胶体金法生产工艺规程模板之欧阳音创编.docx
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胶体金法生产工艺规程模板之欧阳音创编
1.适用范围
时间：
2021.03.11
创作：
欧阳音
适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。
2.职责
研发部：
制定本规程。
生产管理部：
执行本规程
质量管理部：
按本规程执行，监督本规程的执行情况。
3.内容
3.1.依据
《乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）》产品标准
3.2.产品名称、剂型、规格
3.2.1名称：
（1）商品名：
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）
（2）英文名：
DiagnosticKitforAntibodytoHepatitisBSurfaceAntigen（ColloidalGoldImmunochromatagraphicAssay）
（3）汉语拼音名：
YixingGanyanBingduBiaomianKangtiJianceShiji（jiaotijinFa）
3.2.2.类型：
三类6840体外诊断试剂。
3.2.3.规格：
100T/盒（25T/筒*4筒）（无卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）
3.3.产品概述
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（T）和质控线（C）分别包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。
当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG则在质控线（C）与羊抗兔IgG结合显现红色条带。
阴性样本则仅在质控线（C）显色。
3.4.试剂盒组成、储存、有效期
3.4.1.试剂盒组成：
组件
100T/盒
25袋/盒（1支/袋）
50袋/盒（1支/袋）
装量
数量
装量
数量
装量
数量
试纸条
25条/筒
4筒
无
无
无
无
试纸卡
无
无
1支/袋
25袋
1支/袋
50袋
样品稀释液
2ml
4瓶
2ml
1瓶
2ml
2瓶
说明书
1份
1份
1份
1份
1份
1份
3.4.2储存条件：
2-30℃保存。
3.4.3.有效期：
24个月。
3.5.生产工艺流程图文件末（23页）。
3.6.生产工艺过程及工艺条件
3.6.1配液
根据以下各配方，按各相关试剂配制作业指导书进行配制。
原料名称
用量
配制环境：
原料名称
用量
配制环境：
原料名称
用量
配制环境：
3.6.2样品稀释液分装
按照《液体分装作业指导书》，根据相应规格的装量要求进行分装，分装量＝规格+附加量。
如下表所示（单位：
ml/瓶）：
标示量
附加量
装量
15ml
0ml
15ml
3.6.3胶体金制备
原料名称
用量
烧金溶液A
烧金溶液B
超纯水
制备环境：
金标车间配料间（十万级洁净区）
（1）量取ml超纯水到适当大小的烧瓶中；
（2）量取ml烧金溶液A并加入烧瓶中；
（3）水沸腾后，加入已经平衡的烧金溶液Bml；
（4）水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器，并将烧瓶移至桌面，用铝箔纸盖住瓶口，让胶体金自然冷却。
（5）胶体金的储存：
2～8℃；有效期6个月。
3.6.4胶体金标记
3.6.4.1根据试样验证结果，量取胶体金，快速搅拌中加入0.2MK2CO3液，混匀后，快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔IgG（乙肝抗原和兔IgG分开标记），混合均匀后，反应30分钟。
3.6.4.2终止：
充分反应后在搅拌中加入金标记过程终止液（20ul/1ml金溶液）；继续搅拌30分钟直至混匀。
3.6.4.3将胶联溶液离心，9000转离心6分钟，收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10；
3.6.4.4储存：
2～8℃，有效期6个月。
3.6.5铺金液配制
3.6.5.1用工作液将1/10体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大10倍；兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量，加至上述乙肝金标工作液中（即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3）
3.6.5.2按0.2mg/ml的量加入抗RBC到铺金液中；
3.6.6小样试验：
在铺金和划膜之前，应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液，先铺一条玻纤（6mm×310mm）上，用配好的质控线液、检测线液划膜一张，与其他组分组合在一起，进行检测，要求：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20。
灵敏度：
灵敏度参考血清，呈阳性反应。
精密性：
连续重复测定精密性参考品10次，反应结果应均为阳性，且显色度均一。
3.6.7铺金
3.6.7.1按每张玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积
3.6.7.2按计算好的体积在每张玻纤上铺金，并用圆形试管刮均匀。
3.6.7.330%湿度以下，37～40℃干燥18～24小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。
3.6.7.4储存：
保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。
3.6.7膜包被
按照《划膜机标准操作规程》，以“252”泵速（对应速度2.7ul/cm），将质控线液和检测线液均匀地划在膜上，质控线划在距膜顶端12.1±0.1cm处，检测线划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处，质控线与检测线相距5mm±1mm。
3.6.7.230%湿度以下，37～40℃干燥18～24小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。
3.6.7.3储存：
保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。
3.6.8样品垫的准备
3.6.8.1按每张玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积
3.6.8.2按计算好的体积在每张玻纤上铺液，并用圆形试管刮均匀。
3.6.8.330%湿度以下，37～40℃干燥18～24小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。
3.6.8.4储存：
保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在30%湿度以下。
3.6.9半成品检测：
以上生产出来的胶体金、胶金垫、包被膜、分装好的样品稀释液均应作为半成品请检，质量管理部QC按照《半成品检验作业指导书》检验合格方可进入下一道工序。
3.6.10组装
3.6.10.1按照《贴膜组装工序作业指导书》的规定，将包被好的NC膜贴在塑料大卡上。
3.6.10.2各组成部分的切割：
各组分用切割机切割成以下大小：
金标垫：
6mm×310mm样品垫：
15mm×310mm吸水垫：
20mm×310mm
不干胶纸：
13mm×310mm
3.6.10.3层压
将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条，各膜层叠关系如下：
1）
2）
T线
C线
3）
3）
5）
（4）
6）
1）不干胶纸
2）样品垫
3）金结合物垫
4）包被有检测线（T线）和质控线（C线）的硝酸纤维素膜
5）吸水垫
6）塑料衬片
3.6.10.4层压参数
金标垫2片，第一片搭上NC膜2mm，第二片搭第一片3mm；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。
3.6.11切条
（1）组装环境条件的控制在相对湿度30%以下，并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时。
（2）按照《切条工序作业指导书》使用切条机，将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试剂切割成宽度为2.5mm±0.1mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。
3.6.12检测卡的装配
按照不同规格的要求，需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中，再用压卡机进行压卡，装条时应注意检查条有无划痕污渍，宽度是否符合要求；PVC卡外观应清洁，平整，无变形，底面配套性好，压卡应注意调节松紧度，避免将卡压破或变形。
3.6.13内包装
3.6.13.1成品规格为25支/盒、50支/盒的，所对应半成品的内包装：
（1）装卡：
单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装。
（2）密封。
密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，使用封口机进行封口。
3.6.13.2成品规格为100支/盒的，所对应半成品的内包装
装筒，将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中，放入干燥剂，然后封筒。
3.6.14外包装
（1）不干胶标签批号、生产日期、有效期打印：
以试纸条组装日期为“生产日期”，并由此推算出“有效期至”，批号按照《批号管理规程》的规定设置。
按照《批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程》进行操作打印标签、包装盒上的“三期”。
（2）贴签：
在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签。
（3）成品组装：
纸盒内组份：
组件
100T/盒
25袋/盒（1支/袋）
50袋/盒（1支/袋）
装量
数量
装量
数量
装量
数量
试纸条
25条/筒
4筒
无
无
无
无
试纸卡
无
无
1支/袋
25袋
1支/袋
50袋
样品稀释液
2ml
4瓶
2ml
1瓶
2ml
2瓶
说明书
1份
1份
1份
1份
1份
1份
按包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。
包装组组长每盒清点查看，合格后用封口签（合格证）封口。
（4）储存：
2～30℃，有效期24个月。
3.6.15.成品检定：
抽检量为3%，最小抽检量为500人份。
经质量管理部QC检测合格，QA做生产记录审核后开具《成品放行审核单》方可入库。
3.7质量标准
3.7.1.主要原辅料质量标准及依据：
（1）重组乙肝抗原
质量
标准
性状
肉眼观察不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒
蛋白浓度
用福林-酚法，以Sigma公司生产的牛血清白蛋白作对照，蛋白含量以毫克/毫升表示，浓度为0.5-10.0mg/ml；
纯度和分子量
用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10μg，电泳带显示无杂蛋白。
分子量：
效价
ELISA检测，效价应大于1∶10000
功能性试验
以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
批间精密度：
连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。
稳定性试验：
置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合上述要求。
贮藏条件
-20℃冻存
依据
《抗原质量标准及检验操作规程》
（2）兔IgG抗体
蛋白浓度
经OD280方法检测浓度≥5mg/mL。
纯度
用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10μg，电泳带显示无杂蛋白
功能性试验
以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
批间精密度：
连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。
稳定性试验：
置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。
且背景干净，质控线2分钟内显出，在10-30ug/ml包被时具有活性标记时具有活性。
贮藏条件
-20℃冻存
依据
《抗体质量标准及检验操作规程》
（3）羊抗兔IgG
蛋白浓度
经OD280方法检测浓度≥5mg/mL。
纯度
用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10μg，电泳带显示无杂蛋白
功能性试验
以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
批间精密度：
连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。
稳定性试验：
置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。
且背景干净，质控线2分钟内显出，在0.5-2.0mg/ml包被时具有活性标记时具有活性。
贮藏条件
-20℃冻存
依据
《抗体质量标准及检验操作规程》
（4）兔抗RBC
纯度
用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10μg，电泳带显示无杂蛋白
活性
琼脂免疫双扩试验，测定效价应不低于1：
8。
功能性试验
以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
批间精密度：
连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。
稳定性试验：
置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。
血球被结合，背景干净
贮藏条件
-20℃冻存
依据
《抗体质量标准及检验操作规程》
（6）硝酸纤维素膜：
MilliporeHiflowPlus18002硝酸纤维素膜
质量
标准
外观
膜条平整，无弯曲褶皱，表面无污迹,液体表面流速稳定、迁移均匀。
厚度215±20µm。
毛细迁移速率
每4cm，水的层析时间是135±30s。
功能性试验
以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
批间精密度：
连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。
稳定性试验：
置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。
贮藏条件
常温密封干燥储存
依据
《包装材料质量标准及检验操作规程》
（7）玻璃纤维纸
质量
标准
外观
表面平整、无污迹，纤维结构均匀、致密。
厚度0.5±0.05mm。
吸水性
≥30mg/cm2
功能性试验
以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
批间精密度：
连续三批的小试样本，分别重复检测精密度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一。
稳定性试验：
置37℃放置10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。
贮藏条件
常温密封干燥储存
依据
《包装材料质量标准及检验操作规程》
3.7.2半成品质量标准：
（1）胶体金
质量
标准
外观
目视胶体金外观，呈紫红色，液面无油状漂浮物，容器底部无黑色颗粒物凝集。
最大吸收峰值
用紫外分光光度计对胶体金溶液进行全波长扫描，应525～535nm处有单一吸收峰。
贮藏条件
2～8℃冷藏储存
依据
《半成品质量标准及检验操作规程》
（2）胶金垫
质量标准
外观
胶金垫颜色应为均一的暗红-暗紫色，无蓝变等异常。
胶金垫未涂有胶体金复合物的位置应为玻纤的白色，无异色；宽度均一，无破损。
功能性试验
与其他组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
贮藏条件
常温干燥密封保存
依据
《半成品质量标准及检验操作规程》
（3）包被膜
质量标准
外观
膜表面应洁净，无污染、破损等，如有，需用笔标出。
膜的开始端与末端喷线不好的部位需用铅笔标出。
包被膜干燥后，在C、T线处均没有明显的痕迹。
功能性试验
与其他组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
贮藏条件
常温干燥密封保存
依据
《半成品质量标准及检验操作规程》
（4）样品稀释液
质量标准
外观
所装容器与规定一致，液体澄清透明，无絮状物或沉淀。
功能性试验
与其他组分组装后检测：
阴性参考品符合率：
20份阴性参考品符合率（-/-）应为20/20；最低检出量：
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
；批内精密度用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
贮藏条件
常温密封保存
依据
《半成品质量标准及检验操作规程》
3.7.3成品质量标准：
质量
标准
外观
试剂盒外观整齐，组件齐全，数量准确包装整洁，生产批号、生产日期、有效期打印清晰正确。
金标条材料附着牢固，内容齐全；试纸条不露边、不露金条、不露吸水纸；卡上的产品名称等内容印刷正确，字迹清晰。
样品稀释液装量
2ml±0.2ml
试纸条宽度
试纸条宽度不低于2.5mm。
液体移行速率
液体移行速率不低于10mm/min。
阴性参考品符合率
用20份乙型肝炎病毒表面抗体阴性参考品进行检测，结果应全部呈阴性。
最低检出量
抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml。
精密度
用1份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。
稳定性
将成品于37℃放置10天后，按以上方法检测上述各项，应符合上述规定
贮藏条件
2～30℃常温密封保存
依据
《成品质量标准及检验操作规程》
3.8.质量控制
3.8.1.主要质量控制点：
按生产工序和工艺特点规定生产过程中的主要质量控制点，如下表所示：
工序
生产内容
质量控制点
配液
按照配方称量配制
一人称量一人复核
金标垫制备
胶体金制备
烧金容器洁净、加液量准确、迅速，应在沸腾时加液
重组乙肝表面抗原-胶体金复合物制备
加液量、标记时间30分钟、终止时间30分钟、离心时应保持平衡、离心转速9000转/分钟、时间10分钟。
复溶液体应澄清，不得有不溶沉淀。
铺金、干燥
铺金应均匀，干燥时间18～24小时、温度37～40℃、湿度30%以下，储存环境：
常温，湿度30%以下。
膜条
制备
划膜、干燥
质控线划在距膜顶端12.1±0.1cm处，检测线划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处，质控线与检测线相距5mm±1mm。
，划膜机泵速为“252”，干燥时间18～24小时、温度37～40℃、湿度30%以下，储存环境：
常温，湿度30%以下。
样品垫制备
铺垫、干燥
铺垫应均匀，干燥时间18～24小时、温度37～40℃、湿度30%以下，储存环境：
常温，湿度30%以下。
样品稀释液
分装
分装样品稀释液
每瓶装量2±0.2ml，瓶盖紧密不漏液
组装
组装成试纸条
1、金标垫6mm，2片，第一片搭上NC膜2mm，第二片搭第一片3mm；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。
2、环境湿度控制在30%以下。
切条
切条
1、切割成宽度为2.5mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。
2、环境湿度控制在30%以下。
内包装
试纸卡内包装
1、试纸条应安放在卡的相应位置，应确保无漏放。
2、铝箔袋封口严密，干燥剂无漏放。
3、内包装环境：
湿度控制在30%以下。
试纸条内包装
1、试纸条25条/筒，数量应正确。
干燥剂无漏放
2、包装筒封口严密，干燥剂无漏放。
3、内包装环境：
湿度控制在30%以下。
外包装
包装成成品
1、组分齐全，包装整洁干净。
2、三期打印清晰正确
3.8.2.监控频次
每个质量控制点均应在该工序生产操作开始前、操作过程中、操作结束后进行三次监控，对于用时较长工序需适当增加监控频次。
3.8.3.监控方法
（1）生产前，检查人员、设备、物料、环境是否符合工艺标准，并达到相应卫生要求，检查结束后决定是否准许开始生产。
（2）检查物料名称、级别、数量、外观、状态标识、存放条件是否符合工艺要求和生产规模，原辅料、包装材料及半成品的质量是否符合要求。
（3）检查设备、仪器、器具是否有状态标识，处于清洁、完好状态。
（4）各相关的记录、凭证是否齐全，生产过程中的记录是否完整、规范。
（5）检查生产工艺规程和岗位标准操作规程的执行情况，生产现场是否有序、规范。
（6）在质量控制点工序的操作过程中实行双人核对，QA对生产全过程进行监督。
3.8.4.重点工序的监控
（1）定量配料、定额包装是保证产品质量的关键工序，对物料质量、投料量是否符合要求实施重点监控。
（2）生产环境（洁净度、温度、湿度、压差）是否达标是保证生产的标准化和合格率的基本条件，实施重点监控。
（3）所有半成品生产完毕后分别取样进行质量检测，对半成品质量是否符合质量标准实施重点监控。
（4）对包装过程中的批号和有效期打印、包装数量、包装材料使用实施重点监控。
3.9.主要生产设备一览表
设备名称
规格/型号
数量（台）
生产厂家
纯化水机
超纯水机
电子天平
磁力电热套
低温高速离心机
1
划膜机
V1.6
杭州峰杭科技有限公司
切条机
HGS201
杭州峰杭科技有限公司
滚动式裁刀
550-14
1
温州市鹿城正大名片机械厂
压卡机
封口机
超净工作台
分液泵
BT/601F
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