组织学与胚胎学--绪论上皮1.ppt
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1组织学组织学与胚胎学与胚胎学2组织学与胚胎学组织学与胚胎学3第一章第一章组织学绪论组织学绪论Chapter1IntroductionofHistology1、组织学、组织、嗜酸性、嗜碱性的、组织学、组织、嗜酸性、嗜碱性的概念概念2、组织学学习方法要点、组织学学习方法要点3、石蜡切片术和超薄切片术的基本原、石蜡切片术和超薄切片术的基本原理理4、HE染色法染色法本章重点本章重点5绪论绪论(Introduction)I.什么是组织学什么是组织学(Histology)?
组织学是研究人体组织学是研究人体正常正常细微细微结构及其相关功能结构及其相关功能的科学。
的科学。
细胞、组织、器官、系统细胞、组织、器官、系统A.微观结构微观结构:
1.光学显微镜光学显微镜(Lightmicroscope,LM):
计量单计量单位是位是微米微米(m)。
(1m=0.001mm)。
2.电子显微镜电子显微镜(Electronmicroscope,EM):
计量单计量单位是位是纳米纳米(nm)。
(1nm=0.001m)。
6光学显微镜基本结构光学显微镜基本结构:
1.照明灯照明灯(Lamp)2.聚光器聚光器(Condenser)3.载物台和切片夹载物台和切片夹(Mechanicalstageandspecimenretainer)4.推进器推进器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物镜物镜(Objectives)6.粗细螺旋粗细螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目镜目镜(Oculars)8.照相机等接口照相机等接口(Connectiontocamera,etc.)7几种特殊的光学显微镜几种特殊的光学显微镜u相差显微镜(相差显微镜(phasecontrastmicroscope)倒置相差倒置相差显微镜显微镜(invertedphasecontrastmicroscope)u荧光显微镜荧光显微镜(fluorescencemicroscope)u暗视野显微镜(暗视野显微镜(darkfieldmicroscope)u共聚焦激光扫描显微镜共聚焦激光扫描显微镜(confocallaserscanningmicroscope,CLSM)u偏光显微镜偏光显微镜8图图1919免疫组织化学(荧光素标记)免疫组织化学(荧光素标记)毛细血管内皮细胞呈毛细血管内皮细胞呈vWFvWF阳性阳性910B.相关功能相关功能:
微观结构和其功能微观结构和其功能相适应相适应,反之亦然反之亦然。
C.人体结构的人体结构的4个层次个层次:
1.细胞细胞(Cell):
人体结构的基本结构和功能单位。
人体结构的基本结构和功能单位。
2.组织组织(Tissue):
由一群结构和功能相同或相似的细胞由一群结构和功能相同或相似的细胞(及及其细胞间质其细胞间质)构成。
人体内有构成。
人体内有4种基本组织:
种基本组织:
上皮组织,结上皮组织,结缔组织,肌组织和神经组织。
缔组织,肌组织和神经组织。
3.器官器官(Organ):
由组织有机地结合起来而构成。
由组织有机地结合起来而构成。
4.系统系统(System):
由结构相似且功能相关的器官构成。
由结构相似且功能相关的器官构成。
11人啊,认识你自己!
在科幻电影在科幻电影阿凡达阿凡达中,人通过脑电波控制可以掌控克隆外星人中,人通过脑电波控制可以掌控克隆外星人“阿凡达阿凡达”的躯体。
的躯体。
“阿凡达阿凡达”异体操控成真异体操控成真科幻电影科幻电影阿凡达阿凡达中,人通过脑电波控制可以掌控克隆外星人中,人通过脑电波控制可以掌控克隆外星人“阿凡达阿凡达”的的躯体。
美国科研人员躯体。
美国科研人员18日报告说,他们首次在猴子身上实现了这种异体操控,日报告说,他们首次在猴子身上实现了这种异体操控,这一成果有助于未来帮助瘫痪者重新控制自己的身体。
这一成果有助于未来帮助瘫痪者重新控制自己的身体。
12II.为什么要学习组织学为什么要学习组织学?
1.组织学又叫组织学又叫微观解剖学微观解剖学(Microanatomy),是,是解剖学解剖学知知识的进一步完善。
识的进一步完善。
2.结构是功能的基础,学好组结构是功能的基础,学好组织学是学好织学是学好生理学生理学(Physiology)的基础。
的基础。
3.只有了解正常结构,才能学只有了解正常结构,才能学习其异常变化。
因此组织学是习其异常变化。
因此组织学是病理学病理学(Pathology)的基础。
的基础。
13III.怎样学习组织学怎样学习组织学?
A.LM技术技术:
分辨率分辨率(Resolution)是指能是指能够分辨相邻两点之间的够分辨相邻两点之间的最小最小距离距离。
LM的分辨率约为的分辨率约为0.2m。
1.切片切片(Section):
将组织将组织切薄使切薄使光线可以透过光线可以透过。
a.取材、固定取材、固定(Fixation):
为为保存保存新鲜组织的微观结构,新鲜组织的微观结构,尽快将组织浸入到酒精,甲尽快将组织浸入到酒精,甲醛,苦味酸,醛,苦味酸,Bouins液或液或Zenkers液等固定剂中。
液等固定剂中。
14b.石蜡包埋石蜡包埋(Paraffinembedding):
*脱水脱水(Dehydration):
用用浓度逐渐升高的浓度逐渐升高的酒精酒精(70100%)将组织中的水完将组织中的水完全置换出来。
全置换出来。
*透明透明(Clearing):
用用二二甲苯甲苯完全置换出酒精。
完全置换出酒精。
*浸蜡浸蜡(Infiltration):
在在6062C时,用时,用液态石蜡液态石蜡完全置换出二甲苯。
室温完全置换出二甲苯。
室温时时石蜡凝固石蜡凝固成固态,内含成固态,内含待切组织。
待切组织。
15c.切片切片:
用切片机将组织切成用切片机将组织切成120m厚厚的蜡片,然后将其放的蜡片,然后将其放到温水上,待其完全展开后,到温水上,待其完全展开后,裱到裱到有粘附剂的载玻片上。
有粘附剂的载玻片上。
16除切片外,还有其他处理组织的方法:
除切片外,还有其他处理组织的方法:
*铺片铺片(Wholemount):
用于很薄的组织,如肠系膜。
用于很薄的组织,如肠系膜。
*磨片磨片(Groundsection):
用于很坚硬的组织,如骨和牙。
用于很坚硬的组织,如骨和牙。
涂片涂片(Smear):
用于液态组织,如血液,精液和唾液。
用于液态组织,如血液,精液和唾液。
火棉胶切片火棉胶切片(celloidinsectioncelloidinsection):
较硬组织、时间长。
较硬组织、时间长。
较硬组织、时间长。
较硬组织、时间长。
冰冻切片冰冻切片(frozensectionfrozensection):
保持酶活性、迅速诊断。
保持酶活性、迅速诊断。
保持酶活性、迅速诊断。
保持酶活性、迅速诊断。
172.染色染色(Staining):
染料可以将微观结构显示不同的染料可以将微观结构显示不同的颜色以便观察鉴别。
在染色前,需要颜色以便观察鉴别。
在染色前,需要脱蜡入水脱蜡入水,因为,因为染料是水溶性的。
染料是水溶性的。
18图图77HE染色染色(左上)苏木精(左下)伊红(左上)苏木精(左下)伊红(下)染好的切片脱水后加盖玻片(下)染好的切片脱水后加盖玻片19a.最常用的染色方法是最常用的染色方法是苏木素苏木素(Hematoxylin,H)伊红伊红染色染色(Eosin,E),简称,简称HE染色染色。
*苏木素是苏木素是碱性碱性染料,染料,蓝紫色蓝紫色,可以使,可以使细胞核及细胞质中的核细胞核及细胞质中的核糖体糖体着色。
被苏木素着色的结构本身为着色。
被苏木素着色的结构本身为酸性酸性,具有,具有嗜碱性嗜碱性(Basophilic)。
20*伊红是伊红是酸性染料酸性染料,粉红色粉红色。
可以将大多数细胞的。
可以将大多数细胞的细胞质及细胞质及细胞间质细胞间质染成粉红色。
染成粉红色。
被伊红着色的结构本身为被伊红着色的结构本身为碱性碱性,具有,具有嗜酸性嗜酸性(Acidophilic)。
*不易被苏木素和伊红着色的结构具有不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性嗜中性(Neutrophilic)。
21肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝肥大细胞的颗粒被甲苯铵蓝(一种蓝色染料一种蓝色染料)染成紫红色染成紫红色b.如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同,该结如果某结构显示的颜色和染料本身的颜色不同,该结构具有构具有异染性异染性(Metachromasia)。
c.如果某结构能将银离子还原成银原子,并吸附银原子如果某结构能将银离子还原成银原子,并吸附银原子而使自身显示棕黑色,该结构具有而使自身显示棕黑色,该结构具有嗜银性嗜银性(Argyrophilic)。
22网状纤维具有嗜银性,因此可以用银盐染色来显示。
网状纤维具有嗜银性,因此可以用银盐染色来显示。
23H&E染色的中等动静脉染色的中等动静脉d.不同的染色方法,其结果不同。
不同的染色方法,其结果不同。
24醛复红染色的中等动静脉醛复红染色的中等动静脉25在染色后,重新进入酒精和二甲苯,最后用中性树胶在染色后,重新进入酒精和二甲苯,最后用中性树胶封片封片,以便长期保存。
,以便长期保存。
*切片切片:
固定固定梯度酒精梯度酒精二甲苯二甲苯石蜡。
石蜡。
*染色染色:
石蜡石蜡二甲苯二甲苯梯度酒精梯度酒精水。
水。
*保存保存:
水水梯度酒精梯度酒精二甲苯二甲苯中性树胶。
中性树胶。
26二、电镜技术二、电镜技术1.透射电镜技术(透射电镜技术(transmissionelectronmicroscopeTEM)a.标本制作标本制作5080nm的超薄切片的超薄切片b.染色染色重金属盐染色重金属盐染色c.超微结构超微结构d.电子密度高、电子密度高、低低27电子密度高电子密度高:
当电子束投当电子束投射到射到密度大吸附密度大吸附重金属多重金属多的结构的结构时时,电子被散射的电子被散射的多多,因此因此,射落到射落到荧荧光屏上的电子光屏上的电子少而呈暗像少而呈暗像,电镜电镜照片呈照片呈黑黑或深灰或深灰色色,称为称为电子密度电子密度高。
高。
反之称为反之称为电电子密度低。
子密度低。
282.扫描电镜技术扫描电镜技术(SEM)a.标本制作标本制作不需不需制作超薄切片制作超薄切片b.染色染色重金属盐染色重金属盐染色c.超微结构超微结构用于观察组织细胞用于观察组织细胞表面表面结构,具有真实的结构,具有真实的立体感。
立体感。
29303.EM的组织的制备与的组织的制备与LM的相似,但有以下不同的相似,但有以下不同:
a.通常使用戊二醛和四氧化锇作通常使用戊二醛和四氧化锇作双重固定双重固定。
b.切片切片超薄超薄(厚度小于厚度小于90nm),塑胶塑胶包埋。
包埋。
c.用用重金属盐重金属盐如醋酸铀或醋酸铅等染色。
因此,所有如醋酸铀或醋酸铅等染色。
因此,所有原始的电镜图片都是原始的电镜图片都是黑白黑白的。
的。
TEM:
电子密度高、电子密度低电子密度高、电子密度低3132TEM显示胰腺腺泡显示胰腺腺泡细胞内部结构。
细胞内部结构。
33其它的显微镜技术其它的显微镜技术u冷冻蚀刻(freezeetchinemethod)观察细胞断裂表面结构u分析电镜X射线显微分析术(X-raymicroanalysis)研究细胞、组织内元素含量及分布3435电镜:
“两暗夹一明两暗夹一明”CC膜膜:
36C.特殊的染色方法特殊的染色方法:
1.组织化学组织化学(Histochemistry,细胞化学细胞化学)法法:
通过生物化通过生物化学的学的方法在原位产生不溶解的有颜色的反应产物,来显示方法在原位产生不溶解的有颜色的反应产物,来显示微细结构的位置,然后用显微镜观察。
微细结构的位置,然后用显微镜观察。
PAS反应反应:
用来显示用来显示多糖及糖蛋白多糖及糖蛋白的糖链的糖链的分布。
先的分布。
先用过碘酸用过碘酸(Periodicacid)将多糖氧化,在多糖表面形将多糖氧化,在多糖表面形成戊二醛结构,然后用无色亚硫酸品红成戊二醛结构,然后用无色亚硫酸品红(Schiff试剂试剂)还原戊二醛形成还原戊二醛形成紫红色沉淀紫红色沉淀。