品质管理资料治伤活血胶囊质量标准研究精品版.docx

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品质管理资料治伤活血胶囊质量标准研究精品版

治伤活血胶囊质量标准研究

关键词：

治伤活血胶囊；当归；三七；冰片；丹参；骨碎补；TLC；HPLC

摘要：

目的：

建立治伤活血胶囊（当归；三七；冰片；丹参；骨碎补）的质量标准。

方法：

以冰片；丹参酮IIA为对照品，以当归；三七为对照药材进行薄层色谱鉴别，以阿魏酸为对照品，采用高效液相色谱方法进行含量测定。

结果：

阿魏酸平均回收率为99.8%，RSD为1.6%，薄层图谱斑点清晰，阴性对照无干扰。

结论：

结果准确，方法重复性好。

治伤活血胶囊由当归、三七、乳香（制）、冰片、土鳖虫、自然铜（煅）、丹参、骨碎补八味药经提取加工制成。

具补血活血，调经止痛，润肠通便之功效，用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，肠燥便秘，风湿痹痛，跌打损伤，痈疽疮疡等症。

为有效控制药品的质量，本文采用TLC法对当归；三七；冰片；丹参进行了定性鉴别，并采用了HPLC法对该方中当归主成分阿魏酸进行了定量控制。

1、仪器与试药

AgilentG1311AQuatPump，G1314AVWD，G1379ADEGASSER，AT-330柱温箱，Thermo-C18（250mm×4.6mm，5um）色谱柱，硅胶G薄层板（自制）。

冰片对照品（中国药品生物制品检定所提供，编号为110743—200504）。

三七对照药材为阳性对照（中国药品生物制品检定所，批号：

120941—200807），丹参酮IIA对照品为阳性对照（中国药品生物制品检定所，批号：

110766—200417），当归对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：

120927—200512）阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：

0773-9910）塞多利斯全自动电子天平，SG2200H超声波清洗器；色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯。

2、定性研究

2.1为方中冰片的薄层色谱鉴别。

取本品内容物1g，加石油醚（30-60℃）15ml，超声处理2-3分钟，滤过，滤液低温浓缩至约1ml，作为供试品溶液。

另取冰片对照品，加石油醚（30-60℃）制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

取缺冰片的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30-60℃）—醋酸乙酯（19：

2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105摄氏度烘数分钟。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

阴性对照液色谱无干扰（图1）。

图1冰片的TLC图

1、冰片对照品2、3、4、供试品溶液5、缺冰片阴性对照溶液

2．2当归的鉴别

取本品内容物6g，加乙醚40ml，超声处理10分钟，滤过，残渣备用，滤液挥去乙醚，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

取缺当归的阴性样品液按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯（9：

1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

阴性对照液色谱无干扰（图2）。

图2当归的TLC图

1、当归对照药材2、3、4、供试品溶液5、缺当归阴性对照溶液

2.3三七的鉴别

取【鉴别】（2.2）项下乙醚提取后的残渣，挥尽乙醚，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

另取三七对照药材1g，加甲醇30ml同法制成对照药材溶液。

取缺三七的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇—醋酸乙酯—水（4：

1：

5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的主斑点；紫外光灯（365nm）下显相同颜色的荧光主斑点。

阴性对照液色谱无干扰（图3）。

日光下荧光下

图3三七的TLC图

1、三七对照药材2、3、4、供试品溶液5、缺三七阴性对照溶液

2.4丹参的鉴别

取本品内容物6g，加醋酸乙酯20ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品。

另取丹参酮11A对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

取缺丹参的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯（19：

1）为展开剂，展开，取出，晾干。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。

阴性对照液色谱无干扰（图4）。

图4丹参的TLC图

1、丹参酮IIA对照品2、3、4、供试品溶液5、缺丹参阴性对照溶液

3、定量研究

3.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈—甲醇—1%醋酸溶液（1:

1:

5）为流动相；检测波长为313nm。

理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2000。

3.2溶液的配制

对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品内容物约2.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加0.5%碳酸钠溶液20ml，超声处理（功率150W，频率20kHz）30分钟，提取液移至离心管中，离心（转速为每分钟3000转）10分钟，取上清液，置分液漏斗中，沉淀再用0.5%的碳酸钠溶液洗涤3次，每次10ml，洗液并入同一分液漏斗中，用2%氯化钠溶液饱和的乙醚洗涤3次，每次20ml，弃去乙醚液，水溶液用盐酸调节ph值至1－2，再用2%氯化钠溶液饱和的乙醚振摇提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），必要时离心消除乳化层，合并乙醚提取液，回收乙醚至干，残渣用甲醇溶解，转移至25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（避光操作）。

测定时用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取20μl进样。

阴性对照溶液的制备按处方取不含当归的其它药材制成阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备，以上三种溶液按上述色谱条件进样，测定。

结果阴性对照在阿魏酸峰相应的保留时间处无干扰。

见图6。

图6-1阿魏酸对照品溶液及治伤活血胶囊供试品溶液HPLC图谱

阿魏酸对照品溶液HPLC图谱

治伤活血胶囊供试品溶液HPLC图谱

缺当归的阴性样品溶液HPLC图谱

3.3线性关系考察

精密称取阿魏酸对照品10.6mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度。

摇匀（212ug/ml），再分别精密吸取对照品母液适量，用甲醇溶液稀释成不同浓度的对照品溶液：

10.6ug/ml、21.2ug/ml、42.4ug/ml、63.6ug/ml、84.8ug/ml。

分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20ul，按正文中色谱条件分析，测定峰面积。

以峰面积积分值为纵坐标，进样阿魏酸的量为横坐标绘制标准曲线（见阿魏酸对照品溶液标准曲线图），计算得回归方程：

Y=5087215X+228190,R=0.9990。

表明阿魏酸在0.212ug～1.696ug范围内具有良好线性关系。

具体数据及标准曲线见下表。

线性关系考察结果

阿魏酸浓度（ug/ml）

10.6

21.2

42.4

63.6

84.8

阿魏酸的量（ug）

0.212

0.424

0.848

1.272

1.696

峰面积

1434435.2

2356330.6

4452793.8

6494167.4

8797145

以峰面积积分值为纵坐标，阿魏酸的量为横坐标绘制标准曲线（见阿魏酸对照品溶液标准曲线图）：

阿魏酸对照品溶液标准曲线图

计算得回归方程：

Y=5087215X+228190，R=0.9990。

表明阿魏酸在0.212ug～1.696ug范围内具有良好线性关系。

3.4稳定性试验

取本品内容物约2.3g，研细，精密称定，按【含量测定】项下的方法制备供试品溶液，进样，测定，然后分别于第2小时、4小时、6小时、8小时分别进样，测定，对其稳定性进行考察。

结果见下表。

稳定性试验结果

放置时间（h）

峰面积

RSD%

0

2

4

6

8

2210050.6

2209450.4

2202809.4

2149963.1

2173184.1

1.2

3.5精密度试验

精密吸取阿魏酸对照品溶液（21.2μg/ml）20μl，重复进样5次，测定峰面积，（结果见表4），阿魏酸峰面积积分值的相对标准偏差小于2%，表明此法精密度良好。

表4精密度试验结果

实验次数

峰面积

RSD%

1

2

3

4

5

2222543

2220548.6

2150592

2207429.1

2166469.6

1.5

3.6重复性试验

分别取同一批治伤活血胶囊样品5份，按正文中含量测定项下方法试验，测定阿魏酸的含量，结果见表5。

样品中阿魏酸含量的相对标准偏差为1.27%，表明此法重复性良好。

表5重复性试验结果

试验号阿魏酸含量（ug/g）平均含量（ug/g）RSD（%）

1212.9

2218.4

3216.8216.341.27

方法分析课件4219.4

5214.2

3.7加样回收率试验

数学专业论文选题采用加样回收法。

取同一批已知含量的治伤活血胶囊精密称取样品约1g各5份，分别定量加入阿魏酸对照品适量，按正文中含量测定项下方法测定阿魏酸的含量。

结果见表6，平均回收率为99.8%，相对标准偏差1.6%，表明此法回收率良好。

新学期教学工作实测阿魏酸量-取样相当阿魏酸量

新初一语文

回收率=×100%

加入阿魏酸对照品量

教育调查报告小学表6回收率试验结果

取样量

（g）

样品中阿魏酸量（ug）

加入阿魏酸量（ug）

数字语文资源网实测阿魏酸量（ug）

提出全面改革总目标的会议是回收率

数学教师读书笔记（%）

平均回收

率（%）

教学资源网站RSD（%）

期中质量检测分析1.2472

1.2493

1.2498

1.2407

1.2400

269.8

270.3

270.4

268.4

268.3

285

285

285

285

285

553.3

561.8

539.7

552.8

550.8

99.5

102.3

98.1

99.8

99.1

99.8

1.6

4、讨论

治伤活血胶囊主要由当归等八味药组成，本次实验对冰片的研究时，曾比较了超声处理提取方法，对比了环已烷—氯仿——醋酸乙酯（9：

1：

2）展开剂，比较了紫外光灯下（365nm）检视方法，结果以本文的方法较好。

实验对三七的研究时，为了更能控制产品的质量，采用三七对照药材为阳性对照，曾比较了：

Ⅰ氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水（10：

4：

1：

5）；Ⅱ甲苯-甲酸乙酯-甲酸（6:

6:

0.1）；Ⅲ异辛烷—苯—氯仿—醋酸乙酯—甲酸（6:

3:

1.5:

2:

0.1）；Ⅳ正丁醇—醋酸乙酯—水（4：

1：

5）的上层溶液等多种展开剂，结果以展开剂Ⅳ展开后的斑点圆整，分离效果好。

综上，本品由八味药材组成，对五味药材分别进行了定性、定量的分析，能有效地控制本品的质量。

参考文献

1、《中国药典》2005年版一部

2、《中华本草》上海科学技术出版社

3、《天然药物成分定量分析》中国医药科技出版社

4、苗明三等.现代实用中药质量控制技术

5、国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编（经络肢体、脑系分册）

6、国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编（内科、气血津液分册）