化妆品中山梨酸脱氢乙酸含量测定方法.docx

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化妆品中山梨酸脱氢乙酸含量测定方法

附件3：

化妆品中山梨酸、脱氢乙酸的检测方法

（征求意见稿）

1范围

本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中山梨酸（CAS：

110-44-1）和脱氢乙酸（CAS：

520-45-6）含量的方法。

本方法适用于膏霜、乳液、水剂和啫喱等化妆品中山梨酸、脱氢乙酸的测定。

2方法提要

以甲醇为溶剂提取化妆品中山梨酸和脱氢乙酸，用高效液相色谱仪进行分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外吸收光谱定性，以峰面积定量。

本方法对山梨酸和脱氢乙酸的检出限均为6ng，定量下限均为15ng，如以取样0.2g计，检出浓度均为0.006%，定量下限浓度均为0.015%。

3试剂

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为一级实验用水。

3.1甲醇。

3.2甲酸。

3.3甲酸溶液：

取甲酸（3.2）1mL加水至1000mL。

3.4乙腈，色谱纯。

3.5山梨酸，纯度≥99%。

3.6脱氢乙酸，纯度≥99%。

3.7混合标准储备液（ρ=0.6g/L）：

准确称取山梨酸和脱氢乙酸标准品各0.03g，精确到0.0001g，置于50mL容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容。

4仪器

4.1高效液相色谱仪具二极管阵列检测器。

4.2超声波清洗器。

4.30.45µm滤膜。

4.4离心机，10000r/min。

4.5涡旋振荡器。

4.6天平,感量0.0001g。

5分析步骤

5.1样品预处理

准确称取样品0.2g（精确至0.001g），置于具塞比色管中，加入甲醇（3.1）定容至10mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min（工作频率20～43KHz，200W），必要时以10000r/min离心5min。

取上清液经0.45μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。

必要时用适当甲醇（3.1）稀释滤液备用。

5.2色谱参考条件

色谱柱：

C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；

流动相：

乙腈（3.4）+甲酸溶液（3.3）=25+75；

流速：

1mL/min；

检测波长：

二极管阵列检测器，检测波长290nm；

柱温：

30℃；

进样量：

5µL。

5.3标准曲线的制备

用甲醇（3.1）将混合标准储备液（3.5）稀释成含山梨酸和脱氢乙酸6.0、12.0、24.0、60.0、120µg/mL的混合标准溶液。

依次从混合标准溶液中取5µL注入高效液相色谱仪，记录各次色谱峰面积并绘制峰面积-浓度曲线并计算回归方程。

5.4测定

取5µL待测试样溶液注入高效液相色谱仪，根据峰的保留时间和紫外光谱图定性，根据峰面积从回归方程中查出待测试样溶液中山梨酸、脱氢乙酸的浓度，按“6计算”计算样品中山梨酸和脱氢乙酸的含量。

5.5平行实验

按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

6计算

式中：

w——样品中山梨酸或脱氢乙酸的质量分数，%；

ρ——测试溶液中山梨酸或脱氢乙酸的浓度，µg/mL；

V——样品定容体积，mL；

m——样品取样量，g。

7色谱图

脱氢乙酸

山梨酸

图1山梨酸、脱氢乙酸色谱图

色谱峰：

山梨酸TR=7.7min，脱氢乙酸TR=11.1min

8精密度与准确度

多家实验室验证，山梨酸低浓度时平均回收率为92.4%～99.5%，相对标准偏差小于1.3%；高浓度时平均回收率为97.1%～99.5%，相对标准偏差小于1.4%（n=6）；脱氢乙酸低浓度时平均回收率为90.9%～99.5%，相对标准偏差小于1.6%；高浓度时平均回收率为95.4%～99.0%，相对标准偏差小于1.7%（n=6）。

化妆品中山梨酸、脱氢乙酸含量测定方法起草说明

为加强化妆品中限用物质的监督管理，进一步提高化妆品产品使用安全性，国家食品药品监督管理局委托广东省药检所开展了化妆品中山梨酸、脱氢乙酸含量测定方法的起草和验证工作。

现就起草工作有关情况说明如下：

一、起草的必要性

山梨酸是国际粮农组织和卫生组织推荐的高效安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业，对霉菌、酵母、好气性细菌和丝状菌等均具有抑制作用，但对厌气菌和嗜酸乳杆菌无效，其抑菌作用比杀菌作用强。

据报道如果食品中添加的山梨酸超标严重，消费者长期服用，在一定程度上会抑制骨骼生长，危害肾、肝脏的健康。

我国《化妆品卫生规范》（2007年版）表4中规定，山梨酸及其盐类作为化妆品中限用防腐剂，化妆品中最大允许使用浓度为0.6%（以酸计）。

脱氢乙酸是一种低毒高效防腐、防霉剂，在酸、碱条件下均有一定的抗菌作用，尤其对霉菌的抑制作用最强。

在我国《化妆品卫生规范》（2007年版）表4中规定，脱氢乙酸及其盐类作为化妆品中防腐剂，化妆品中最大允许使用浓度为0.6%（以酸计）。

目前我国虽然有食品、药品等产品中山梨酸和脱氢乙酸的检测方法，但尚无统一和权威的化妆品中山梨酸和脱氢乙酸含量的专用测定方法。

为进一步提高化妆品中限用防腐剂山梨酸和脱氢乙酸的管理，广东省药检所对其在化妆品中的含量测定方法进行了研究并起草了本方法。

二、起草依据及参考文献

目前国内化妆品中山梨酸和脱氢乙酸等防腐剂含量测定方法方面的研究，由于山梨酸和脱氢乙酸是食品中常用的添加剂，故食品中山梨酸和脱氢乙酸含量测定的方法都有相应的国家标准，相关的研究和报道也有很多。

作为药品辅助原料成分，《中国药典》对此有详细的规定，国外药典中也有类似的详细检测方法规定，这些对于本方法的建立都有十分重要的参考作用。

部分相关的起草依据和文献资料如下：

（一）化妆品卫生规范（2007版）。

（二）化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范。

（三）ThecosmeticDirectiveofCouncilEuropeanCommunities,76/768/EEC.

（四）中国药典（2010版，第二部）。

（五）GB/T5009.29-2003食品中山梨酸,苯甲酸的测定方法。

（六）GB/T23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法。

（七）GB21703-2010乳和乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定。

（八）GB/T23377-2009食品中脱氢乙酸的测定高效液相色谱法。

（九）陈伟光,刘亚苓,韩青；化妆品中7种防腐剂同时测定的气相色谱法[J]；环境与健康杂志，2006，23

（2）：

171-173。

（十）姚浔平，李小平，姚珊珊，金米聪；高效液相色谱法同时测定食品中10种添加剂；中国卫生检验杂志，2009，19

（1）：

9-11。

（十一）蔡志斌，张英，刘丽；超高效液相色谱法同时测定冷饮中12种食品添加剂；实用预防医学，2011，18

（1）：

138-141。

三、起草原则

本检测方法兼具先进性、准确性以及可操作性强的特点，采用目前一般检测实验室普遍具备的分析技术，选择适宜、可行、便于实际操作的分析条件，保证检测方法的精确性和重现性。

四、起草过程

国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司（以下称保化司）于2011年4月委托广东省药检所开展化妆品中间山梨酸检测方法的建立和验证工作。

我们在查阅国内外相关文献资料等调研工作后，即刻开始了实验研究，2011年5月初完成了该方法的建立工作。

我所于9月初委托三家检验机构进行实验室验证。

三家验证单位按照协议书要求，陆续将验证材料报送我单位，我们将三家实验室方法验证材料进行整理、总结和分析，对方法进行完善。

2011年11月30日，我所组织召开了方法的专家研讨会，包括来自广东省疾控中心、广州市质检院等化妆品检验机构的共5位专家，对方法进行了全面的梳理及讨论。

会后，我们根据专家意见，对方法进行了进一步的完善后，形成此稿报送保化司。

2012年1月9日，保化司组织召开专家论证会，认为该方法基本满足现阶段化妆品中上述物质的检测要求，并提出了相关修改意见。

根据专家论证会意见，项目承担单位对检测方法进行了修改完善，并经2012年2月29日保化司司务会讨论通过后形成此征求意见稿。

五、重点说明的问题

（一）关于体例。

本检测方法的体例主要参照现行2007版《化妆品卫生规范》的卫生化学检验方法的体例，便于化妆品检验领域相关检验人员的阅读和实际操作。

（二）关于山梨酸和脱氢乙酸。

山梨酸化学名2,4-已二烯酸，英文名sorbicacid或hexa-2,4-dienoicacid，CAS编号110-44-1。

山梨酸属于酸性防腐剂，对霉菌、酵母、好气性细菌和丝状菌等均具有抑制作用，其防腐效果受pH影响，一般pH值愈低，防腐能力愈强。

山梨酸防腐原理是它能与微生物酶系统中的巯基（-SH）结合，形成共价键，使微生物失去活力从而达到抑制微生物增殖和防腐效果。

作为一种高效、低毒防腐剂山梨酸类常用于食品行业，其防霉能力是苯甲酸及盐的5-10倍，但毒性只是苯甲酸盐的1/4、食盐的1/2。

目前我国生产化妆品中较少添加山梨酸作为防腐剂，较多见于进口化妆品中。

目前欧盟EEC和我国《化妆品卫生规范》（2007年版）表4中规定，山梨酸及其盐类作为化妆品中限用防腐剂，化妆品中最大允许使用浓度为0.6%（以酸计）。

脱氢乙酸化学名3-乙酰基-6-甲基-2H-吡喃-2,4（3H）二酮，别名二乙酰基乙酰乙酸，英文名dehydroaceticacid，CAS编号520-45-6。

脱氢乙酸是一种低毒高效防腐、防霉剂，在酸、碱条件下均有一定的抗菌作用，尤其对霉菌的抑制作用最强。

目前欧盟EEC和我国《化妆品卫生规范》（2007年版）表4中规定，山梨酸及其盐类作为化妆品中限用防腐剂，化妆品中最大允许使用浓度为0.6%（以酸计）。

目前国内市面上含脱氢乙酸的化妆品较少，我们未能采购到含有脱氢乙酸的样品。

（三）关于检测方法的建立和验证。

山梨酸和脱氢乙酸含量常用的检测方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、电位滴定法和紫外分光光度法等。

电位滴定和紫外分光光度法比较适合成分简单、纯度较高的药品分析；气相色谱法灵敏度较高，方便，但是前处理较复杂以及杂质影响较大；液相色谱法适用的范围较广，适用于多种物质的同时测定，并且结果准确、可靠。

由于化妆品的剂型较多，所包含物质也较复杂，对于多种物质的含量测定，选用高效液相色谱法是一种比较合适的方法。

经过对化妆品中山梨酸和脱氢乙酸样品前处理方法分析、选择和优化，我们建立了化妆品中山梨酸和脱氢乙酸含量的高效液相色谱测定方法。

方法实验室内验证表明，本方法的山梨酸和脱氢乙酸定量限浓度为0.006%，定量下限浓度为0.015%，在6~120μg/mL浓度范围内呈线性（相关系数＞0.99），平均回收率在85%~115%范围内，平均相对标准差小于10%。

上述结果表明，本方法可以满足化妆品中山梨酸和脱氢乙酸的检测要求。

化妆品中山梨酸、脱氢乙酸含量检测方法的编制说明

一、基本信息

1简介

山梨酸是国际粮农组织和卫生组织推荐的高效安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业，对霉菌、酵母、好气性细菌和丝状菌等均具有抑制作用，但对厌气菌和嗜酸乳杆菌无效，其抑菌作用比杀菌作用强。

山梨酸溶于乙醇和乙醚，不溶于水，其化学性质与一元酸类似，可与碱反应生成盐。

脱氢乙酸是一种低毒高效防腐、防霉剂，在酸、碱条件下均有一定的抗菌作用，尤其对霉菌的抑制作用最强，可作为化妆品的防腐剂使用。

脱氢乙酸易溶于碱的水溶液，难溶于水，1g约溶于35mL乙醇或5mL丙酮，其饱和水溶液pH约等于4。

2属性信息

2.1山梨酸

2.1.1中文名：

2，4-已二烯酸

2.1.2英文名称：

sorbicacid或hexa-2,4-dienoicacid

2.1.3INCI名称：

sorbicacid

2.1.4分子式：

C6H8O2

2.1.5分子量：

112.13

2.1.6CAS号：

110-44-1

2.1.7结构式：

图1山梨酸结构

2.1.8限定标准：

作为限用防腐剂，化妆品中最大允许使用浓度为0.6%（以酸计）。

2.1.9理化特性：

性状：

白色针状或粉末状晶体；密度：

1.204（19℃），熔点（℃）：

132～135，沸点（℃）：

228（分解），闪点（℃）：

127；溶于乙醇和乙醚，不溶于水。

2.2脱氢乙酸

2.2.1中文名：

3-乙酰基-6-甲基-2H-吡喃-2,4（3H）二酮

2.2.2英文名称：

dehydroaceticacid

2.2.3INCI名称：

dehydroaceticacid

2.2.4分子式：

C8H8O4

2.2.5分子量：

168.15

2.2.6CAS号：

520-45-6

2.2.7结构式：

图2脱氢乙酸结构

2.2.8限定标准：

作为限用防腐剂，化妆品中最大允许使用浓度为0.6%（以酸计）。

2.2.9理化特性：

性状：

无色至白色针状或板状结晶或白色结晶粉末；无臭，略带酸味；熔点108~111℃（升华），沸点269.9℃；易溶于固定碱的水溶液，难溶于水，1g约溶于35mL乙醇和5mL丙酮；其饱和水溶液pH等于4。

二、方法选择与优化

1.分析方法的选择

虽然《化妆品卫生规范》（2007年版）对山梨酸类和脱氢乙酸类作为防腐剂在化妆品中的使用作出了规定，但并未规范化妆品中山梨酸和脱氢乙酸含量的测定方法。

目前国内已有化妆品中山梨酸和脱氢乙酸等防腐剂含量的测定方法研究报道，但尚无权威和统一的方法。

由于山梨酸和脱氢乙酸是食品中常用的添加剂，故食品中山梨酸和脱氢乙酸含量测定的方法都有相应的国家标准，相关的研究和报道也有很多。

作为药品辅助原料成分，山梨酸和脱氢乙酸在药品中也可能用到，《中国药典》对此有详细的规定，国外药典中也有类似的详细检测方法规定，这些对于本方法的建立都有十分重要的参考作用。

部分相关的检测方法和文献资料见表1。

山梨酸和脱氢乙酸含量常用的检测方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、电位滴定法和紫外分光光度法等。

电位滴定和紫外分光光度法比较适合成分简单、纯度较高的药品分析；气相色谱法灵敏度较高，方便，但是前处理较复杂以及杂质影响较大；液相色谱法适用的范围较广，适用于多种物质的同时测定，并且结果准确、可靠。

由于化妆品的剂型较多，所包含物质也较复杂，对于多种物质的含量测定，选用高效液相色谱法是一种比较合适的方法。

本方法参考有关文献资料，建立了化妆品中山梨酸和脱氢乙酸含量的高效液相色谱测定方法。

文献

检测方法

方法特性

提取方法

备注

GB/T5009.29-2003

GC

检出限1µg或1mg/kg；标曲50-250mg/kg

酸化石油醚萃取

酱油、果汁等，山梨酸

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

标曲100-1000mg/kg

氨水调至中性，水提取

薄层色谱

酸化石油醚萃取

GBT23495-2009

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

检出限1.2mg/kg；标曲20-320mg/kg

按样品形态1.氨水调至中性，水提取；2.沉淀蛋白质水提取；3正己烷萃取，乙酸盐酸化；

山梨酸

GB21703-2010

液相色谱

标曲10-50mg/kg

去除脂肪和蛋白质，甲醇提取

乳等，山梨酸

GBT23377-2009

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

定量限5mg/kg；标曲5-1000mg/kg

按样品形态1.碱调至中性提取，酸化，过固相柱；2.沉淀蛋白质后水萃取；3除蛋白质水提取；

黄油、酱菜、面包等，脱氢乙酸

超高效液相色谱法同时测定冷饮中12种食品添加剂

UPLC:

乙腈+磷酸盐溶液,梯度

检出限0.1mg/L;标曲0.1-50mg/L

水提取

冷饮，山梨酸

超声提取高效液相色谱法测定豆制品中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

标曲2.5-20mg/L

去除蛋白质，水提取

豆酱等，山梨酸

气相色谱法同时测定食品中多种防腐剂的研究

GC

检出限0.03µg/g；标曲0-500mg/kg

酸化乙醚萃取

饮料糕点等，山梨酸

高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂方法研究

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

检出限0.1mg/L;标曲4-100mg/L

除蛋白，碱水提取

食品，山梨酸

高效液相色谱法测定月饼中5种食品添加剂

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

标曲10-100mg/L

去除蛋白质，碱水提取

月饼，山梨酸，脱氢乙酸

高效液相色谱法同时测定食品中10种添加剂

HPLC:

乙腈+磷酸二氢铵溶液，梯度；pH＝4

检出限0.04mg/L标曲1-50mg/L；检出限1mg/L50-250mg/L

甲醇＋水pH=3提取

饮料等，山梨酸，脱氢乙酸

碱溶液反萃取高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸山梨酸的含量

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

检出限0.5mg/L;标曲10-40mg/L

酸性乙醚萃取，碱水洗脱，酸化

酱油，山梨酸

乙醚萃取HPLC测定食品中乙酰磺胺酸钾苯甲酸钠山梨酸钾和糖精钠

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

检出限2mg/L;标曲10-100mg/L

除蛋白质酸性乙醚萃取，脱水，挥干，甲醇复溶

食品，山梨酸

高效液相色谱法同时测定食品中的糖精钠苯甲酸山梨酸富马酸二甲酯和脱氢乙酸钠

HPLC:

甲醇+乙酸铵＋硫酸钠＋三氟乙酸溶液

检出限0.33mg/L;标曲0.5-200mg/L

甲醇提取，水定容

烘烤食品，山梨酸、脱氢乙酸

高效液相色谱分析食品中多种添加剂的方法研究

HPLC:

甲醇+乙酸铵溶液

检出限0.14mg/kg;标曲25-125mg/L

除蛋白后水中性提取

食品，山梨酸

HPLC法同时测定果冻中的防腐剂甜味剂

HPLC:

甲醇+乙腈+三氟乙酸溶液

检出限0.027mg/kg;标曲0-350mg/L

水中性提取

果冻，山梨酸

化妆品中7种防腐剂同时测定的气相色谱法

GC

检出限57.1ng/mL;标曲200-600µg/g

无水硫酸钠甲醇提取

乳膏水剂化妆品,山梨酸

液相色谱法测定化妆品中山梨酸和苯甲酸

HPLC:

硼酸缓冲+过氯酸钠溶液

标曲0-116µg/g

水剂直接提取;霜剂碱性硫酸锌水提取

水霜剂,山梨酸

化妆品中苯甲酸、水杨酸、山梨酸、脱氢醋酸及对羟基苯甲酸酯的测定方法

HPLC:

磷酸缓冲+甲醇+乙腈溶液

标曲10-40µg/mL

无水硫酸钠甲醇提取,过固相浓缩柱分类;水霜剂:

水提取,酸化乙醚萃取蒸干,乙腈+乙醇复溶;粉剂,牙膏:

乙腈提取,乙醇定容;油脂:

固相柱分离,乙腈+乙醇

化妆品,山梨酸，脱氢乙酸

USP34

滴定法

甲醇水中溶解，氢氧化钠滴定

山梨酸

USP34

滴定法

乙醇溶解，氢氧化钠滴定

脱氢乙酸

表1山梨酸和脱氢乙酸的检测方法

本方法制定过程中有针对性地开展了不同液相色谱条件和流动相，不同色谱柱，检测波长，提取方法，扩展线性范围和检出限，日间线性等方面对方法有效性、准确性和稳定性等层面影响的研究。

本实验室研究过程中山梨酸对照品来自Dr.EhrenstroferGmbH，批号90622，含量99.0％；脱氢乙酸对照品来自T.C.I公司，批号GJ01-TFIF，含量99.9％。

2.色谱柱和色谱仪的选择

研究过程中试用了多家公司生产的多种液相色谱柱和多种高效液相色谱仪，如图3至图5所示。

脱氢乙酸

山梨酸

图3用Agilent1200液相色谱仪和AgilentZorbaxXDB-C18（250mm×4.6mm×5µm）柱的结果

图4.用Aglient1260液相色谱仪和CAPCELLPAKMGⅡC18（150mm×4.6mm,5μm）柱的结果

图5用Waterse2695液相色谱仪和CAPCELLPAKMGⅡC18（150mm×4.6mm,5μm）柱的结果

表2液相色谱分离的性能

结果表明，不同的色谱柱和液相色谱仪山梨酸和脱氢乙酸基本都能得到较理想的分离。

为确保山梨酸和脱氢乙酸分离良好，分离度应不小于1.5，建议柱塔板数大于8000。

3.色谱条件选择

山梨酸和脱氢乙酸均为弱酸性物质，在流动相中会发生电离，从而使色谱峰产生较严重的拖尾，实践表明脱氢乙酸的情况更为严重。

为改善这种情况，使用适当缓冲盐和扫尾剂体系是有必要的。

我们研究了不同色谱流动相条件时山梨酸和脱氢乙酸分离的效果，包括使用甲醇+0.02M乙酸铵、甲醇+0.1%磷酸、乙腈+0.1%磷酸和乙腈+0.1%甲酸体系。

结果表明，乙腈+0.1%磷酸和乙腈+0.1%甲酸体系分离效果和保留时间等较为合适。

经过验证，本方法最终选择了乙腈+0.1%甲酸=25+75的流动相。

图6使用乙腈+0.1%甲酸=25+75流动相时的结果

4.检验波长的选择

本方法液相色谱条件下山梨酸和脱氢乙酸的紫外吸收峰形如图7和图8所示，山梨酸的最大吸收在260纳米左右且其吸光系数较大，在较短和较长波长段吸收都较小；脱氢乙酸的最大吸收波长在310纳米左右，在225纳米左右还有一个较小的吸收峰。

从吸光峰形可以看到两种物质的吸光效果缺少重叠区域，但在230纳米和290纳米左右两种物质均有较强紫外吸收，且浓度相近时紫外吸收峰的峰高近似相等。

由于《化妆品卫生规范》中规定两种物质的限用情况相同，实验发现在230纳米段样品杂质的干扰，综合考虑下本方法选择290纳米作为检测波长，结果表明此波长完全满足检测方法灵敏度和稳定性的要求。

对于带有二极管阵列紫外光检测器的高效液相色谱仪，可以使用紫外光谱结合色谱峰保留时间对山梨酸和脱氢乙酸的分离进行定性。

试验表明，如果允许的话，分别选择260nm和310nm作为山梨酸和脱氢乙酸的检测波长可以进一步提高本方法的灵敏度。

图7山梨酸的紫外吸收

图8脱氢乙酸的紫外吸收

5.线性范围和检出限扩展

为进一步考察本方法的精密度、稳定性和灵敏性情况，研究过程中还对方法的线性范围和检出限范围进行了扩展性研究。

虽然方法的线性范围是6至120μg/mL，但是在1.2至300μg/mL范围内的线性仍然非常好。

对于更低浓度下的检出限，如图9所示，在低至0.24μg/mL浓度下紫外吸收仍然非常明显。

考虑到应用时不同色谱仪的分辨率差异，最终检出限的范围仍然定为1.2μg/mL。

结果表明本方法的灵敏度高、线性范围大，如果有必要的话完全可以扩展到更大线性范围。

图9检出限的扩展

6.稳定性考察

本方法制定过程中进一步研究了方法的稳定性。

在研究的当日、次日、隔日和第十日均考察了山梨酸和脱氢乙酸标准溶液、水剂化妆品标准溶液、乳剂化妆品标准溶液、膏剂化妆品标准溶液的线性，发现其标准曲线的线性良好并能持续保持稳定。

在方法制定过程中，大约每间隔4小时左右考察山梨酸和脱氢乙酸标准溶液高、低两种浓度的稳定性，发现其能保持稳定。

在方法制定过程中我们大约进行了600余次的液相色谱测试，发现山梨酸和脱氢乙酸的液相色谱紫外吸收峰形保持良好、漂移小，基线和峰面积均较稳定。

结果表明本方法的稳定性十分良好。

三、验证

根据《关于印发化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范的通知》（国食药监许[2010]455号）（以下简称《规范》），对建立方法进行验证。

1.实验室内部方法验证

1.1方法特异性

分别考察水剂、乳剂和膏剂三种典型剂型的化妆品空白和添加山梨酸和脱氢乙酸后的色谱图。

结果如图10至图16所示，表明三种典型剂型的基质中存在的物质对本方法目标检测物质没有干扰。

山梨酸

脱氢乙酸

图