DNA的粗提取与鉴定-实验报告_精品文档.ppt

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DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、基础知识一、基础知识

（一）提取

（一）提取DNADNA的的方法方法11、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子22、提取、提取DNADNA的基本思路的基本思路利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取学性质方面的差异，提取DNADNA，去除其他成分去除其他成分33、DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和和蛋白质等其他成分蛋白质等其他成分在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶溶液中溶解度不同液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使盐浓度就能使DNADNA充分溶解，而使杂质沉淀，充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反或者相反根根据据DNADNA在在NaClNaCl溶溶液液中中的的溶溶解解度度曲曲线线图图，思思考考在在什什么么浓浓度度下下，DNADNA的的溶溶解解度度最最小小？

DNADNA在在NaClNaCl溶溶液液中中的的溶溶解解度度是是如何变化的如何变化的？

DNA在NaClNaCl溶液中的溶解度曲线图溶液中的溶解度曲线图在在NaClNaCl溶溶液液浓浓度度低低于于0.140.14mol/Lmol/L时时，DNADNA的的溶溶解解度度随随NaClNaCl溶溶液液浓浓度度的的增增加加而而逐逐渐渐降降低低；在在0.140.14mol/Lmol/L时时，DNADNA溶溶解解度度最最小小；当当NaClNaCl溶溶液液浓浓度度继继续续增增加加时时，DNADNA的的溶溶解度又逐渐增大。

解度又逐渐增大。

如如何何通通过过控控制制NaClNaCl溶溶液液的的浓浓度度使使DNADNA在在盐盐溶溶液液中中溶溶解解或或析析出？

出？

当氯化钠的物质的量浓度为2molL时，DNA的溶解度最大，浓度为014molL时，DNA的溶解度最低。

利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。

DNADNA不不溶溶于于酒酒精精溶溶液液，但但是是细细胞胞中中的的某某些些物物质质则则可可以以溶溶于于酒酒精精。

利利用用这这一一原原理理，可可以以将将DNADNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离55、DNADNA在在酒精溶液中的酒精溶液中的溶解性溶解性66、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNADNA没有影响没有影响大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和去除脂质和蛋白质蛋白质,但对但对DNADNA没有影响没有影响77、DNADNA的鉴定的鉴定DNADNA与与二苯胺（沸水浴）二苯胺（沸水浴）会染成会染成蓝色蓝色，因此，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂的试剂二、实验设计二、实验设计

（一）实验材料的选取

（一）实验材料的选取11、材料：

鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、材料：

鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。

（从中选取在液体培养基中培养的大肠杆菌。

（从中选取2233种实验材料）种实验材料）22、原则：

凡是含有、原则：

凡是含有DNADNA的生物材料都可以考的生物材料都可以考虑，但选用虑，但选用DNADNA含量相对较高的生物组织，成功含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大的可能性更大动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可滤后收集滤液即可

（二）破碎细胞，获取含

（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液11、动物细胞、动物细胞答：

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，答：

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂），从而释放出，从而释放出DNADNA讨论：

为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

讨论：

为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜细胞膜22、植物细胞、植物细胞讨论：

加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？

讨论：

加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？

答：

洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，答：

洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于有利于DNADNA的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是NaClNaCl，有利于有利于DNADNA的溶解的溶解实例：

提取洋葱实例：

提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液磨，过滤后收集研磨液答：

研磨不充分会使细胞核内的答：

研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，释放不完全，提取的提取的DNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等讨论：

如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样讨论：

如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？

的影响？

（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论：

此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞讨论：

此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？

成分？

答：

可能含有核蛋白、多糖和答：

可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质讨论：

方案二与方案三的原理有什么不同？

讨论：

方案二与方案三的原理有什么不同？

答：

方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而答：

方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的使提取的DNADNA与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与白质变性，与DNADNA分离分离（四）（四）DNADNA的的析出与鉴定析出与鉴定DNADNA的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精冷却的酒精溶液（体积分数为溶液（体积分数为9595），静置，静置223min3min，溶溶液中会出现液中会出现白色丝状物，白色丝状物，这就是粗提取这就是粗提取DNADNA。

用用玻璃棒沿玻璃棒沿一个方向一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水吸取上面的水11、DNADNA的析出的析出22、DNADNA的鉴定的鉴定鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中，其中一于两只试管中，其中一只加入只加入DNADNA丝状物，各加入丝状物，各加入二苯胺二苯胺4ml4ml试剂。

试剂。

混合均匀后，将试管置于混合均匀后，将试管置于沸水中加热沸水中加热5min,5min,待试待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有看溶解有DNADNA的溶液是否有的溶液是否有蓝色蓝色鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2mol/L2mol/L鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图55、过滤、过滤、过滤、过滤取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物纱布过滤纱布过滤纱布过滤纱布过滤66、再次溶解、再次溶解、再次溶解、再次溶解DNADNA2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液溶液溶液取滤物取滤物取滤物取滤物鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图77、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使DNADNA析出（纯化）析出（纯化）析出（纯化）析出（纯化）冷酒精冷酒精冷酒精冷酒精鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图DNA的鉴定DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定实验原理实验原理DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取粗提取选择适宜材料选择适宜材料破碎细胞破碎细胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的纯化的纯化鉴定鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应总结：

总结：

方法步骤方法步骤加入物质加入物质目的目的1.制备鸡血细胞液柠檬酸钠溶液2.提取鸡血细胞细胞核物质20m1蒸馏水3.溶解细胞核内的DNA2mo1L的NaCl溶液40mL4.析出含DNA的黏稠物蒸馏水5.滤取含DNA的黏稠物6.将DNA的黏稠物再溶解2molL的NaCl溶液20mL7.过滤含DNA的NaCl溶液8.提取含有杂质较少的DNA冷却的95的酒精50mLA:

（1）向试管中加入2molL的NaCl溶液5mL

（2）加入DNA（3）4mL二苯胺试剂9.DNA的鉴定B:

（1）向试管中加入2molL的NaCl溶液5mL

（2）4mL二苯胺试剂加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂溶解溶解DNA使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限度地释出最大限度地释出使含使含DNA的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质提取提取DNAA出现蓝色出现蓝色B无变化无变化DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、实验原理一、实验原理1.1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。

利用此特性可得到含有胞核膜的破裂。

利用此特性可得到含有DNA的溶液。

的溶液。

2.2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。

变化而改变的。

DNA在在物质的量浓度为物质的量浓度为0.14molL的的氯化钠溶液中的溶解度最低，氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的解在氯化钠溶液中的DNA析出析出。

3.3.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但细胞中的但细胞中的某些物质则可以溶于某些物质则可以溶于酒精。

酒精。

利用这一原理，可以进一步利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的提取出含杂质较少的DNA。

4.4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可二苯胺可以作为鉴定以作为鉴定DNA的试剂的试剂。

二、方法与过程二、方法与过程1