发酵人员培训资料演示文档.pptx

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.发酵车间培训资料发酵车间培训资料生产二部2017.06.12.第一部分意识的培养我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响发酵的成败及产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在生产过程中菌种、发酵人员必须具备以下两种意识：

1.无菌意识由于微生物个体小、分布广泛等特性，发酵染菌的途径有很多，而且如果染菌的话，我们无法及时做出判断，必须培养一段时间才能看出来，发现以后的结果只能是重消、提前放罐或倒罐，造成不小的损失，所以生产过程中每一个环节都必须具备无菌意识，每一步操作都按照操作规程进行，抓住每一个细节，才能确保不会染菌。

无菌意识是每一个菌种、发酵、生测人员具有的意识。

.2、安全意识空气压力能达到0.250.3MPa；正常供气压力0.15-0.2MPa，（仪表用空气注意减压）；空气温度：

50+5蒸汽压力0.4-0.6MPa以上，防止压力过高击穿垫片、阀门等设备用电；（本岗位熟练人员操作、防水.维修必须专业电工进行）机械搅拌；（设备检修必须切断电源且有明显的标识牌、高速离心设备注意平衡及紧锁装置）酸碱、易燃易爆、粉尘：

防护措施及应急措施。

进罐检查：

切点电源、明显标识牌、有人值守人员着装发酵罐：

空消、实消等加热状态打开夹套排污阀，防止夹套或内壁损毁；移种、放罐升高压力后，不能同时关闭进气、排气阀门，防止罐内产生负压。

.第二部分、发酵罐罐体管道结构介绍空气路：

培养过程中向罐内通无菌空气蒸汽管路物料管路：

配料管路、补料管路取样路：

培养过程中取样监控菌体生长情况尾气路：

排气（大排气、小排气）出料路：

移种、放罐夹套进水路：

冷冻水、循环水、热水（蒸汽）夹套回水路：

冷冻水、循环水、热水（蒸汽）排污管路.各种图形、颜色代表的意义截止截止阀、球、球阀、隔膜、隔膜阀电磁阀电磁阀止回阀止回阀.空气管道空气管道排污管道排污管道水管道水管道物料管道物料管道蒸汽管道蒸汽管道.第三部分、发酵基本操作过程罐罐检空消空消电极极标定定配料配料实消消接种接种中控培中控培养养放罐放罐洗罐洗罐检修修.第一：

罐第一：

罐检检目的：

快速检查发酵罐，确保发酵罐正常，可以上罐。

检查项目：

1.阀门：

所有阀门是否能正常使用、是否处于正确的位置。

2.压力表：

压力表是否归零。

3.PH和溶氧电极：

电极是否拔出并正确保养。

4.罐体：

罐内是否清洗干净。

5.搅拌电机：

点动电机，看电机运转是否正常。

6.搅拌叶轮、消泡装置是否紧固，有无松动等。

第二：

空消第二：

空消空消主要目的是在进罐生产前对设备清洁和杀灭其他微生物，防止因设备清洁不彻底或设备停用时间过久，微生物滋生，从而对生产造成影响。

1、放罐后及时清洗空消。

2、长期不用罐或更换品种、染菌罐需空消。

3、空消之后无菌空气保压待用。

.空消操作流程升温从空气路、取样路和出料路进蒸汽排净罐内的冷空气后关小排气阀，节省蒸汽灭菌调节空气一阀、取样一阀、出料一阀和排气阀控制压力压力0.140.16MPa,温度126128，时间30分钟降温排空罐内冷凝水自然冷却.第三、电极标定目的：

为了确保电极准确测量，必须在使用前对电极进行标定。

注意事项：

1.新电极或放置很久的电极必须激活以后才可以进行标定和使用。

PH电极用3moL/L的KCl溶液浸泡6小时激活，溶氧电极通电6小时激活。

2.PH电极标定的时候需要将接地电极放入盛放标准液的烧杯内。

3.接种以后设定好发酵参数，然后进行溶氧电极百分百标定。

.PH电极利用6.86的标准液进行电极零点标定，电压值在3000左右；利用4.0的标准液进行电极斜率标定，斜率在260左右；溶氧电极利用饱和NaSO3溶液进行电极零点标定，电压值在1300左右；百分百标定。

电极标定参数：

.第四第四：

配料配料增容：

实消过程中部分蒸汽会冷凝形成冷凝水进入培养基中，从而导致培养基体积变大，变大的部分即为增容。

不同的地区，不同的气候，不同的产品品种及原料增容量都会不同的，需要通过多次实消灭菌总结才能得到一个经验值。

10-30%领料：

正确填写领料单，从仓库领料，并从领料单签字确认。

溶料：

按工艺要求顺序溶解各种原料；原料全部溶解，无杂质、无硬块。

投料：

确认电极已经安装上，出料一阀已经关闭。

考虑增容和种子体积，定容到发酵消前体积。

.第五：

实第五：

实消消发酵罐实消是对发酵培养基进行彻底的灭菌处理,利用高温过饱和蒸汽的强穿透能力使各种细菌、真菌蛋白质凝固而死亡。

实消结束以后罐内是无菌的环境，需通入无菌空气进行保压直到培养结束。

实消操作流程预热：

打开夹套排污，用蒸汽进行预热当温度达到90度以上停止预热，关闭搅拌。

升温：

三路进汽；当压力升到0.05MPa时打开所有和罐体连接的排汽阀门，消毒过程不得有消毒死角。

保压：

调节三路进气及排汽，常规灭菌保压过程：

温度121压力0.1230分钟灭菌结束：

保压结束先关闭各小排气及取样、放料管路进汽，待罐压低于精过滤器压力后，快速关闭空气管路蒸汽阀门，打开空气阀门，调整进气、排气阀门，保持罐压0.05-0.1MPa；降温：

开启冷却水降温至工艺要求温度，降温过程注意罐压，防止罐压掉零。

.消毒过程中的注意事项消毒过程中的注意事项11、首先要结合配料工共同确认本批罐所用的原料为合格品，发现有结、首先要结合配料工共同确认本批罐所用的原料为合格品，发现有结块、变质的原料不得使用块、变质的原料不得使用。

22、在用泵向罐中打配制好的培养基时要注意保持稍开些进气，让料翻、在用泵向罐中打配制好的培养基时要注意保持稍开些进气，让料翻腾，以防（前期）培养基浓度过大沉淀粘附在罐底、结块等。

腾，以防（前期）培养基浓度过大沉淀粘附在罐底、结块等。

33、打完料后首先调至适宜的、打完料后首先调至适宜的PHPH，再确认一下所有的培养基都已加入后，再确认一下所有的培养基都已加入后封住罐口，开始从进气口、放料口、取样口等分路进入蒸汽封住罐口，开始从进气口、放料口、取样口等分路进入蒸汽。

各路保。

各路保持均衡进汽，防止短路持均衡进汽，防止短路和堵塞，排气要畅通，排汽量不宜过大，以节和堵塞，排气要畅通，排汽量不宜过大，以节约蒸汽。

约蒸汽。

44、在实消过程中要保持压力的稳定，不宜突然卸压升压以防造成大量、在实消过程中要保持压力的稳定，不宜突然卸压升压以防造成大量泡沫冒顶或逃料泡沫冒顶或逃料。

55、在实消控制时原则上以温度为准，压力为辅。

但是在保压时可能出在实消控制时原则上以温度为准，压力为辅。

但是在保压时可能出现压力表与温度计不对应的情况，现压力表与温度计不对应的情况，在不能确定到底是温度计还是压力在不能确定到底是温度计还是压力表失灵时，当压力表显示压力大于等于表失灵时，当压力表显示压力大于等于0.1Mpa,0.1Mpa,而温度不到而温度不到121121时，时，以温度计为准；反之，则以压力表为准以温度计为准；反之，则以压力表为准，总之要确保压力与温度都达，总之要确保压力与温度都达到灭菌要求。

到灭菌要求。

.66、如遇蒸汽压力突然升高，罐温超过规定，可适当缩短灭菌时间、如遇蒸汽压力突然升高，罐温超过规定，可适当缩短灭菌时间；如遇蒸汽压力突然下跌，一时上不来，温度下降到规定范围以下，可如遇蒸汽压力突然下跌，一时上不来，温度下降到规定范围以下，可适当延长灭菌时间，以确保灭菌彻底。

严防高温高压闷罐，否则容易适当延长灭菌时间，以确保灭菌彻底。

严防高温高压闷罐，否则容易造成培养基成分破坏和造成培养基成分破坏和PHPH值升高。

值升高。

77、在实消结束降温时在确定空气过滤器的压力大于罐压时，可以先、在实消结束降温时在确定空气过滤器的压力大于罐压时，可以先打开空气进气阀，再开冷却水阀以防外界空气倒吸进去打开空气进气阀，再开冷却水阀以防外界空气倒吸进去。

88、在降温过程中严防大开排气阀使罐压几乎跌零，特别是种子罐装、在降温过程中严防大开排气阀使罐压几乎跌零，特别是种子罐装料系数较大，这样做会使料液翻腾剧烈产生大量的泡沫，易出现冒顶料系数较大，这样做会使料液翻腾剧烈产生大量的泡沫，易出现冒顶或逃料或逃料。

99、在消移种管道时要确保整个管道打气畅通，严防堵塞、在消移种管道时要确保整个管道打气畅通，严防堵塞或排气不畅。

或排气不畅。

在消好后，通入无菌空气（即给管道降温又能使管道内保持正压）。

在消好后，通入无菌空气（即给管道降温又能使管道内保持正压）。

1010、移种结束后要把发酵罐调至正常培养状态并交工艺控制人员；填、移种结束后要把发酵罐调至正常培养状态并交工艺控制人员；填写移种记录；移种后对移种管道消毒，吹尽管道内参与种液，放置残写移种记录；移种后对移种管道消毒，吹尽管道内参与种液，放置残余种液在管道内滋生。

余种液在管道内滋生。

.第六、接种第六、接种ll接种方法：

压差接种法接种方法：

压差接种法ll接种材料：

种子液、火焰圈、接种材料：

种子液、火焰圈、95%95%酒精、酒精棉、镊子、打火酒精、酒精棉、镊子、打火机、石棉手套机、石棉手套ll注意事项：

注意事项：

1.1.环境：

关闭车间门窗和排气扇，接种环境周围禁止人员来回环境：

关闭车间门窗和排气扇，接种环境周围禁止人员来回走动，降低空气流动性；关掉搅拌。

走动，降低空气流动性；关掉搅拌。

2.2.无菌：

拔接种针护套时需靠在火焰附近，接种壶不可倾斜过无菌：

拔接种针护套时需靠在火焰附近，接种壶不可倾斜过度，避免种子液流出；接种操作过程中罐压不能掉零；度，避免种子液流出；接种操作过程中罐压不能掉零；3.3.安全：

罐压不可过高，防止接种管爆裂或脱落，接种失败；安全：

罐压不可过高，防止接种管爆裂或脱落，接种失败；4.4.接种之前要确认种子与罐的对应关系，防止接错种子。

接种之前要确认种子与罐的对应关系，防止接错种子。

.第七、工艺控制与记录1、记录每间隔1小时记录一次参数；主要参数有PH值、风量、转速、溶氧值、温度、压力和、补料量、备注等。

2.取样依据工艺要求按时取样送交化验部并做好镜检工作。

取样前后的消毒、废液的收集处理3.工艺控制根据工艺参数（如溶氧、PH）的变化和检测（糖、氮、OD、目的产物等）结果，对工艺参数进行调整控制。

3.设备巡查检查搅拌电机，看电机有没有异响、过热等；检查酸碱罐、消泡罐和补料罐装液量，及时补充；检查管道、阀门，看有无外漏。

.第八：

放罐第八：

放罐达到工艺放罐标准条件即可放罐，放罐操作流程如下：

1.提前通知后提取车间准备放罐2.取样（常温保存和低温保存）3.蒸汽消毒放罐管道4.检查管道阀门5.升压6.放罐7.吹洗放料管道内残余料液。

8.填写记录表格（放罐体积、工艺技术指标等）第九：

洗罐放罐结束以后立即进行洗罐，洗罐流程如下：

1.卸压：

打开罐盖前要先卸掉罐压；2.电极保养：

拔出电极清洗干净以后进行正确保养；PH电极用3摩尔每升的KCl溶液浸泡电极头；溶氧电极直接通电。

3.冲洗罐壁：

用高压水枪冲洗罐壁，如果罐壁培养基冲洗不掉则考虑碱煮（5%的碱液用夹套升温到80以后保温30分钟）；4.排污：

排掉污水。

.第十、检修目的：

确保阀门、法兰、机械密封和试镜灯等不会泄漏，以备下批生产使用；方法：

罐体通入空气保压在0.15MPa，然后用肥皂水进行试漏，出现泄漏的阀门待压力卸掉以后进行检修，更换相应的垫片。

.第四部分第四部分染菌的发生、原因分析及防治染菌的发生、原因分析及防治发酵工业自从采用纯种培养以后，产率有了很大提高，然而防发酵工业自从采用纯种培养以后，产率有了很大提高，然而防止染菌的要求也更高了。

染菌是发酵工业的致命伤，轻者影响产率、止染菌的要求也更高了。

染菌是发酵工业的致命伤，轻者影响产率、提取收率、产品质量和三废治理，严重者造成倒罐，浪费大量原材料，提取收率、产品质量和三废治理，严重者造成倒罐，浪费大量原材料，造成严重经济损失，而且扰乱生产秩序，破坏生产计划。

造成严重经济损失，而且扰乱生产秩序，破坏生产计划。

在发酵染菌之后，必须分析染菌原因，总结发酵染菌的经验在发酵染菌之后，必须分析染菌原因，总结发酵染菌的经验教训，把发酵染菌消灭在发生之前，防患于未然，是积极制服发酵染教训，把发酵染菌消灭在发生之前，防患于未然，是积极制服发酵染菌的最重要措施