image-J软件分析western-blot灰度值.docx

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ImagJ是一款简单的图像处理与分析软件，可以用来进行WB定量分析。

一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析

1、File——》open打开WB片子

2、把图片转化成灰度图片

image——》type——》8-bit

3、消除背景影响

process——》subtractbackground选择50基本可以

4、设置定量参数

analyze——》setmeasurements，点击面积，平均密度和灰度值及IntegratedDensity

5、设置单位

analyze——》setscale，在“unitoflength”的方框里输入“pixels”

6、把图片转换成亮带，Edit——》invert

7、选择Freehand

Selection，尽量把条带圈起来，点击键盘m，出来IntDen灰度值

8、复制数据IntDen进行分析

二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析

1、File——》open打开WB片子

2、如条带不正，需修正

image——》transform——》rotate

调节angle值，直到条带水平为止

3、选中矩形选项，圈中第一个条带，然后analyze——》gels——》selectfirst

lane（快捷键ctrl+1），然后移动第一个条带上的矩形到第二个条带上，analyze——》gels——》selectsecond

lane（快捷键ctrl+2），最后analyze——》gels——》plotlanes

4、选中直线工具，将开口的波峰关闭

5、选中魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下面积，即条带的密度值

6、以第一个数值为基数，其他数值与第一个数值的比值为相对密度