斑蝥素及斑蝥素类衍生物研究进展.docx

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斑蝥素及斑蝥素类衍生物研究进展

斑蝥素及斑蝥素类衍生物研究概况

2008级博士初华丽学号:

B0815701

由鞘翅目芫菁科（Meloidae）昆虫体内提取的斑蝥素（cantharidin，C10H12O4）是一种重要的抗癌物质，它是一种单萜类的防御物质，其性寒味辛，有剧毒。

中医认为“斑蝥的药用价值在于其外用能蚀死肌、敷疥癣、除恶疮，内服有攻毒、逐瘀散结、抗肿瘤等作用”【1】。

现代药理学的研究证实：

斑蝥素具有很好的抗菌、抗病毒作用，可以很好治疗皮肤上的病毒性疣、瘤等疾病。

除此之外，斑蝥素有很好的抗癌活性，特别是对原发性肝癌有特效。

随着人们对斑蝥素研究的逐渐深入，斑蝥素开始被广泛利用，而斑蝥素类的衍生物因为在保持了斑蝥素的抗癌活性的同时毒性降低，开始作为重要的抗癌药物被人们所重视并研究。

1斑蝥素的研究概况

1.1斑蝥素的结构及化学性质

1810年法国学者Robiquet【2】首次从鞘翅目芫菁科昆虫中提取了斑蝥素晶体物质。

此后被Gadamen【3】经研究证明了斑蝥素（cantharidin）的化学结构及性质。

斑蝥素是一种单萜类的化学物质，其结构为外型-1,2-顺二甲基-3,6-氧桥六氢化邻苯二甲酸酐，其升华温度为120℃，熔点215～216℃。

1.2斑蝥素的提取

当前所用斑蝥素都是来自野外采集芫菁提取而得，1980年Dauben【4】在1.52×107kPa下利用Diels-Alder反应经12步合成了斑蝥素，但反应条件苛刻，产率底，不宜规模化生产。

通过研究，人们发现斑蝥素具有溶解于丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯等油脂，并且微溶于热水的性质，将芫菁成虫干燥后粉碎，经浓盐酸酸化、丙酮提取、浓缩、重结晶，得到药用成分斑蝥素【5】。

此后，周游等【6】应用自行设计的电刺激活体提毒装置，对大斑芫菁活体成虫内的斑蝥素进行了提取研究。

结果表明，利用电刺激作为主要手段进行人工提毒装置与传统的斑蝥死体提毒相比，活体提毒法能够充分利用活体芫菁成虫生活期中的再生恢复能力，获取更多的纯品斑蝥素，能够提高斑蝥资源的利用率，并且此方法具备加快提毒速度，降低成本，提高取毒安全性等优点，是一种更方便且使用的提取斑蝥素的新方法。

梅清华等通过研究还探讨了用超声波的方法提取斑蝥素的最佳工艺【7】，其结果表明：

以0.125mol·L-1氢氧化钠溶液作溶剂的情况下，600KHz超声波提取斑蝥素40min（25+15）可获得与煎煮法相当提取率（P>0.05），验证了该超声波提取工艺的可行性。

研究者普遍采用中华人民共和国药典中规定的直接浸提法及酸水解法，李晓飞等研究对斑蝥样品制备方法进行改进，并且与药典中的方法进行比较【8】，结果表明：

其改进后的酸水解法处理后的斑蝥素含量要高于采用药典中规定方法处理后的斑蝥素含量的1倍多，并且节约了材料，能源和水资源，是一种简单又经济的方法。

1.3斑蝥素的活性、抗癌机制及临床功效

斑蝥素作为重要的抗肿瘤中药材已经投入到了临床，实验表明，斑蝥素能够缓解原发性肝癌患者病情，平均能够延长患者11个月生存率【9】。

除能够有效的缓解原发性肝癌、贲门癌、食道癌、消化道肿瘤、乳腺癌、纤维瘤、肺癌等肿瘤症状外，斑蝥素还具有治疗尖锐湿疣（特别是妇女下生殖道尖锐湿疣）、风湿病、急性扁桃体炎乳腺癌、纤维瘤、何杰金氏病、等功效。

随着斑蝥素越来越广泛的在临床上投入应用，对斑蝥素药物活性及其抗癌机理的研究成为当今的抗肿瘤药物研究的热门。

而当前对斑蝥素药物活性的研究主要集中在国内，国外学者对其抗癌机制的研究较多。

李晓飞等【10】将提取的斑蝥素作用于体外培养的人喉癌HEP-2细胞及人胃癌BGC-823细胞研究了斑蝥素对两种癌细胞的药物活性，并得出结论：

斑蝥素对人喉癌HEP-2细胞和人胃癌BGC-823细胞均有显著的抑制作用，且随药物浓度升高其抑制作用增强，测得其抑制中浓度分别为2.88µmol/L和54.85µmol/L，但细胞周期测定结果表明，斑蝥素未能够诱导HEP-2细胞发生凋亡。

据王晓华等【11】报道，斑蝥素对人宫颈癌Hela细胞的增殖有抑制作用，24、48、72h的的IC50值分别为3.2、2.5和1.4µg／ml。

且流式细胞术仪结合AnnexinV-FTTC/PI双染法定量检测发现，斑蝥素1.4mg/ml作用后24h的Hela细胞凋亡比例为5.3%，染色为FTTC+/PI-；72h时细胞凋亡比例增至22.1%，染色为FTTC+/PI+，结果证明细胞周期出现明显的G2／M期阻滞。

2000年孙震晓等【12】研究并证明了斑蝥素及去甲斑蝥素能够诱导人红白血病K562细胞凋亡，且凋亡大部分发生在细胞周期的M期，也有少量发生在细胞间期。

此外，高振梅等【13】试验并报道了斑蝥素对NTH/3T3细胞具有抑制作用，并呈剂量依赖关系，并预测了斑蝥素对防治纤维化有关疾病的前景。

金伟等【14】采用MTT法和流式细胞技术，研究了斑蝥素对HL-60细胞和QGY7703细胞的存活率和细胞周期分布影响，结果显示：

斑蝥素对HL-60细胞的IC50是15.34µmol/L，对QGY7703细胞的IC50是18.54µmol/L，且斑蝥素在所用剂量下能够诱导HL-60细胞发生凋亡。

王晓华等【15】通过斑蝥素对A549细胞增殖作用的研究，得出结论斑蝥素对A549细胞的增殖有抑制作用，药物作用24、48和72h的IC50值分别为3.2、2.5、1.4mg·L-1。

其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G2/M期阻滞。

国内还有学者将重点放在了对斑蝥素诱导癌细胞凋亡的研究，从而探讨其抗癌机制。

周季兰等【16】采用Hoechst染色、TUNNEL染色及流式细胞术检测到了斑蝥素对人胰腺癌细胞SW1990凋亡的改变，并用RT-PCR和Westernblot法检测凋亡基因p53、Bcl-2及Bax的表达，其结果表明斑蝥素能够诱导SW1990细胞凋亡，其作用与p53、Bax基因和下调Bcl-2有关。

何太平等【17】研究并报道，斑蝥素作用卵巢癌细胞HO-8910PM时，药物对癌细胞的IC50值为47.99µmol/L，流式细胞术分析细胞在S期有明显的凋亡峰出现，并得到结论斑蝥素抗肿瘤细胞凋亡机制可能与NF-Κb（p65）、Caspase-3的表达下调以及FAK酪氨酸磷酸化水平下调有关。

张卫东等【18】通过MAPK途径对肺癌A549细胞周期阻滞及其分子机制进行了研究，研究表明：

斑蝥素能够抑制A549细胞的增殖，24h的IC50值为3.2mg/L，斑蝥素作用于A549细胞后引起G2/M期阻滞，p34cdc2、phos-p34cdc2蛋白表达量未改变，cyclinB1、survivin蛋白表达量减少，p21蛋白表达量增加。

ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2表达量降低。

推测斑蝥素通过调节cyclinB1、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变能够特异性地引起G2/M期阻滞。

国外学者对斑蝥素抗癌机制的研究也逐渐深入，韩国学者Huh等【19】对斑蝥素作用于人U937细胞并引起细胞凋亡做了深入的研究，通过MAPK途径选取PD98059,SB202190和SP600125用于抑制ERK-1/2,p38和JNK蛋白，结果表明PD98059未影响细胞毒性及凋亡，但SB202190和SP600125通过引起p53，MDM-2，p21、caspase-3的下调，并通过比色测定其干扰caspase-3活性，证明斑蝥素能够通过激活p38和JNKMAP激酶信号通路引起U937细胞凋亡。

2006年Huan等【20】报道了斑蝥素作用人膀胱癌细胞的研究，斑蝥素作用于人膀胱癌T24细胞6，24，48 h后，测得的IC50值分别为21.8，11.2和4.6 μm。

且作用时间增加后，细胞毒性未增强。

此外，药物作用后PARP、pro-caspase3及Bcl-2蛋白的表达被抑制，处理期间caspase3抑制显著并引起细胞死亡。

然而当低剂量的斑蝥素作用T24细胞时，细胞周期阻滞于G2/M期，此时p21Cip1/Waf1表达增加，cyclinA，B1和cdk1蛋白表达减少，当斑蝥素剂量加大时（>12.5 μm），药物可刺激T24细胞ATP减少从而引起细胞死亡，并且斑蝥素还刺激T24细胞内COX2的过度表达以及PGE2产生，呈药物剂量依赖关系。

因此斑蝥素可通过将细胞阻滞于G2/M期及引起COX2的过度表达从而诱导人膀胱癌T24细胞凋亡。

Jiang等【21】在研究斑蝥素及其他3种药物对肿瘤干细胞的药物活性中还提出，斑蝥素及姜黄素作用于肿瘤干细胞的抗癌活性与喜树碱比较则相对较低。

2斑蝥素类衍生物研究概况

斑蝥素虽具有重要的抗癌活性，但其对肾脏的毒性及副作用也相对较高，这也成为抗癌药物研制中难以突破的一个重要问题。

随着人们对斑蝥素的深入研究，多种斑蝥素类衍生物随即出现，这些斑蝥素的合成物由应用药理学，应用组合化学等方法进行结构改造，并更好的应用于临床治疗，其作用可能更强，毒性较斑蝥素也更小【22】。

2.1去甲斑蝥素抗癌活性及机理研究概况

在系列斑蝥素类衍生物中，目前研究抗癌活性及机制较多的是去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）。

黄松音等【23】探讨了去甲斑蝥素抑制人乳腺癌细胞SKBR3增殖及侵袭转移的机制，并得出结论，去甲斑蝥素具有抗癌活性，可以抑制乳腺癌SKBR3细胞增殖，且抑制作用亦呈剂量效应关系，采用MTT法测得IC50值为12.5mg/L，通过流式细胞术分析，当10mg/L去甲基斑蝥素作用于癌细胞24h，48h后，能够特异地使SKBR3细胞发生G2/M期阻滞，且G2/M期细胞百分比分别为35.82%、38.70%，G1期和S期细胞较对照组明显减少,亚G1和G0峰DNA含量逐渐增加，24h、48h的凋亡率分别为3.44%和6.17%。

试验并证实了SKBR3细胞的体外黏附、运动、侵袭转移能力随NCTD药物浓度提高而下降，可知去甲斑蝥素可抑制肿瘤细胞对基质黏附、迁移运动及侵袭转移。

2000年戎熠等【24】报道了去甲斑蝥素作用人乳腺癌细胞系MCF-7的抗肿瘤作用的分子机制的研究，结果表明，10μg/ml的去甲斑蝥素作用12h后，MCF-7细胞变形、出泡，从培养瓶底脱离。

流式细胞术检测，药物作用24h后，G1期细胞减少，G2+M期细胞明显增多，随着药物作用时间的延长，细胞凋亡百分比逐渐增加【25】。

且凋亡抑制基因bcl-2蛋白的表达明显降低，以此推论，诱导MCF-7细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。

据孙振晓等【26】报道，10mg/L去甲斑蝥素作用人肝癌BEL-7402细胞24h后，部分细胞出现了细胞固缩、细胞质膜突起、核染色质出现异常，并伴有膜包被的凋亡小体的形成。

经过免疫细胞组化及Westernblot分析显示该过程伴随bcl-2蛋白表达减弱，分析可得去甲斑蝥素能够诱导人肝癌BEL-7402细胞发生凋亡，且凋亡与bcl-2蛋白表达下调有关。

唐龙英等【27】利用细胞培养技术，以结晶紫染法测定了去甲斑蝥素对人卵巢癌3AO和AO细胞的体外杀伤作用，并通过电镜观察了NCTD在体内对卵巢癌的作用效应。

结果表明，体外实验时，NCTD对卵巢癌3AO和AO细胞均有杀伤作用，且呈浓度和时间依赖性，测得IC50值分别为20μg/ml和10μg/ml，PCM下观察药物作用后的细胞变圆并呈悬浮状，TEM观察药物作用后的肿瘤细胞胞浆大片脱落，线粒体水肿，细胞质呈空泡样。

并利用流式细胞仪测定分析NCTD作用两种肿瘤细胞的细胞周期变化发现，肿瘤细胞G2+M期细胞百分比明显升高，而S期细胞百分比相应的明显降低，提示NCTD抗肿瘤细胞增殖的机制可能与其将肿瘤细胞阻滞于G2+M期有关【28】。

而体内试验表明，无论腹腔注射还是刘内注射NCTD都有一定的抑瘤效应，且随着治疗时间的延长肿瘤增长变得缓慢。

李琦等【29】通过动物实验研究了去甲斑蝥素治疗大鼠肝癌的疗效以及其机制，但在试验中通过改良药物采用乳化-化学交联法制备了去甲斑蝥素微球（N-MS），并对照不同药物组对作用治疗大鼠肝癌效果做了比较，结果表明：

单纯采用NCTD肝动脉介入治疗的抗癌效果并不理想，而去甲斑蝥素微球介入治疗后肿瘤组织坏死明显，生长受到抑制，荷瘤大鼠生存期延长，肿瘤细胞发生凋亡，kit-67蛋白表达下降，而提示下调KIT-67的表达可能引起肿瘤细胞坏死或诱导肿瘤细胞凋亡。

安巍巍等【30】还通过MTT法、Hoechst33258染色、DNA凝胶电泳和乳酸脱氢酶（LDH）活力检测法研究了去甲斑蝥素抑制小鼠肺纤维瘤L929细胞的作用机制，结果表明NCTD对L929细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性。

而在NCTD作用后，磷酸化ERK和磷酸化JNK的蛋白含量增加，提示ERK和JNK的磷酸化作用可能参与了NCTD诱导L929细胞凋亡的作用。

对于去甲斑蝥素作用肿瘤细胞的研究中，赵聚山等【31】还报道了去甲斑蝥素对体外人肝癌细胞SMMC-7721及人胃癌细胞SGC-7901生长的影响。

MTT结果显示，去甲斑蝥素在体外对人肝癌细胞SMMC-7721及人胃癌细胞SGC-7901生长均有抑制作用并表现出明显的剂量效应关系，且去甲斑蝥素对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制率略高于人胃癌细胞SGC-7901细胞生长的抑制率。

赵泽明等【32】通过建立裸鼠人胆囊癌移植瘤模型进行随机药物体内实验研究NCTD对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭和转移的影响及其机制，研究表明：

在动物实验中，NCTD可明显减少荷瘤裸鼠移植瘤的瘤周组织浸润和肺转移瘤结节（P<0.05），免疫组化检测显示药物作用后MMP-2蛋白表达下降，而nm23、TIMP-2表达上升（P<0.05），NCTD与5-FU联合应用时作用更加明显，从而推测其抑癌机制可能与NCTD影响基质溶解和转移相关基因表达有关。

林桂凤等【33】综述了去甲斑蝥素诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究，并从对细胞增殖周期的影响；对细胞凋亡信号转导途径的作用以及对肿瘤细胞黏附的影响三个方面具体陈述。

相关NCTD作用乳腺癌细胞的报道当中，梁莉等【34】选取耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7adr并比较其在不同剂量NCTD下细胞生长及凋亡的影响。

结果表明：

：

NCTD对乳腺癌细胞MCF-7adr的生长有明显的抑制作用，且呈剂量、时间依赖性。

药物处理48h后，MCF-7adr细胞内ki-67、PCNA蛋白阳性指数下降，在光镜下MCF-7adr细胞出现发泡和细胞碎裂，Hoechst染色证实NCTD处理后MCF-7adr细胞出现凋亡，流式细胞术测得NCTD作用细胞48h后出现亚二倍体峰，凋亡率随给药剂量的增加而增加，期间细胞突变型p53蛋白的表达率由（97.8±1.64）％下降为（47.2±9.8）％，Bcl-2蛋白表达率由（98.87±3.74）％下降为（17.5±1.64）％，从而推测NCTD抑制MCF-7adr生长，诱导细胞凋亡可能与相关凋亡因子bcl-2及突变型蛋白的表达降低有关。

去甲斑蝥素对人膀胱肿瘤也有显著的效果，沈海山等【35】研究报道了去甲斑蝥素对人膀胱肿T24细胞生长抑制作用，并探讨其作用机理，证明去甲斑蝥素在体外对T24细胞增殖有显著的抑制作用，在药物浓度为60µmol/L时，随着药物作用时间的延长Bax表达逐渐增加，而bcl-2表达逐渐减少，且Caspase-3、-8、-9的活性均增加，提示其机制可能为导致细胞凋亡的原因。

刘季芳等【36】在去甲斑蝥素抗人肾癌方面也做了比较深入的研究，分别应用MTT法、流式细胞术和实时定量PCR检测NCTD对体外培养的人肾癌786-0细胞的生长抑制率、细胞周期和凋亡率以及肿瘤凋亡控制因子Bcl-2、BaxmRNA表达的变化，结果表明：

NCTD能够抑制体外人肾癌786-0细胞增殖，且随着NCTD浓度升高及处理时间的延长作用增强，有明显的时间-剂量依赖性。

流式细胞术分析显示，细胞在S期减少，G2/M期细胞增多，凋亡率上升。

实时定量PCR结果表明，当NCTD浓度为80µmol/L处理细胞24h后，Bcl-2mRNA表达量明显减少，BaxmRNA表达的水平升高，Bcl-2/Bax比值下降，说明NCTD抑制人肾癌786-0细胞生长并诱导细胞凋亡的机制可能与干扰786-0细胞生长周期、抑制DNA合成代谢以及影响凋亡相关基因Bcl-2的表达及增强促凋亡基因Bax的表达有关。

除NCTD直接作用肿瘤细胞的研究外，国内还相继报道了几篇关于去甲斑蝥素与其他药物联合抗癌效果的研究。

凌昌全等【37】采用一种新型的药物辅助材料泊洛沙姆作为药物控释载体，制成去甲斑蝥素-泊洛沙姆（NCTD-P407）缓释制剂，应用于临床注射治疗肝癌发现，NCTD-P407治疗过程中仅见部分患者发热及血清丙氨酸氨基转移酶轻度增高，其抑制肿瘤生长、降低AFP水平和延长患者生存期方面的疗效更佳。

梁福佑等【38】用单抗3A5制备与去甲斑蝥素的偶联物3A5-NCTD，并作用于移植人肝癌细胞BEL-7402的裸鼠研究其治疗效果，结果显示，与NCTD单独作用相比，3A5-NCTD对裸鼠移植人肝癌细胞BEL-7402具有更强的治疗作用，其对肿瘤的抑制率提高了近2倍。

此外，方茵等【39】通过在去甲斑蝥素两环之间引入双键，并引入氨原子，以使分子结构与核酸的碱基结构更加相似，有利于形成氨键，合成了去甲斑蝥素去氧脱氢类似物，并期望其具有更高的抗癌活性。

陈筠等【40】研究了去甲斑蝥素与阿霉素对人胆管癌细胞QBC939的体外作用，去甲斑蝥素和阿霉素在单独作用于胆管癌细胞QBC939时均显示出增殖抑制作用，且呈剂量依赖性。

而去甲斑蝥素和阿霉素联合作用效果优于两者单纯的相加，流式细胞术结果显示，两药联合使用可以使QBC939细胞阻滞于G0/G1期，从而诱导细胞凋亡。

An等【41】研究认为，去甲斑蝥素的毒性作用是去甲斑蝥素诱导Hela细胞凋亡的主要原因，而其抗癌机制可能与caspses，线粒体及MAPKs信号通路有关。

Huang等【42】在研究去甲斑蝥素对抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的机制中还提出，其药物作用后导致细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡的原因可能是因为减少了Akt与NF-κB表达的磷酸化程度从而导致Bcl-2/Bax表达比率的减少。

Yi等【43】研究去甲斑蝥素对耐药性人红白血病细胞系K562的体外试验结果表明，去甲斑蝥素作用下细胞阻滞于G2/M期，抑制了细胞DNA的合成，并推测去甲斑蝥素可能对白血病具有很好的疗效。

Chen等【44】以HepG2，Hep3B和Huh-7三株人肝癌细胞系为研究对象，深入研究了去甲斑蝥素对其的增殖抑制作用及可能机制，通过研究结果发现，去甲斑蝥素作用癌细胞后，Cdc25C和p21Cip1/Waf1两种蛋白的表达及磷酸化水平明显增高，p53蛋白表达降低但未影响Cdk1和p27Kip1表达水平，此外Bcl-2及Bcl-XL磷酸化水平增加也没有影响Bax和Bad的表达，药物作用后引起的HepG2细胞内caspase-9和caspase-3被激活，导致细胞凋亡。

以此推测，增加p21Cip1/Waf1的表达和Bcl-2、Bcl-XL的磷酸化水平，以及激活caspase-9和caspase-3可能是NCTD引起肝癌细胞凋亡的机制。

Chen等【45】在研究去甲斑蝥素对结肠癌细胞系CT-26的抑制效果时还发现，NCTD能够抑制结肠癌细胞系CT-26的细胞迁移运动及侵袭转移。

Li等【46】在对去甲斑蝥素抑制HL-60增殖机制的研究中，首次提出了NCTD的抗癌机制可能与Cdc6机能的失调有重要关系。

Peng等【47】在研究去甲斑蝥素对Colo205，HT-29，SW480三株结肠癌细胞系的抑制机制中还得出结论，去甲斑蝥素能够通过激活CD95受体配体系统，特异性地引起结肠癌细胞凋亡。

An等【48】从分子水平上研究了NCTD诱导人黑色素瘤细胞A375-S2凋亡的机理，其结果说明，诱导细胞凋亡的原因与caspase及线粒体通路的激活有关。

近期，Luan等【49】报道了去甲斑蝥素抗肺癌的增殖效果及机制，其结果表明，去甲斑蝥素能够抑制人肺癌A549细胞的增殖，且呈剂量时间依赖关系，Westernblot分析显示随着药物剂量的增加，Bcl-2蛋白表达下降，而Bax蛋白表达水平提高，导致Bcl-2/Bax比率减小。

此外，NCTD抑制了细胞A549迁移运动，还通过减小Bcl-2/Bax蛋白比率从而增强了TSA、celecoxib和lovastatin等抗癌因子的活性。

2.2斑蝥酸钠的研究概况

斑蝥酸钠是斑蝥素类的半合成衍生物【50】，其分子式为C10HI2Na2O5，分子量为258，是斑蝥素与氢氧化钠共热时水解生成【51】。

它不仅保持了斑蝥素所特有的抗癌活性，且毒性、刺激性也比斑蝥素要小，尤其对泌尿系统的毒副作用显著降低，还能明显改善患者的生存治疗【52】，当前对其抗癌活性及机制的研究也较多。

梁枫等【53】以人食管癌Eca109细胞系作为研究对象，采用MTT法，流式细胞技术检测了斑蝥酸钠作用下Eca109细胞的生长和凋亡的变化，探讨其抗食管癌的作用机理，结果表明，斑蝥酸钠作用24h后人食管癌Eca109细胞出现明显的生长抑制现象，大剂量组通过流式细胞术检测可见凋亡峰，凋亡率明显增加，与细胞对照组相比差异有显著性的意义，以此证实大剂量斑蝥酸钠在体外可抑制食管癌细胞生长，并诱导食管癌细胞凋亡。

房德芳等【54】使用不同剂量的斑蝥酸钠体外不同时间段内对人肝癌细胞HepG2和正常肝细胞L-02做了对其药物活性以及毒性的比较研究，结果显示：

小、中、大剂量斑蝥酸钠作用24h对肝癌HepG2的抑制率为分别为-0.16%、8.66%、9.56%；而作用48h对癌细胞抑制率分别为40.89%、49.38%、41.78%；作用72h对HepG2的抑制率为47.68%、46.01%、39.79%。

小、中、大剂量斑蝥酸钠作用48h对正常肝细胞L-02抑制率分别为24.33%、32.55%、29.38%。

中、大剂量作用24h、48h、72h对HepG2和L-02具有明显抑制作用（P<0.01），数据显示中剂量（5μg/mL）的斑蝥酸钠作用48h对HepG2抑制率较大而对L-02抑制率较小，具有较好的临床应用价值。

为了探索斑蝥酸钠抗肝癌的机制，高伟等【55】对斑蝥酸钠抑制HepG2细胞增殖的机制做了深入一步的研究，试验分别采用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学法、比色法等分别检测细胞增殖抑制率、细胞周期变化、Survivin蛋白表达和Caspase-3活性。

结果表明斑蝥酸钠抑制了HepG2细胞增殖，细胞阻滞于细胞周期的G2/M期，药物作用引起Survivin蛋白表达水平下降，且促凋亡因子Caspase-3活性增强。

刘展华等【56】在研究斑蝥酸钠对人肺癌LAC细胞增殖的抑制作用中得出结论：

斑蝥酸钠能抑制人肺癌LAC细胞的增殖，且斑蝥酸钠作用LAC细胞可引起S期细胞明显减少，从而使细胞被阻止于G0/G1期，期间部分细胞发生凋亡，出现亚二倍体凋亡峰。

临床方面，由斑蝥酸钠和维生素B6配制的注射液在对肝癌的治疗研究中显示出了很好的疗效。

据赵航宇等【57】报道，斑蝥酸钠维生素B6联合放疗均对HepG2增殖有明显的抑制作用，并呈现浓度依赖性特点，当药物浓度为5.0mg/L，作用72h，斑蝥酸钠维生素B6对HepG2细胞的抑制率最大，且当斑蝥酸钠维生素B6与X射线对HepG2的抑制效果具有协同作用，通过流式细胞术分析结果显示，单独给药斑蝥酸钠维生素B6或使用X射线作用HepG2均可诱导细胞凋亡，斑蝥酸钠维生素B6作用后再对其进行X射线照射，其诱导细胞凋亡率增加了1倍多，说明斑蝥酸钠维生素B6可以增强肝癌细胞的放射敏感性。

另据国外学者报道，斑蝥酸钠对膀胱癌细胞的抑制作用效果奇佳【58】，还能增强肿瘤组织局部免疫状态，促进自然杀伤细胞和浸润肿瘤淋巴细胞的抗肿瘤效应【59】。

2.