乳酸脱氢酶及其辅酶I的作用.docx
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乳酸脱氢酶及其辅酶I的作用
的作用
■乳酸脱氢酶由酶蛋白和辅酶I组成,两者单独存在时,无催化活性,必须共同存在组成全酶才起作用。
乳酸脱氢酶在各种组织细胞广泛存在,它可逆地催化乳酸脱氢形成丙酮酸或丙酮酸接受氢生成乳酸。
在代谢过程中,有重要意义,反应中由辅酶I（NAD+）起传递氢作用。
乳酸脱氢酶属于不需氧脱氢酶,不能直接将氢交给氧,反应中生成的还原型辅酶I,可与其它酶蛋白结合,将氢传给其它的递氢体,通过呼吸链被彻底氧化。
试验原理：
!
1!
■本实验以乳酸为底物。
用新鲜的动物肌肉的粗制提取液,分别制成酶蛋白部分（用白陶土吸附除去辅酶I）和辅酶部分（加热破坏酶蛋白）”观察两者单独作用及共同作用。
实验中为了便于观察,用甲烯兰（即美兰）做为受氢体。
已知甲烯兰能从还原型黄酶接受氢而由蓝色变成无色（甲烯白）。
所以本实验中根据溶液兰色的消退判断乳酸脱氢反应的发生。
操作步骤：
■Is分别制备酶蛋白提取液及辅酸I提取液
（1）除去辅酶I的酶蛋白提取液：
取新鲜动物肌
肉组织3g,剪碎放研钵中加玻璃砂约o.5g,白陶土0.5g,加PH7.40.1M磷酸缓冲液8ml,研细成粥状。
移入离心管中,以2000rpm离心5分钟，倾于另一试管中备用。
（2）辅酶I提取液
:
取蒸懾水10ml于中试管中
麟沸漏蠶觀组飜競聚
发可加盖。
稍冷后倾入乳钵中研细,移入离心
管中2500rpm离心5分钟,取上清液备用。
2、取试管4只,标清管号,按下表加样:
1
2
3
4
5%乳酸钠提取液（ml）
0.5
0.5
0.5
/
酶蛋白提取液（ml）
0.5
/
0.5
0.5
辅酶I提取液（ml）
/
0.5
0.5
0.5
蒸馆水（ml）
0.5
0.5
/
0.5
0.5%KCN液（滴）
10
10
10
10
0.04%甲烯兰液（滴）
10
10
10
10
■3、充分混匀,向各管徐徐加入液体石腊5滴（避免与空气接触），静置试管架上或放37C水浴15，〜30，随时观察并记录各管退色情况,分析结果。
注：
■Is乳酸脱氧生成的丙酮酸与KCN结合,不发
生其逆反应。
■2、本实验中生成的甲烯白易被空气氧化又成
为甲烯兰,所以在加入液体石腊后观察褪色时不宜振荡。
■3、观察退色的管z振荡片刻会出现什么变
化？
再放置一段时间有什么变化?
解释这些现象。
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