生物技术药物质量控制.ppt

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生物技术药物质量控制生物技术药物质量控制李平生概概述述v利用人体内的天然物质治疗人类的疾病或达到某利用人体内的天然物质治疗人类的疾病或达到某种医学效果一直是医学上的一个重要研究领域。

种医学效果一直是医学上的一个重要研究领域。

v20世纪世纪70年代以来产生了年代以来产生了DNADNA重组技术，这种新重组技术，这种新技术是现代生物技术的主体，近年来首先在医药技术是现代生物技术的主体，近年来首先在医药领域获得了飞速发展。

生物技术的应用领域获得了飞速发展。

生物技术的应用2/3用于医用于医药，生物技术新型药物和疫苗已有药，生物技术新型药物和疫苗已有50多种产品投多种产品投放市场，放市场，400多种正在进行临床试验，多种正在进行临床试验，2000多种多种在临床前研究。

在临床前研究。

v据报道，国外据报道，国外65006500万人接受重组乙肝疫苗、万人接受重组乙肝疫苗、10000万人接受万人接受t-PAt-PA治疗，超过治疗，超过5050万人使用万人使用EPOEPO，每天约每天约有有10001000万人接受重组人胰岛素的治疗。

万人接受重组人胰岛素的治疗。

v生物技术产品的生产和管理按生物制品的生物技术产品的生产和管理按生物制品的要求进行，不仅对最终产品的质量实施有要求进行，不仅对最终产品的质量实施有效控制，而且特别重视对生产工艺的全过效控制，而且特别重视对生产工艺的全过程进行质量控制程进行质量控制,其中包括对每个生产步其中包括对每个生产步骤的验证、质量检定（骤的验证、质量检定（QC）、）、质量保证部质量保证部（QA）对生产和质量检定的全过程进行严对生产和质量检定的全过程进行严格的管理。

格的管理。

1、概念：

、概念：

2、分类、分类生物技术药物生物技术药物重组重组DNADNA药物药物重组蛋白质药物重组蛋白质药物采用采用DNADNA重组技术或其他新生重组技术或其他新生物技术生产的治疗和预防药物技术生产的治疗和预防药物。

物。

1、重组蛋白质或重组多肽药物包括：

、重组蛋白质或重组多肽药物包括：

细胞因子类：

细胞因子类：

rIFNrIFN、IL-2IL-2、EPOEPO等；等；抗细胞素治疗：

抗细胞素治疗：

CD4CD4可溶性受体等；可溶性受体等；重组溶血栓类：

重组溶血栓类：

rSKrSK、rSAKrSAK等；等；人源化单克隆抗体制剂；人源化单克隆抗体制剂；重组疫苗和菌苗制剂。

重组疫苗和菌苗制剂。

2、重组、重组DNA药物包括：

药物包括：

v寡核苷酸药物：

反义核酸等；寡核苷酸药物：

反义核酸等；v基因药物：

腺病毒基因药物：

腺病毒-IL-2-IL-2、腺相关病毒腺相关病毒-凝凝血血因子；腺病毒因子；腺病毒-P53-P53v细胞治疗制剂：

抗原致敏的人树突状细胞细胞治疗制剂：

抗原致敏的人树突状细胞vDNADNA疫苗：

治疗乙型肝炎、爱滋病的核酸疫苗：

治疗乙型肝炎、爱滋病的核酸疫苗等疫苗等。

我国生物技术药物质量标准研究现状我国生物技术药物质量标准研究现状v现代医药生物技术的发展以及人类基因组计划现代医药生物技术的发展以及人类基因组计划的完成和遗传病基因的不断发现，对医药领域的完成和遗传病基因的不断发现，对医药领域产生了巨大影响。

产生了巨大影响。

v自自1982年第一个基因重组药物年第一个基因重组药物重组胰岛素上重组胰岛素上市以来，全世界约有市以来，全世界约有60余种重组产品开发成功，余种重组产品开发成功，包括基因工程药物、基因工程抗体，重组疫苗、包括基因工程药物、基因工程抗体，重组疫苗、反义核苷酸药物、基因治疗药物、反义核苷酸药物、基因治疗药物、DNA疫苗。

疫苗。

v我国在我国在“七五七五”、“八五八五”、“九五九五”期间国期间国家家“863”高技术项目支持下，先后建立一系列高技术项目支持下，先后建立一系列基因重组制品质量标准和质控方法，共完成国基因重组制品质量标准和质控方法，共完成国家一类、二类新药家一类、二类新药20余种产品的质量标准研究。

余种产品的质量标准研究。

生物技术药物质量标准研究的依据生物技术药物质量标准研究的依据一、主要依照一、主要依照重组重组DNADNA产品质量控制要点产品质量控制要点、中国生物制品规程中国生物制品规程、中国药典中国药典等要求等要求进行。

进行。

二、参考世界卫生组织（二、参考世界卫生组织（WHOWHO）和美国和美国FDAFDA颁布颁布的指南、的指南、ICHICH文件和文件和欧洲药典欧洲药典。

检定标准、检定方法：

准确可靠、切实可行；检定标准、检定方法：

准确可靠、切实可行；保证产品安全、有效。

保证产品安全、有效。

生物技术药物质量标准研究的内容生物技术药物质量标准研究的内容1、目标产品的均一性目标产品的均一性2、建立目标产品生物学活性或免疫学效价测定方法建立目标产品生物学活性或免疫学效价测定方法3、研究建立目标产品的免疫学活性的测定方法及质、研究建立目标产品的免疫学活性的测定方法及质控标准控标准4、研究建立国家标准品或参考品研究建立国家标准品或参考品5、建立目标产品生产相关杂质的限量分析方法和标建立目标产品生产相关杂质的限量分析方法和标准准6、制定出保证上述生物技术产品临床安全、有效、制定出保证上述生物技术产品临床安全、有效、与与WHO标准相一致的质量控制标准和规范化的检定标准相一致的质量控制标准和规范化的检定方法方法重组产品质量控制上存在的难点重组产品质量控制上存在的难点v建立重组药物的生物学活性测定方法；建立重组药物的生物学活性测定方法；v理化测定标准品的稳定性；理化测定标准品的稳定性；v人源化单抗中的人源化程度检测方法及标准研究；人源化单抗中的人源化程度检测方法及标准研究；v重组人白蛋白等大剂量重组产品安全性评价问题；重组人白蛋白等大剂量重组产品安全性评价问题；v反义核酸药物理化特性测定和效力测定，即如何评反义核酸药物理化特性测定和效力测定，即如何评价反义核酸的体内及体外活力；价反义核酸的体内及体外活力；v基因治疗药物的安全性评价包括反转录病毒、生物基因治疗药物的安全性评价包括反转录病毒、生物分布和效力测定；分布和效力测定；vDNA疫苗的安全性和效力检测方法研究；疫苗的安全性和效力检测方法研究；v干细胞治疗产品的质量标准的建立（干细胞鉴定及干细胞治疗产品的质量标准的建立（干细胞鉴定及活力测定）活力测定）。

我国基因工程产品安全管理我国基因工程产品安全管理法规和技术指南法规和技术指南传代细胞系生产生物制品的规程传代细胞系生产生物制品的规程人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点预防用新生物制品临床研究的技术要求预防用新生物制品临床研究的技术要求人用重组人用重组DNA制品质量控制要点制品质量控制要点人的体细胞治疗申报临床试验指导原则人的体细胞治疗申报临床试验指导原则人基因治疗申报临床试验指导原则人基因治疗申报临床试验指导原则药理毒理检查指导原则药理毒理检查指导原则药品生产质量管理办法药品生产质量管理办法药品注册管理办法药品注册管理办法生物技术药物的质量控制生物技术药物的质量控制生物技术药物的特点：

生物技术药物的特点：

1、来源：

活的生物体（细菌或细胞）；、来源：

活的生物体（细菌或细胞）；2、结构：

复杂（包括组成、空间结构）；、结构：

复杂（包括组成、空间结构）；3、生产：

涉及生物材料和生物学过程（发、生产：

涉及生物材料和生物学过程（发酵、细胞培养，分离纯化等），酵、细胞培养，分离纯化等），有其固有的易变性。

有其固有的易变性。

生物技术药物的质量控制生物技术药物的质量控制质量控制包括两个方面：

质量控制包括两个方面：

1、生产过程中质量控制、生产过程中质量控制GMP（硬件、软件）硬件、软件）2、最终目标产品的质量控制（方法学研究）、最终目标产品的质量控制（方法学研究）质量控制方法学研究具体内容质量控制方法学研究具体内容一、生物学活性测定和比活性一、生物学活性测定和比活性二、蛋白质纯度检查二、蛋白质纯度检查三、蛋白质含量测定三、蛋白质含量测定四、蛋白质药物理化性质的鉴定四、蛋白质药物理化性质的鉴定五、蛋白质的二硫键分析五、蛋白质的二硫键分析六、对糖蛋白的特殊要求六、对糖蛋白的特殊要求七、残余杂质检查七、残余杂质检查八、安全性及其他检测项目八、安全性及其他检测项目九、生物技术药物待测样品保存九、生物技术药物待测样品保存一、生物学活性测定和比活性一、生物学活性测定和比活性11、意义：

、意义：

11）基因工程产品的化学本质为蛋白质、多肽，其）基因工程产品的化学本质为蛋白质、多肽，其活性由产品的氨基酸序列或其空间结构所形成活性由产品的氨基酸序列或其空间结构所形成的活性中心所决定的，与其绝对的活性中心所决定的，与其绝对质量质量不一致。

不一致。

22）基因工程产品的生物学活性与药效学基本相一）基因工程产品的生物学活性与药效学基本相一致。

致。

33）利用生物学活性建立的测定效价体系，是给药）利用生物学活性建立的测定效价体系，是给药品定量的依据，保证产品药效的重要手段。

品定量的依据，保证产品药效的重要手段。

效价测定一般原则效价测定一般原则11、国际通用方法；、国际通用方法；22、测定结果须用国际或国家标准品校、测定结果须用国际或国家标准品校正，以国际单位表示。

正，以国际单位表示。

生物学活性测定方法分类生物学活性测定方法分类11）体外细胞培养测定法）体外细胞培养测定法aa、促进细胞生长作用（促进细胞生长作用（G-CSF:

NFS-G-CSF:

NFS-6060）bb、抑制细胞生长作用抑制细胞生长作用（TNF:

L929）（TNF:

L929）cc、间接保护细胞作用间接保护细胞作用（IFN:

VISH;VSV）（IFN:

VISH;VSV）22）离体动物器官测定法离体动物器官测定法采用家兔主动脉条测定重组脑利钠肽生采用家兔主动脉条测定重组脑利钠肽生物活性。

物活性。

33）体内测定法体内测定法44）生化酶促反应测定法生化酶促反应测定法55）免疫学活性测定法免疫学活性测定法v取兔离体动脉条剪成约取兔离体动脉条剪成约1.5cm1.5cm长、长、223mm3mm宽宽的螺旋环，悬挂于含的螺旋环，悬挂于含10mL10mL通氧的通氧的3737台氏液台氏液（取取NaC18.0gNaC18.0g、KC10.2gKC10.2g、CaClCaCl20.2g20.2g、NaHNaH22POPO440.05g0.05g、MgSOMgSO447H7H22O0.1gO0.1g、NaHCONaHCO331.0g1.0g、Glucose1.0gGlucose1.0g用蒸馏水配成用蒸馏水配成10001000mLmL的溶液，的溶液，置于玻璃或塑料瓶中，用置于玻璃或塑料瓶中，用1molL1molL-11NaOHNaOH溶液调溶液调pHpH至至7.4）7.4）的麦氏浴槽中，加负的麦氏浴槽中，加负荷荷1g1g，稳定，稳定1h1h，期间每，期间每20min20min换换11次台氏液：

次台氏液：

连接多导记录仪，调节灵敏度，记录血管的连接多导记录仪，调节灵敏度，记录血管的张力变化。

张力变化。

v待张力曲线基线稳定后，加入待张力曲线基线稳定后，加入1.25mgmL1.25mgmL-1-1盐酸盐酸去氧肾上腺素溶液去氧肾上腺素溶液0.050.05mLmL于麦氏浴槽中使其终于麦氏浴槽中使其终浓度为浓度为6.25106.2510-5-5mgmLmgmL-1-1，曲线升高至最高，曲线升高至最高并稳定后，开始按累计浓度给药法并稳定后，开始按累计浓度给药法（曲线稳定后曲线稳定后对倍增加样品浓度为：

对倍增加样品浓度为：

6.25106.2510-5-58.0108.010-2-2RUmLRUmL）加入重组人脑利钠肽对照品，记录血管加入重组人脑利钠肽对照品，记录血管的张力变化。

完成上述给药后，洗脱并稳定的张力变化。

完成上述给药后，洗脱并稳定1h1h，期问每，期问每20min20min换换11次台氏液。

待基线稳定后，次台氏液。

待基线稳定后，按测定对照品的方法测定待测样品，记录测定结按测定对照品的方