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实验五护色学习资料
实验五护色
实验一 蔬菜加工中护色实验与果蔬酶促褐变的防止
一、 实验目的
1.熟悉果蔬酶促褐变的原理。
2.通过果蔬加工中热烫等处理方法和加异抗坏血酸钠等护色实验，初步掌握果蔬加工中护色的常用方法。
二、实验原理
新鲜绿色蔬菜如果在酸性条件下加工，由于脱镁反应的发生，发色体结构部分变化，绿色消失，变成褐色的脱镁叶绿素。
如果在弱碱性条件下热烫，则叶绿素的酯结构部分水解生成叶绿酸（盐）、叶绿醇和甲醇，叶绿酸盐为水溶性，仍呈鲜绿色，而且比较稳定。
绿色果蔬或某些浅色果蔬，在加工过程中易引起酶促褐变，使产品颜色发暗。
为保护果蔬原有色泽，往往先在弱碱性条件下进行短时间的使酶钝化的热烫处理，从而达到护色的目的。
果蔬加工中，往往采用热烫钝化酶：
用控制酸度：
加抗氧化剂（如异抗坏血酸钠）：
加化学药品（如二氧化硫、焦亚硫酸钠）来抑制酶的活性和隔绝氧等方法来防止和抑制酶促褐变。
三、实验材料、试剂和仪器
1、实验材料：
绿色青菜、苹果、马铃薯
2、试剂：
1～5%愈疮木酚（或联苯胺）、3%过氧化氢、1%邻苯二酚、焦亚硫酸钠、异抗坏血酸钠 柠檬酸 氢氧化钠 盐酸
3、仪器：
烧杯 微波炉 电热鼓风干燥箱
四、操作步骤
1、观察酶褐变的色泽：
（1）马铃薯人工去皮，切成3mm厚的圆片，取一片切面滴上2～3滴1．5%滴愈疮木酚（或联苯胺）再滴上2～3滴过氧化氢，由于马铃薯中过氧化物酶的存在，愈疮木酚与过氧化氢经酶作用，脱氢而产生褐色的络合物。
（2）苹果人工去皮，切成3mm厚的圆片，滴1%邻苯二酚（或用邻苯三酚2～3滴，由于多酚氧化酶存在，而使原料变成茶褐色或深褐色的络合物。
2、防止酶褐变：
（1）惹烫、高温可以使氧化酶类丧失活性，生产中利用热烫防止酶褐变，将马铃薯片投入沸水中，待再次沸腾计时，每隔一分钟，取出一片马铃薯用1.5%愈创木酚和3%过氧化氢滴在切面上，观察其变色的速度和程度，直到不变色为止，将剩余马铃薯投入冷水中及时冷却。
（2）不同化学试剂防止酶褐变：
各种不同的化学试剂可降低价质中的PH值和减少溶解氧均可抑制氧化酶类活性，将切片的苹果分别取3～5片块投入到0.4%柠檬酸溶液、0.4%亚硫酸氢钠溶液、0.4%抗坏血酸溶液中护色20分钟，取出滴干，另取50ml水作对照用。
用1.5%愈创木酚和3%过氧化氢滴在切面上，观察其变色的速度和程度。
3、比较不同pH值条件下，蔬菜热处理后的色泽变化
绿色青菜洗净后分成3份，分别编号I、II、III，于沸水中（pH为4、7、9的不同酸碱度条件下），各热烫1~2min。
分别捞起沥干，在微波炉中进行干燥。
取出自然冷却后，放在滤纸上。
观察不同PH条件下，脱水青菜的色泽。
4、隔氧试验
用不锈钢刀切取苹果、马铃薯6小片，4片浸入一杯清水中，2片置于空气中，10min后，观察记录现象，之后，又从杯中取出2片置于空气中，10min后再观察比
五、注意事项
产品加工过程防止抗氧剂残留超标。
六、讨论题
1．土豆变色原因？
护色有哪些方法？
护色机理？
实验三 非酶褐变与果蔬酶促褐变的防止
一、实验目的
通过焦糖的制备及羰氨反应来了解非酶褐变以及焦糖的性质与用途。
通过蔬菜加工中热烫等前处理方法和加异抗坏血酸钠等护色实验，初步掌握蔬菜加工中护色的常用方法。
二、实验原理
褐变反应是食品加工中最普遍存在的一种变色现象，按其发生机制分为酶促褐变和非酶褐变两大类。
非酶促褐变：
非酶褐变又可分为以下三种类型
1．当还原糖与氨基酸混合在一起加热时会形成褐色“类黑色素”，该反应称为羰氨反应，又称“美拉德反应”。
非还原糖在不发生水解的条件下不会发生美拉德反应。
2．糖类在无氨基化合物存在下加热到其熔点以上，也会生成黑褐色的色素物质，这种作用称为焦糖化作用。
3．柑桔类果汁在贮藏过程中色泽变暗，放出二氧化碳，抗坏血酸含量降低，这是由于抗坏血酸自动氧化而产生的褐变。
酶促褐变：
酶促褐变是发生在水果、蔬菜等植物性食物中的由酚酶催化酚类物质形成醌及其聚合物的反应过程。
果蔬发生酶促褐变后，产品颜色发暗。
为保护果蔬原有色泽，往往先在弱碱性条件下进行短时间的使酶钝化的热烫过程，从而达到护色的目的。
除热烫外，也可通过控制酸度、添加抗氧化剂（如异抗坏血酸钠）、亚硫酸盐类物质（如二氧化硫、焦亚硫酸钠）来抑制酶活性和隔绝氧等方法来防止和抑制酶促褐变。
三、操作步骤及实验现象
（一）非酶褐变
1．1焦糖的制备：
称取蔗糖25g放入蒸发皿中，加入1ml水，在电炉上加热到150℃左右，关去电源，温度上升至190～195℃，恒温10min左右，呈深褐色，稍冷后，加入少量蒸馏水溶解，冷却后移入250ml容量瓶中，定容。
1.2 比色：
分别吸取上述10％焦糖溶液5ml，分别稀释至50ml，成为1％焦糖溶液。
吸取上述1％焦糖溶液，按下表在试管中混匀各种所需物质，然后在721型分光光度计上以520nm比色测定，记录光密度，根据光密度的大小比较不同情况下焦糖的色泽。
1.2.1数据记录及实验现象
试剂
编号
1%焦糖（ml）
水（ml）
NaCl（ml）
6%HAc （ml）
95%乙醇（ml）
光密度
颜色深浅
1
2
3
4
1.3简单组分的美拉德反应
操作步骤
实验现象
（1）取3支试管，各加25％葡萄糖溶液和25％甘氨酸溶液5滴。
第一支试管加10％盐酸两滴；第二支试管加10％氢氧化钠溶液两滴；第三支试管不加酸碱。
将上述溶液同时放入沸水浴中加热片刻，比较溶液变色的快慢和颜色的深浅。
（2）取三支试管，第一支试管加入20％甘氨酸溶液和25％蔗糖溶液各5滴；第二支试管加入25％谷氨酸钠溶液和25％蔗糖溶液各5滴；第三支试管加入20％甘氨酸溶液和25％葡萄糖溶液各5滴，在上述三支试管中各加2滴10%氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热，比较溶液变色快慢和颜色深浅。
（二）酶促褐变
2.1温度对果蔬酶促褐变的作用
用不锈钢刀切取苹果、马铃薯各4小片，各分成两份，一份放在室温下，另一份切好后立即投入沸水中，热处理5～10min，取出置于室温下，每隔20min观察一次，共观察四次，记录切片颜色的变化。
2.1．1实验现象
样品
观察次数
苹果
土豆
未处理
热处理
未处理
热处理
1
2
3
4
表1热烫对果蔬酶促褐变的作用
2.2护色剂对果蔬加工制品颜色的影响
（1）按下列各编号所列试剂的比例配制护色液
编号Ⅰ：
0.2g柠檬酸溶于50ml水中。
（0.4%）
编号Ⅱ：
0.2g焦亚硫酸钠溶于50ml水中。
编号Ⅲ：
0.2g异抗坏血酸钠溶于50ml水中。
编号Ⅳ：
0.2g柠檬酸、0.2g焦亚硫酸钠溶于50ml水中。
编号Ⅴ：
0.2g柠檬酸、0.2g异抗坏血酸钠溶于50ml水中。
编号Ⅵ：
0.2g柠檬酸、0.2g焦亚硫酸钠、0.2g异抗坏血酸钠溶于50ml水中。
另取50ml水作对照用，编号为Ⅶ。
（2）用不锈钢刀切取苹果、马铃薯各14小片，每一编号溶液放苹果、马铃薯各2小片，注意让溶液淹没切片，处理20min后，取出置于室温下，每隔30min观察一次，共观察四次，记录切片颜色的变化。
2.2．1实验现象
观察次数
编号
1
2
3
4
苹果
土豆
苹果
土豆
苹果
土豆
苹果
土豆
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ
Ⅵ
实验二、烫漂标准的确定（2个学时）
一、 目的要求
烫漂是果蔬加工中一项重要的工序，通过本实验，达到两个目的：
1、基本掌握烫漂的生化指标和感官指标；
2、了解不同的原料，杀死过氧化物酶时需要不同的烫漂条件。
二、 材料和用具
菜豆、山楂、苹果、马铃薯等新鲜果蔬。
0.1%联苯胺、0.3%过氧化氢。
电炉、烧杯（50ml）、不锈钢刀、温度计、滴管。
三、 烫漂标准确定原理
原料烫漂后，在颜色、比重、酶活性等方面均有变化，其中酶活性较易测定，易于在实际工作中采用，原料组织酶系中，因过氧化物酶即比较耐热，又易引起产品的破坏。
因此，通常以使物料的过氧化物酶失活作为烫漂处理的生化标准，其反映过程如下：
过氧化物酶，H2O2
联苯胺（还原态）----------------------→联苯胺（蓝色）
-H2O （氧化态）
烫漂后的组织在联苯胺和过氧化氢试剂作用下，数分钟后，若变为蓝色，则证明过氧化物酶活性存在，原料烫漂不够，需要提高烫漂处理强度；若不变色，则证明烫漂处理达到了要求。
四、 操作方法
将果蔬原料洗涤干净，切分成适当的大小，放入沸水中处理若干分钟，取出，冷水冲洗冷透。
用不锈钢刀横切，在切面上依次滴1-2滴0.1%联苯胺和0.3%的过氧化氢试剂，观察颜色变化，将观察结果记入下表：
马铃薯
苹果
烫漂时间（min）
是否变色
烫漂时间（min）
是否变色
五、 试剂配制
1、0.1%联苯胺：
称取1g联苯胺，溶于1升95%乙醇中。
2、0.3%过氧化氢：
取1ml 30%的过氧化氢，加100ml蒸馏水，摇匀。
六、思考题
1、不同原料的烫漂条件为何不同？
2、据你所观察的现象，叙述原料烫漂后的比重，颜色等方面的变化。
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