免疫检验项目标准操作程序DOC.docx

免疫检验项目标准操作程序DOC.docx

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免疫检验项目标准操作程序DOC

XXXXXX医院

检验项目标准操作程序

（SOP）

责任部门:

免疫室

文件编号:

XXXX-JYK-MY-XM

版本/修订号:

B/1,共25页

编写者:

XXXXXXXXX

审核者:

XXX

批准者:

批准日期:

2012年09月27日

实施日期:

2012年10月01日

科主任:

XXX

目录

1.乙肝病毒表面抗原诊断操作规程………………………1

2.乙肝病毒表面抗体诊断操作规程………………………2

3.乙肝病毒e抗原诊断操作规程…………………………3

4.乙肝病毒e抗体诊断操作规程…………………………4

5.乙肝病毒核心抗体诊断操作规程………………………5

6.甲型肝炎病毒IGM抗体诊断操作规程…………………6

7.戊型肝炎病毒IgG抗体诊断操作规程…………………7

8.人类免疫缺陷病毒抗体检测规程………………………9

9.抗双链DNA检测程序…………………………………11

10.抗核抗体检测程序………………………………………12

11.TORCH-IgM四联检测规程……………………………13

12.EB病毒抗体检测程序…………………………………14

13.可提取性核抗体原自身抗体操作规程…………………15

14.抗精子抗体检测规程……………………………………17

15.抗子宫内膜抗体检测规程………………………………18

16.HPV抗体检测规程……………………………………19

17.结核分支杆菌抗诊断试剂………………………………20

18.梅毒甲苯胺红不加热血清试验…………………………22

19.流行性出血热IGM………………………………………24

20.丙型肝炎病毒抗体诊断………………………………25

乙肝病毒表面抗原诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙肝病毒表面抗体诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙肝病毒e抗原诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙肝病毒e抗体诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

CutoffValue计算：

COV=阴性对照平均OD值+阳性对照平均OD值/2标本OD值大于等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙肝病毒核心抗体诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升（待测标本用生理盐水1：

30稀释，检测结果为临床意义，请用户自行选择），设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

CutoffValue计算：

原倍血清COV=阴性对照平均OD值乘以0.3。

1：

30稀释血清COV=阴性对照平均OD值乘以0.5。

标本OD值大于等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

甲型肝炎病毒IGM抗体诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、代待测标本用生理盐水作1：

1000稀释，每孔加入稀释标本100微升，设阴，阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各2滴，并设空白对照1孔，封板，置37度孵育20分钟。

4、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复3次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤3次程序后拍干。

5、每孔加入HAVAg1滴，酶结合物1滴（空白对照孔不加），充分混匀，封板，置37度孵育20分钟。

6、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

7、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。

8、每孔加终止液1滴，混匀。

9、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

COV=样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计高于0.05按实际OD值计。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、使用试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

戊型肝炎病毒IGg抗体诊断操作规程

一、测定步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每次实验均需设立空白对照2孔，阳性对照2孔，阴性对照2孔。

4、每孔加样品稀释液100微升。

（阳性对照孔、阴性对照孔除外）空白对照直接加入样品稀释液100微升。

5、加待测标本，每孔10微升。

阳性对照、阴性对照不需稀释，直接加入100微升于各相应孔内。

震荡混匀，封板，置37度孵育30分钟。

6、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

7、每孔加入酶结合物100微升（或两滴），封板，置37度孵育30分钟。

8、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

9、每孔加显色剂A液、B液各50微升（或一滴），充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。

10、每孔加终止液1滴，混匀。

11、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

CutoffValue的计算：

COV=阴性对照平均OD值+0.22

标本OD值大于等于CutoffValue为阳性

标本OD值小于CutoffValue为阴性

阴性对照平均OD值小于0.05，按实际计，若阴性对照平均OD大于等于0.05，按0.05计。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、若试验结果阴阳性对照有疑问，该试验视为无效，需重做。

5、洗涤液用前需25倍稀释，若洗涤液出现结晶，可置37度使之溶解。

6、不同批号的试剂不可混用。

7、使用试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

人类免疫缺陷病毒抗体检测规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、配液：

将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。

4、编号：

将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照一型、二型各一孔，空白对照一孔。

5、加样：

分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。

6、温育：

覆盖黏胶纸，置37度孵育30分钟。

7、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

8、每孔加酶结合物100微升，取新粘胶纸覆盖放映板，置37度孵育30分钟。

9、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

10、每孔加入底物缓冲液50微升，TMB50微升，混匀，置37度显色10分钟。

11、加终止液50微升震荡反应板5秒钟，使之充分混匀。

12、在酶标度数仪上，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），仪空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）

二、结果判断：

抗HIV阳性对照OD值大于0.8，抗HIV阴性对照OD值小于0.08。

CutoffValue=阳性对照值乘以10%（若阳性对照OD值大于2.5按2.5计算）

标本OD值小于等于CutoffValue为阴性。

标本OD值大于CutoffValue为阳性。

三、注意事项：

1、在试剂的使用单位必须使当地卫生行政部门标准的HIV初筛试验室。

2、整个检测工作必须符合HIV试验室管理范围和生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

操作时必须带手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。

3、HIV检测结果的判定不许以酶标仪的读数为准。

4、标本和酶结合物均应用加样器加注，并经常校对其准确性。

5、所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

6、洗涤液若出现结晶，可置37度溶解。

7、粘胶纸不能反复使用。

8、微孔条从冷藏环境中取出时，应在室温平衡至无潮气方可使用，未用完的须放入有干燥剂的密封袋中保存。

抗双链DNA检测程序

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、滴入2滴试剂一（洗涤液）于反应板中央孔中，待完全渗入。

4、滴入100ul血清于反应板孔中待完全渗入。

5、滴加3滴试剂二（金标液）于反应板孔中，待完全渗入。

6、滴入三滴试剂一于反应板孔中，待完全渗入。

二、结果判断

阳性：

反应板孔中央出现2个红色圆斑，为阳性。

阴性：

反应板孔中央出现1个红色圆斑，为阴性。

三、注意事项：

1、若遇冬天室内温度较低时（16度左右），可在37度水浴箱内操作。

2、陈旧血清盒高脂血症血清一般不宜使用。

3、如果质控斑点太浅请多加2滴市集二。

若膜的背景较深，可多滴几滴试剂二。

若膜的背景较深，可多滴加几滴试剂一充分洗涤。

阳性斑点较弱时，可延长至20分钟观察结果。

4、检测一旦开始操作，应按操作步骤连续进行，直至结束。

抗核抗体检测程序

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、滴入2滴试剂一（洗涤液）于反应板中央孔中，待完全渗入。

4、滴入100ul血清于反应板孔中待完全渗入。

5、滴加3滴试剂二（金标液）于反应板孔中，待完全渗入。

6、滴入三滴试剂一于反应板孔中，待完全渗入。

二、结果判断

阳性：

反应板孔中央出现2个红色圆斑，为阳性。

阴性：

反应板孔中央出现1个红色圆斑，为阴性。

三、注意事项：

1、若遇冬天室内温度较低时（16度左右），可在37度水浴箱内操作。

2、陈旧血清盒高脂血症血清一般不宜使用。

3、如果质控斑点太浅请多加2滴试剂2。

若膜的背景较深，可多滴几滴试剂2。

若膜的背景较深，可多滴加几滴试剂1充分洗涤。

阳性斑点较弱时，可延长至20分钟观察结果。

4、检测一旦开始操作，应按操作步骤连续进行，直至结束。

TORCH-IgM四联检测规程

一、操作步骤：

1、取出试剂盒，室温放置5－10分钟。

2、取出检测板，在中央孔加A液200ul（四滴），待渗入。

3、加待测血清200ul（四滴），待渗入。

4、加A液洗涤液100ul（2滴），待渗入。

5、加B液检测液200ul（四滴），待渗入。

6、在加A液150ul（3滴），然后直接观察结果。

二、结果判断：

阴性：

仅质控点出现红色斑点为阴性反应。

阳性：

除质控点出现红色斑点外，四角的检测点也有红色或浅红色斑点出现。

哪一个检测点出现红色斑点即为相应的IgM抗体阳性。

如左上角检测点TOX出现红色斑点即为弓形体IgM抗体阳性；左上角TOX和左下角CMV出现红色斑点为弓形虫和巨细胞病毒检测双阳性；左上角TOX和左下角CMV，和右上角RUV出现红色斑点为弓形虫、巨细胞病毒和风疹病毒三项阳性；左上角TOX，左下角CMV、右上角RUV、和右下角HSV二出现红色斑点即为弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒和单纯疱疹病毒二型检测阳性。

EB病毒抗体检测程序

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、滴入2滴试剂一（洗涤液）于反应板中央孔中，待完全渗入。

4、滴入100ul血清于反应板孔中待完全渗入。

5、滴加3滴试剂二（金标液）于反应板孔中，待完全渗入。

6、滴入三滴试剂一于反应板孔中，待完全渗入。

二、结果判断

阳性：

反应板孔中央出现2个红色圆斑，为阳性。

阴性：

反应板孔中央出现1个红色圆斑，为阴性。

三、注意事项：

1、若遇冬天室内温度较低时（16度左右），可在37度水浴箱内操作。

2、陈旧血清盒高脂血症血清一般不宜使用。

3、如果质控斑点太浅请多加2滴试剂2。

若膜的背景较深，可多滴几滴试剂2。

若膜的背景较深，可多滴加几滴试剂1充分洗涤。

阳性斑点较弱时，可延长至20分钟观察结果。

4、检测一旦开始操作，应按操作步骤连续进行，直至结束。

可提取性核抗体原自身抗体操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、按所需量将浓缩洗涤液用蒸馏水1：

10稀释。

4、取出反应槽，每槽加入0.5ml洗涤液然后加入待检血清10ul，充分混匀，缓慢摇动于37度孵育30分钟。

5、弃去槽内液体，再吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤4次，每次每槽1ml洗涤一分钟。

6、每槽加入洗涤液0.5ml，酶标抗体20ul，混匀，缓慢摇动于37度孵育30分钟。

7、弃去槽内液体，再吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤4次，每次每槽1ml洗涤一分钟。

8、加入显色液A液B液各0.5ml，室温反应10分钟。

9、每槽加入0.5ml终止液，终止反应，1分钟后弃去液体，用自来水洗涤数次，取出膜条，用吸水纸吸干后即可进行结果判断。

二、结果判断：

1、结果判断请参看标准谱带图，零位线下约2mm出的第一条显色带为试剂质控线，此显色带若不出现，说明试剂失效。

2、判断结果时，要注意将谱带定位与带型结合起来。

带型指一种抗体有多条区带时，区带间相对不变的位置关系构成的图形。

如抗Scl-70常出现2-3条；抗D`E（抗Liu）常出现5-6条等等。

谱带定位时与标准带相差1mm内属允许范围。

3、本试剂盒也可做DM-53、抗RA-54检测，类风关病人除有54KD抗体外。

也可出现36KD。

三、注意事项：

1、浓缩洗涤液需临用前稀释，整个操作中，洗涤液用量大约为每人份10ml，可参照此量稀释。

未用完的洗涤液弃之，不可留作下次用。

2、全部操作最好再生化平台上摆动进行，改用手工间隙晃动也可检测，但敏感性会有所下降。

3、显色液A、B需恢复至室温放可使用。

显色液有棕色颗粒时。

不影响检测结果。

4、标准带谱为根据相应标准血清定位后，用电脑制作，每个试剂盒对应一张标准带谱，进行结果判断时，不同试剂盒间的标准带谱不能混用，要注意膜条铝塑带上批号与标准带谱下方批号一致。

5、不同血清标本，不同带型，显色强度会不一致。

遇到弱阳性结果时，请仔细观察。

6、诊断不应该只建立在单个检测基础上，所有检测结果必须考虑病人的临床病史和（或）其他检测结果。

抗精子抗体检测规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、滴加2滴标本稀释液于各标本得反应孔中（空白及阴、阳对照孔不加）

4、取5ul血清加于反应孔内，用移液器反复吹打几次，直至孔内液体由绿色变为兰色，阴性、阳性对照孔各加一滴阴性阳性对照。

5、将反应板震荡使样品充分混允（震荡30秒）后，置37度水浴20分钟。

6、先用蒸馏水将40倍得浓缩洗涤液稀释，

（1）手洗：

甩去孔内液体用洗涤液注满各孔，放置20秒后用力甩去，重复5次后拍干。

（2）机洗：

5次，每孔注满洗涤液，停留20秒后尽力拍干。

7、每孔加酶结合物1滴，置37度水浴10分钟。

8、每孔加底物A液、B液各一滴，置37度水浴10分钟。

9、自水浴箱取出后马上自测或立即加一滴终止液，混匀后用酶标仪读取结果。

二、结果判断：

1、目测法：

无色为阴性，兰色为阳性。

2、比色法：

在450nm波长下用空白孔调零读取各孔OD值。

标本孔OD值大于等于0.3为阳性。

标本孔OD值小于0.3为阴性。

三、注意事项：

1、不同批号的试剂请勿混用，操作时反应板置把白色背景下加样变色更明显。

2、洗涤时各孔须加满，防止孔中有游历酶不能洗净。

3、试剂凭用前应摇匀。

标本不可反复冻融，避免用溶血浑浊标本。

4、请将拆封后未用完的板条，放入自封口袋内封紧保存。

抗子宫内膜抗体检测规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、滴加2滴标本稀释液于各标本得反应孔中（空白及阴、阳对照孔不加）

4、取5ul血清加于反应孔内，用移液器反复吹打几次，直至孔内液体由绿色变为兰色，阴性、阳性对照孔各加一滴阴性阳性对照。

5、将反应板震荡使样品充分混允（震荡30秒）后，置37度水浴20分钟。

6、先用蒸馏水将40倍得浓缩洗涤液稀释，

（1）手洗：

甩去孔内液体用洗涤液注满各孔，放置20秒后用力甩去，重复5次后拍干。

（2）机洗：

5次，每孔注满洗涤液，停留20秒后尽力拍干。

7、每孔加酶结合物1滴，置37度水浴10分钟。

8、每孔加底物A液、B液各一滴，置37度水浴10分钟。

9、自水浴箱取出后马上自测或立即加一滴终止液，混匀后用酶标仪读取结果。

二、结果判断：

1、目测法：

无色为阴性，兰色为阳性。

2、比色法：

在450nm波长下用空白孔调零读取各孔OD值。

标本孔OD值大于等于0.3为阳性。

标本孔OD值小于0.3为阴性。

三、注意事项：

1、不同批