研究，将其分为2121种。
种。
德国人德国人MayerMayer于于18191819年提出年提出histologyhistology。
德国人德国人VonBearVonBear提出贝尔定律。
提出贝尔定律。
德国德国RemarkRemark在在BearBear工作基础上，提出三胚层学说。
工作基础上，提出三胚层学说。
达尔文达尔文18591859年发表物种起源。
年发表物种起源。
德国人德国人SchleidenSchleiden和和SchwannSchwann创立细胞学说。
创立细胞学说。
奥地利人奥地利人MendelMendel于于18651865年创立细胞遗传学说。
年创立细胞遗传学说。
德国人德国人WeismannWeismann于于1919世纪末提出机体细胞有生殖世纪末提出机体细胞有生殖细胞和体细胞之说，认为生殖细胞含有决定胚胎细胞和体细胞之说，认为生殖细胞含有决定胚胎细胞分化为不同组织的细胞分化为不同组织的“决定子决定子”。
丹麦人丹麦人JahanngenJahanngen于于19091909年将遗传因子命名为年将遗传因子命名为“gene”gene”德国人德国人RouxRoux于于18871887年进行分割蛙卵分裂球试验，年进行分割蛙卵分裂球试验，开创了实验胚胎学研究开创了实验胚胎学研究HisHis最早制作胚胎连续切片并进行三维重建，研究最早制作胚胎连续切片并进行三维重建，研究胚胎各系统和器官的发育胚胎各系统和器官的发育GolgiGolgi于于18891889年发明银染技术，发现神经细胞内的年发明银染技术，发现神经细胞内的“内网器内网器”（高尔基体）（高尔基体）AltmanAltman于于18941894年作活体细胞染色，在多种动物和年作活体细胞染色，在多种动物和植物细胞中看到线粒体植物细胞中看到线粒体许多重要的细胞和组织结构在许多重要的细胞和组织结构在1919世纪中、后期发世纪中、后期发现和命名现和命名20世纪，是现代组织学和胚胎学蓬勃发展的时期，新技术和新仪器不断涌现并应用于细胞学、组织学、胚胎学的研究二、现代组织学与胚胎学研究和发展二、现代组织学与胚胎学研究和发展三、我国组织学与胚胎学研究和发展三、我国组织学与胚胎学研究和发展开始于20世纪初50年代起，我国组织学与胚胎学事业发展进入一个新的时期近20多年是我国组织学与胚胎学事业蓬勃发展、快速进步的最佳时期四、组织学与胚胎学的研究方法四、组织学与胚胎学的研究方法一般光学显微镜术一般光学显微镜术几种特殊显微镜的应用几种特殊显微镜的应用组织化学和细胞化学术组织化学和细胞化学术免疫细胞化学术免疫细胞化学术原位杂交术原位杂交术放射性核素示踪术放射性核素示踪术细胞和细胞化学定量术细胞和细胞化学定量术电子显微镜术电子显微镜术组织培养术组织培养术细胞融合术细胞融合术显微外科术显微外科术11、一般光学显微镜术、一般光学显微镜术切片制备切片制备切片制备切片制备石蜡切片：
最常用石蜡切片：
最常用冷冻切片：
常用于酶组织化学染色冷冻切片：
常用于酶组织化学染色涂片、磨片、铺片、连续切片涂片、磨片、铺片、连续切片染色染色染色染色碱性染料：
含氨基、二甲氨基等碱性助色团的染料碱性染料：
含氨基、二甲氨基等碱性助色团的染料酸性染料：
含有羧基、羟基、磺基等酸性助色团的酸性染料：
含有羧基、羟基、磺基等酸性助色团的染料染料嗜酸性、嗜碱性、中性嗜酸性、嗜碱性、中性最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称HEHE染色法染色法22、几种特殊显微镜的应用、几种特殊显微镜的应用荧光显微镜荧光显微镜：
用来观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构相差显微镜相差显微镜：
用于观察组织培养中活细胞形态结构暗视野显微镜暗视野显微镜：
用于观察因反应或分辨力不足的微小颗粒，可分辨0.004-0.2微米的微粒，适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动共聚焦激光扫描显微镜共聚焦激光扫描显微镜：
可对细胞的多种功能进行全自动、高效、快速微量定性和定量研究等33、histochemistry和和cytochemistry糖类：
显示多糖和蛋白多糖的常用方法是过碘酸希夫反应（PAS反应），原理多糖多糖醛醛紫红色沉淀紫红色沉淀过碘酸过碘酸氧化氧化SchiffSchiff试剂试剂PAS染色示肝糖元染色示肝糖元PASPAS染色染色脂类脂类：
包括脂肪和类脂。
标本用甲醛固定，冷冻：
包括脂肪和类脂。
标本用甲醛固定，冷冻切片，脂类保存较好。
常用苏丹染料、油红切片，脂类保存较好。
常用苏丹染料、油红OO，尼罗蓝等溶于脂类的染料染色尼罗蓝等溶于脂类的染料染色酶酶：
目前有：
目前有100100多种酶组织化学染色法，基本原理多种酶组织化学染色法，基本原理是利用酶对其相应底物的水解、氧化等作用，然是利用酶对其相应底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，借此检测该酶在组形成沉淀或有色的最终产物，借此检测该酶在组织切片或细胞内的分布及活性强弱织切片或细胞内的分布及活性强弱核酸核酸：
显示：
显示DNADNA的传统方法是福尔根反应的传统方法是福尔根反应（FeulgenFeulgenreaction）reaction），切片先用稀盐酸处理，使切片先用稀盐酸处理，使DNADNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的联接键打开，分子中脱氧核糖与嘌呤之间的联接键打开，形成醛基，再与希夫试剂作用。
原理同形成醛基，再与希夫试剂作用。
原理同PASPAS反应，反应，使细胞核使细胞核DNADNA显紫红色显紫红色4、immunocytochemistry/immunohistochemistry是应用免疫学原理，通过抗原与抗体的特异是应用免疫学原理，通过抗原与抗体的特异性结合，显示组织内和细胞内的多肽、蛋白质及性结合，显示组织内和细胞内的多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
这种检测技术的特异性强、灵敏度高、应用广泛，这种检测技术的特异性强、灵敏度高、应用广泛，是生物学和医学领域中的重要研究手段。
通常需是生物学和医学领域中的重要研究手段。
通常需对已知抗原或抗体进行标记，用相应的显色和观对已知抗原或抗体进行标记，用相应的显色和观察方法检测目的抗体或抗原。
常用的标记物有荧察方法检测目的抗体或抗原。
常用的标记物有荧光素、铁蛋白、辣根过氧化物酶等光素、铁蛋白、辣根过氧化物酶等荧光素标记显示皮肤毛细血管内皮细胞免疫组织化学免疫组织化学免疫荧光技术免疫荧光技术55、原位杂交技术、原位杂交技术（insituhybridization）是一种核酸分子杂交技术，通过检测细胞内是一种核酸分子杂交技术，通过检测细胞内mRNAmRNA和和DNADNA序列片段，原位研究细胞合成某种多肽序列片段，原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
基本原理是用已知碱基序或蛋白质的基因表达。
基本原理是用已知碱基序列并具有标记物的列并具有标记物的RNARNA或或DNADNA片段即核酸探针片段即核酸探针（nucleicacidprobenucleicacidprobe），），与组织切片或细胞内的待与组织切片或细胞内的待测核酸进行杂交，通过标记物的显示，在显微镜测核酸进行杂交，通过标记物的显示，在显微镜下观察目的下观察目的mRNAmRNA或或DNADNA的存在与定位。
用核酸杂交的存在与定位。
用核酸杂交技术检测细胞内某一基因在染色体上的定位，称技术检测细胞内某一基因在染色体上的定位，称染色体原位杂交。
用核酸杂交技术检测某一基因染色体原位杂交。
用核酸杂交技术检测某一基因的转录物的转录物mRNAmRNA的细胞定位和转录状况，称细胞原的细胞定位和转录状况，称细胞原位杂交位杂交核酸探针：
主要有三种利用大肠杆菌重组带有目的基因的质粒DNA，制成互补DNA探针（cDNA）应用限制性核酸内切酶消化制成线性DNA模板，在体外转录获得反义RNA探针（cRNA）依照待测核酸的核苷酸序列，应用DNA合成仪合成寡聚核苷酸探针原位杂交示脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性原位杂交示脐静脉内皮细胞呈心房钠尿肽阳性66、电子显微镜术、电子
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