实验室常规试剂配制.docx

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实验室常规试剂配制

实验室常用试剂、缓冲液的配制

1MTris-HCI（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度1MTris-HCI

配制量1L

配制方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4.将溶液定容至1L。

5.咼温咼压火菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温

度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5MTris-HCl（pH8.8）

组份浓度1.5MTris-HCl

配制量1L

配制方法1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压火菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化

差异很大，温

度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10XTEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合

3.将溶液定容至1L后，高温高压火菌。

4.室温保存。

3M醋酸钠（pH5.2）

组份浓度配制量配制方法

PBSBuffer组份浓度137mMNaCl,2.7

3M琴磁柚

IQOml

1.N.1OAC-3H.OH于100-200m：

疑杯中.加人對40讪的去两子水披扌半渚孵

2、加入冰酯敌讷帑pH值至4

3加去离子庆粕増液證容至20ml.

mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L

4.咼温咼压火菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCI2和0.5mMMgCI2。

10M醋酸铵

组份浓度10M醋酸铵

配制量100ml

配制方法1.称量77.1g醋酸铵置于100〜200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚

配制方法

1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些

液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160C对

其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和

DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯

酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作

均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡

使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

1液化苯酚应贮存于-20C,此时的苯酚呈结晶状态。

从冰柜中取岀的苯酚首先在室温下

放置使其达到室温，然后在68C水浴中使苯酚充分融解。

2加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完

全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

3加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层

后，除去上层水相。

4重复操作步骤③。

5加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分

层后，除去上层水相。

6重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

7使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

8将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）

1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白

质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中岀现的气泡。

2.配制方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后，移入棕色玻

璃瓶中4C保存。

10%（W/V）SDS

2NNaOH

组份浓度2NNaOH

配制量100ml

配制方法

1•量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中（NaOF溶解过程中大量放热，有可能使玻

璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5NHCI

组份浓度2.5NHCI

配制量100ml

配制方法1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

5MNaCl

组份浓度5MNaCl

配制量1L

配制方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.咼温咼压火菌后，4°C保存。

20%（W/V）Glucose

组份浓度20%（W/V）Glucose

配制量100ml

配制方法

1.称取20gGlucose置于100〜200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.咼温咼压火菌后，4C保存。

Solution1（质粒提取用）

组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose

配制量1L

1坦取下列涵亂置干500ml烧杯札

10%SDS

50mF

用）

2NNaOH

50ml

氏挪灭蔺水定容至500ml,充分混匀.

3•富31保存“此落液保存时聞最好不嬰超过一个月円注蕙：

SDS易产生警剋，不褻翩烈搅样.

500ml烧杯中。

2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.咼温咼压火菌后，4C保存。

0.5MEDTA（pH8.0）

SolutionIII（质粒提取

3MKOAc,5MCHCOOH

500ml

1.称量下列试剂，置于

配制方法

组份浓度

配制量

配制方法

组份浓度0.5MEDTA

配制量1L

配制方法1.称取186.1gNa2EDTA・2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

1MDTT

组份浓度1MDTT

配制量20ml

配制方法1.称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤膜过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20C保存。

10mMATP

组份浓度10mMATP

配制量20ml

配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O加入到50ml塑料离心管内。

2.力口20ml的25mMTris-HCI（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20C保存。

组份浓度10mMATP

配制量20ml

配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O加入到50ml塑料离心管内。

2.力口20ml的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，-20C保存。

蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30%（W/V）Acrylamide

组份浓度30%（W/V）Acrylamide

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L，用0.45mn滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4C保存。

注意：

丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%（W/V）Acrylamide

组份浓度40%（W/V）Acrylamide

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L,用0.45mm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4C保存。

注意：

丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%（W/V）过硫酸铵

组份浓度W:

沪煮棒■

配制量i匚i~T

配制方法■1-1LI.

U.2.加入to刊的去离孑水石攬拌落囂

5XTris-―讦丄一

Glycine-—*•厂「「「:

「亠

Buffer（S

DS-PAGE电泳缓冲液）

组份浓度0.125MTris,1.25MGlycine,0.5%（W/V）SDS

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

5XSDS-PAGELoadingBuffer

组份浓度

250rnM

Tris^HCI（pH68>

配制量

10%（W.V）

SDS

5ml

配制方法

0,5%（WV）

BPB

1.量取下列试剂，置于10ml塑料

离心管

50%（W）

甘油

中。

5%（W.V）

乙谓（2-ME）

2.加去离子水溶解后定容至5ml。

3.小份（500ml/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25ml的2-ME加到每小份中＜

5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。

考马斯亮蓝R-250染液

组份浓度0.1%（W/V）考马斯亮蓝R-250,25%（V/V）异丙醇,10%（V/V）冰醋酸

配制量1L

配制方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。

2.量取250ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。

3.加入100ml的冰醋酸，搅拌均匀。

4.加入650ml的去离子水，搅拌均匀。

5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。

考马斯亮蓝染色脱色液

组份浓度10%（V/V）醋酸,5%（V/V）乙醇

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.充分混合后使用。

凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用）

组份浓度50%（V/V）甲醇,10%（V/V）醋酸

配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.均匀混合后室温保存。

组份浓度

配制量

配制方法

凝胶染染色用）组份浓度

50%（V/V）甲醐10%（V/V）戊二醛

100ml

1、蚩取下列试轧加入1007饥El的试剂帑中。

甲醉50mt

戊二醛10ml

dl-LO40ml

色液（SDS-PAGE银氨

浓2闻測蠢芦泾劈注岳帝，

配制量

配制方法1.量取下列试剂，加入100〜200ml的试剂瓶中

0.4%（W/V）AgN（3,1%（V/V）

NH31-20,0.04%（W/V）NaOH

100ml

凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用）

2.均匀混合。

该溶液应为无色透明状。

如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水,

直至透明

3.本染色液应现用现配，不宜保存。

显影液（SDS-PAGE银氨染色用）

组份浓度0.005%（W/V柠檬酸,0.02%（V/V）甲醛

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L试剂瓶中

2•加入1L去离子水后，摇动混合溶解。

3.室温保存。

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

50XTAEBuffer（pH8.5）

组份浓度2MTris-醋酸,100mMEDTA

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

3.加入57.1ml的醋酸，充分搅拌

4.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

10XTBEBuffer（pH8.3）

组份浓度用〕T耐千宀裁檢―.命F.W

配制量-

配制方法.

Tris108g

NazEDTA-7.44g

醐聲559

2尙烧杯中加入S800別的去誇子水”充分攪拌溶解"

3-加去离子水将落酒定容至1辰室温保存

10WOPSBuffer

组份浓度200mMMOPS,20mMNaOAc,10mMEDTA

配制量1L

配制方法

1.称量41.8gMOPS置于1L烧杯中。

2.加约700mlDEPC处理水，搅拌溶解。

3.使用2NNaOH调节pH值至7.0。

4.再向溶液中加入下列试剂。

5.用DEPC处理水将溶液定容至1L。

6.用0.45um滤膜过滤除去杂质。

7.室温避光保存。

注：

溶液见光或高温灭菌后会变黄。

变黄时也可使用，但变黑时不要使用

溴乙锭（10mg/ml）

组份浓度10mg/ml溴乙锭

配制量100ml

配制方法

1.称量1g溴乙锭，加入到100ml容器中。

2.加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。

3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4.溴乙锭的工作浓度为0.5mg/ml。

注意：

溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作

Agarose凝胶

1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5XTBE或1XTAE）。

2.根据制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3.加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。

注：

用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4.在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。

加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分均匀熔化。

此操作重复

数次，直至琼脂糖完全熔化。

必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时

停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。

熔化琼脂糖

时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。

5.使溶液冷却至60C左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液（终浓度0.5mg/ml），并充分混匀。

注：

溴乙锭是一种致癌物质。

使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。

6.

3~5mm之间

将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。

凝胶厚度一般在

7.在室温下使胶凝固（大约30分钟~1小时），然后放置于电泳槽中进行电泳

注：

凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4C下保存，一般可保存2〜5天

6XLoadingBuffer（DNA电泳用）

组份浓度

配制量

配制方法

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围

30mMEDTA

36%Glycerol

005%（W;V）XyleneCyanolFF

0.05%（WV）BfcmophenolBlue

10XLoadingBuffer（RNA电泳用）

10mMEDTA

50^o（UY）Glyoerol

025%（VW）XyleneCyanolFF

0.25%（W/V）SrocncphenolBlue

称量下列试剂，置于10ml

加入约4ml的DEPC处理水

组份浓度

配制量10ml

配制方法1.

离心管中。

2.向离心管中

后，充分搅拌溶解。

3.加入5ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。

4.用DEPC处理水定容至10ml后，室温保存。

核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法

20XSSC

组份浓度3.0MNaCI,0.3M柠檬酸钠

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

3.滴加14NHCI,调节pH值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1L

4.咼温咼压火菌后，室温保存。

20XSSPEBuffer

组份浓度3.0MNaCl,0.2MNaH2PQ,0.02MEDTA

配制量1L

配制方法

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加NaOH调节pH值至7.4（约6.5ml的10NNaOH

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.咼温咼压火菌后，室温保存。

50xDenhardt's溶液

组份浓度

配制量500ml

配制方法

1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

2.加去离子水约400ml,充分搅拌溶解

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.用0.45mm滤膜过滤后，分装成每份25ml。

5.-20c保存。

0.5M磷酸盐Buffer

组份浓度0.5MNazHPO

配制量1L

配制方法

1.称量134gNa2HPO•7H2O置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水充分搅拌溶解。

3.加入85%勺H3PQ（浓磷酸）调节溶液pH值至7.2。

4.加去离子水定容至1L。

5.咼温咼压火菌后，室温保存。

组份浓度10mg/mlSalmonDNA

配制量约100ml

配制方法

1.称取鮭鱼精DNA2g置于500ml烧杯中，加入约200ml的TEBuffer。

2.

0.1M

用磁力搅拌器室温搅拌2〜4小时，溶解后加入4ml的5MNaCl，使其终浓度为

3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。

4.回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA

5.加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。

6.离心回收DNA后，溶解于100ml的去离子水中，测定溶液的OC260值。

7.计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10mg/ml。

8.煮沸10分钟后，分装成小份（1ml/份）。

-20C保存。

9.使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。

组份浓度I匸3j讪\U.CB

配制方法；Gi.w.

组份浓度

配制量约100ml

配制方法1.称量下列试剂，置于200ml烧杯中。

组份浓度

配制量100ml

配制方法1.称量下列试剂，置于200ml烧杯中。

2.充分混匀后，使用0.45um滤膜滤去杂质后使用。

组份浓度39mMGlycine,48mMTris,0.037%（W/V）SDS,20%（V/V）甲醇

配制量1L

配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3•加去离子水将溶液定容至800ml后，加入200ml的甲醇。

4.室温保存。

组份浓度20mMTris-HCl,150mMNaCI,0.05%（V/V）Tween20

配制量1L

配制方法

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加入0.5mlTween20后充分混匀。

4•加去离子水将溶液定容至1L后，4C保存。

组份浓度5%（W/V）脱脂奶粉/TBSTBuffer

配制量100ml

配制方法

1.称量5g脱脂奶粉加入到100ml的TBSTBuffer中，充分搅拌溶解。

1.4C保存待用（本封闭液应该现配现用）。

实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin（100mg/ml）

组份浓度100mg/mlAmpicillin

配制量50ml

配制方法

1.称量5gAmpicillin置于50ml离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。

3.用0.22mm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1ml/份）后，-20C保存。

IPTG（24mg/ml）

组份浓度24mg/mllPTG

配制量50ml

配制方法

1.称量1.2gIPTG置于50ml离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。

3.用0.22mm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1ml/份）后，-20C保存。

X-Gal（20mg/ml）

组份浓度：

汕厂利WQ•胡

配制量汽旳

配制方法’1F11'J■-.•'!

-IT：

2,加入40mlDWr（二甲墓甲醯就.充分混合落解后，定容S50mi.

3小份分装｛1mW）后'-20C避光保存。

组份浓度

配制量

配制方法

组份浓度

配制量1L

配制方法

1.称取下

置于1L

2.加入约

［搐tw/v）Trypione,0.5ao（W/V）YeastEsdract.1°o（W/V）NaCI

1L

仁称取下列试剂・L堤杯申*

丁ryplone10g

VeastExtract5g

NaCl10g

Z加入约300ml的去瘟子水.充分搅拌溶解.

3.ffijtnSNINaOH（i<|02ml）,谯节血値壬了心

4•抑去离子水将培琮基定容至1L,

5一高逼高压灭菌后|斗匚保存。

的去离子水，充分搅拌溶解

3.滴加5NNaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0

4.加去离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入1mlAmpicillin（100mg/ml）后均匀混合

7.4C保存。

组份浓度

列试剂,烧杯中。

800ml

配制量1L

配制方法

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4）100ml。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至

100ml，咼温咼压火菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

3.加入约800ml的